山東省某規模雞場傳染性支氣管炎病毒診斷及細菌分離鑒定與藥敏分析

王苗利 陳靜 楚遵鋒 汪洋 王敏 李玉杰 劉麗平

山東省某規模雞場傳染性支氣管炎病毒診斷及細菌分離鑒定與藥敏分析

王苗利 陳靜*楚遵鋒 汪洋 王敏 李玉杰 劉麗平

（山東省動物疫病預防與控制中心 濟南 250022）

2018年7月，山東省諸城市某規模肉雞場出現個別雞癱瘓，稀便，采食量略微偏低，生長速度偏慢。大群無呼吸道癥狀。20日齡后發病數量居多，約占到大群的千分之五。實驗室對送檢的8只雞病料進行了病毒pcr鑒定、細菌分離鑒定及藥敏分析。鑒定得出傳染性支氣管炎病毒陽性，分離到革蘭氏陰性桿菌；通過生化鑒定結果為大腸桿菌；根據藥敏結果及病毒檢測結果對該肉雞場進行科學用藥，降低了濫用藥、過度用藥對雞場帶來的危害。

病毒檢測 細菌分離 藥敏分析 傳染性支氣管炎 大腸桿菌

雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis，IB)是雞群中常見的一種呼吸道癥狀的傳染病，其特點為急性爆發，傳染性很高，在我國及世界范圍內廣泛分布，給養雞業造成了很大的危害。其感染病原為禽傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)，IBV為RNA病毒，核酸為單股正鏈型，同時RNA病毒聚合酶在遺傳擴增過程中缺乏校正能力，使得IBV較容易發生變異，很多研究人員發現新的基因型和血清型[1]。研究人員發現不同血清型和基因型的毒株造成免疫保護不理想，這給本病免疫預防方面帶來了困難。所有日齡的雞均可以感染此病，但雛雞感染最嚴重和最容易，雞的呼吸系統和泌尿系統為IBV主要遭受侵害的兩個系統[2]，從而導致雞生長緩慢、料肉比降低等，剖檢可見氣管有出血，腎臟等內臟器官等發生病變，IBV感染雞群后造成雞免疫下降，從而造成大腸桿菌和霉形體的繼發感染，最終造成雞群大面積死亡，給養雞業造成巨大損失。不同研究人員已經從雞的呼吸系統、生殖系統、消化系統等組織器官中分離得到IBV，并且雞群感染IBV后會繼發多種疫病，給養雞業造成了巨大的損失，禽傳染性支氣管炎仍然是國內外研究的重要禽病之一。大腸桿菌病是養鴨場最常見的細菌病之一。大腸桿菌既可以水平傳播，也可以垂直傳播，主要引起鴨的卵黃吸收不全、心包炎、氣囊炎、肝周炎[3]，本菌由于很容易產生耐藥性，實際生產中感染途徑及感染原因不一，臨床治療越來越復雜。

近年來，禽病感染發病原因越來越復雜，病毒和細菌的混合感染臨床病例越來越常見，再加上抗生素的濫用，細菌的耐藥性越來越強，給臨床診斷帶來了很大的困難。因此，根據實驗室診斷以及科學的藥敏分析，合理的指導用藥治療，成為今后發展的趨勢，相信如果廣大養殖用戶都能科學、合理的用藥，一定會改善抗生素濫用、細菌耐藥性增強的現象，減少抗生素給禽以及人類帶來的危害，更好的應對禽場的疫病防控。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 熒光定量PCR儀(羅氏)、雞傳染性支氣管炎病毒熒光定量PCR試劑盒(生科尚儀)、顯色培養基、營養瓊脂、革蘭氏染色液、奧林巴斯顯微鏡、梅里埃生化及藥敏儀(VITECII compact60)。

1.2 臨床發病情況 2018年7月，山東省濰坊市諸城市某規模肉雞場出現個別雞表現癱瘓，稀瀉。經過調查了解，該場飼養14萬只817肉雞，近7天開始出現了個別雞癱瘓情況，病雞14日齡開始出現拉稀情況，采食量比正常雞群略微偏低，生長速度偏慢，發病雞約占到大群的千分之五；大群無呼吸道癥狀。實驗室接到場主送檢的樣本后，立即開展檢驗，并根據檢驗結果指導用藥，得到了良好的效果。

1.3 剖檢病變 腺胃壁增厚，腺胃腫脹，膽囊腫大，小腸壁增厚，內有大量液體。腎臟、氣囊、心包未見明顯病變。

1.4 病毒檢測 選取送檢病料的肝臟、淋巴結、脾臟、氣管等部位組織樣品，經過研磨處理后使用核酸提取儀提取病毒核酸，并根據檢測試劑盒的操作步驟進行操作，通過熒光定量PCR儀進行pcr擴增，并讀取結果。

1.5 細菌鑒定及藥敏分析 選取送檢病料的肝臟、肺臟在顯色平板上進行接種，挑取顯色平板上培養出的細菌進行革蘭氏染色，100倍油鏡觀察細菌形態。結合鏡檢結果及培養基培養出的細菌顏色、形態的不同，挑取單菌落，三線劃線法純化到營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板倒置放于溫箱中，37°C培養18~24h。根據染色鏡檢結果，選擇合適的鑒定、藥敏卡片；無菌操作，分別挑取純化的單菌落制備菌懸液，濃度控制在0.5~0.63Mc濃度，備裝鑒定卡片；將鑒定卡片和藥敏卡片分別插入制備好的菌懸液中，做好標記，裝載上機，5~18h后讀取結果。

2 結果

2.1 病毒檢測結果 經過病毒熒光pcr檢測，ct值為26.0，ct值小于30.0，判定為傳染性支氣管炎病原陽性。

2.2 病料接種培養結果 經過溫箱37°C培養18-24h后，取出平板，觀察到平板上長出兩種細菌，分別為紫紅色和黃色的菌落。

2.3 細菌染色鏡檢結果 經過革蘭氏染色，確定平板上長出的細菌為革蘭氏陰性桿菌。

2.4 細菌生化鑒定及藥敏分析 根據鏡檢結果，選擇GN革蘭氏陰性桿菌鑒定卡片和GN13革蘭氏陰性桿菌藥敏卡片，并制備菌懸液并上機；經過鑒定和藥敏分析，鑒定結果為大腸桿菌，見表1，藥敏結果見表2。

表1 大腸桿菌生化結果

表2 大腸桿菌藥敏結果

由表1可知，生化結果符合大腸桿菌生化譜，置信度極好的鑒定結果，符合率為99%；由表2可知，此大腸桿菌首選藥依次為頭孢吡肟、妥布霉素。

3 討論

結合此次藥敏實驗的結果，以及考慮較小的血藥濃度，建議此雞場選擇氨芐類抗生素治療，血藥濃度控制在1ug/ml，防止濫用藥、過度用藥，造成微生物生態失衡、耐藥菌株的增加的現象。另外，大腸桿菌是常見的傳染性病原菌，建議養殖場在日常中注意生物安全的科學管理，舍內、舍外定期消毒，減少病原菌的繁殖；及時清理病死禽及糞便，并做無害化處理；定期對場內鼠類等動物進行滅殺；減少外來獸醫等人員帶來的感染風險；減少與場外禽類的接觸風險。

4 結論

通過實驗室檢測，確定該雞場發病的致病菌原為傳染性支氣管炎病毒、大腸桿菌，推測是由傳染性支氣管炎病毒感染引起的，大腸桿菌繼發感染造成的雞群發病，建議加強飼養管理、合理用藥、定期消毒，減少外來風險。

[1] 1 Li M1, 2 Wang XY, 3 Wei P, 4 Chen QY, 5 Wei ZJ, 6 Mo ML. Serotype and genotype diversity of infectious bronchitis viruses isolated during 1985-2008 in Guangxi, China[J]. Arch. Virol：2012, 157: 457-474.

[2] Cavanagh D and Naqi S A. Infectious Bronchitis. In B.W.Calnek,H.J.Barnes, C.W. Breard,L.R. McDougald and Y.M.Saif(Eds.).Diseuses of Poultry：1997, 10th edn(pp.511-526).

[3] 宋修慶. 鴨場大腸桿菌病的危害與防治[J]. 禽病防治：2011(10):30-31.

（2018–10–29）

山東省家禽產業體系創新團隊：SDAIT-11-13；病死畜禽無害化處理技術推廣；國家重點研發計劃項目(The National Key Research and Development Program of China)-肉雞養殖廢棄物資源化利用技術集成與示范，項目編號：2018YFD0501405

S858.31

A

1007-1733(2019)08-0017-02