高活性枯草芽孢桿菌的篩選及其與黃芪相比較對生長小鼠免疫、生長指標的影響

鞠林 侯軍義 李延濤 張甜 林雪彥*

高活性枯草芽孢桿菌的篩選及其與黃芪相比較對生長小鼠免疫、生長指標的影響

鞠林①侯軍義②李延濤②張甜②林雪彥②*

（①山東省泰安市第一中學 271000 ②山東農業大學 山東 泰安）

為了研究益生菌和中草藥對小鼠生長和免疫指標的作用，本試驗選取黃芪和枯草芽孢桿菌作為研究材料。試驗對象為36只SPF昆明生長鼠，分為對照組A組，黃芪組B組以及枯草芽孢桿菌組C組，每組12只。C組與A組、B組相比，C組能顯著提高谷草轉氨酶、總蛋白、白蛋白的含量。C組的免疫球蛋白M含量顯著高于A組和B組。C組白細胞介素4的含量顯著高于對A組和B組(P<0.05)，白細胞介素2的含量也高于A組和B組(0.05

免疫指標 黃芪 枯草芽孢桿菌。

目前研究證明，枯草芽孢桿菌能直接穩定腸道微生態系統，恢復腸道的完整性。芽抱桿菌是具有較強的耐酸、耐鹽、耐高溫和耐擠壓等特性的革蘭氏陽性桿菌[1, 2]。用于詞料添加劑的芽胞桿菌是一種需氧的非致病菌。它可分泌多種胞外酶，能補充水生動物腸道內源酶的不足，促進淀粉、纖維素等分解，提高詞料消化率[3, 4]。黃芪作為飼料添加劑具有提高動物生產性能、增強機體免疫和抗病力等多方面的作用[5, 6, 7]。目前有研究證明日糧中添加黃芪，可提高蛋雞的產蛋率和飼料報酬，降低淘汰死亡率，并降低采食量和料重比。肉雞日糧中添加黃芪可提高肉雞生長性能和產肉性能，提高肝臟和血液抗氧化能力，改善免疫性能[8, 9]。

隨著畜禽集約化飼養程度的提高，防治動物群發病的藥物類飼料添加劑的應用越來越廣泛，需求量也日趨增加。因而研制能改善畜禽健康，提高生產性能且安全無毒的天然制劑已成為該領域的一個開發熱點[10, 11]。枯草芽孢桿菌和黃芪正是由于對生命體的腸道菌群有良好的作用在未來可能會被大量使用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 器材 一次性手套，一次性口罩，手術衣，手術剪，醫用酒精，酒精棉球，100g電子秤，1.5ml離心管，凍存管，液氮罐，血常規用自動生化分析儀(型號：7020；Hitachi)，酶聯免疫吸附測定試劑盒等。

1.1.2 中草藥與菌種 黃芪粉，細度：120目，易溶于水，購于泰安美興科貿有限公司。由自己篩選枯草芽孢桿菌，活性強，抑菌圈大。

1.1.3 試驗動物 昆明SPF生長鼠36只，購于濟南朋悅實驗動物繁育有限公司。

1.1.4 日糧 SPF鼠專用日糧，購于濟南朋悅實驗動物繁育有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組與管理 將36只試驗鼠分為3組，分別為對照組，黃芪組，枯草芽孢桿菌組各12只。采用自由飲水的方法將黃芪與枯草芽孢桿菌分別按照前人研究以及相關產品的用量加入飲水中。本次試驗添加量為這兩種產品每1g分別溶于1000ml純凈水中。每只試驗鼠每次供水200ml，并且每隔3d更換一次。3組的飼養環境以及日糧完全相同，每隔1天更換新料并且記錄采食量，每隔3d稱重并記錄體重變化以及更換墊料。

1.2.2 試驗過程 本次試驗在山東農業大學動物科技學院鼠房代謝室進行，在試驗開始前先對鼠房進行消毒，對飲水瓶以及鼠籠進行清洗消毒，檢查鼠房通風，光照溫度以及加濕器等設備以確保試驗順利開始且不影響后續工作。在試驗鼠到的第1天先對其稱重記錄初始重，每隔1d于固定時間下午3時更換飼料并記錄采食量，每隔3d于固定時間下午3時稱鼠重，更換墊料，更換飲水并記錄數據，并且及時檢查鼠房內通風，光照溫度以及加濕器等設備是否正常。

1.2.3 抗疲勞測試 隨機從每組中選4只進行抗疲勞測試，將3個組的試驗鼠同時分別放入相同溫度的水中，開始記錄時間以及試驗鼠的狀態。觀察得出結果：在所選的試驗鼠中，抗疲勞能力最強的是對照組，其次是黃芪組，枯草芽孢桿菌組最弱。

1.2.4 采樣 在飼喂至第23天進行采樣，采樣前先進性稱重，采樣內容主要包括：血液、肝臟、胰腺、十二指腸、空腸以及糞便。

2 結果

2.1 采食量與體重 各組在采食量和體重變化中的對比如表1和表2所示，血液指標如表3所示，免疫指標和白細胞介素分別如表4和表5所示。

表1 采食量對比 （g）

表2 體重對比 （g）

由表1和表2可知，在采食量對比中B組在該試驗期間高于A組和C組，而C組對于采食量沒有突出作用，說明黃芪在本次試驗中有提高采食量的作用；在體重對比中C組較高于B組而略高于A組，B組對于體重增長沒有突出作用，說明在本次試驗中枯草芽孢桿菌在提高增重方面優于黃芪。

2.2 血液指標 見表3。

表3 各組血液指標對比

注：相同字母表示影響不顯著(P>0.05)，不同字母表示影響顯著(P<0.05)，0.05

由表3可知，在所測的6個血液指標中，添加枯草芽孢桿菌能夠顯著提高AST、TP、ALB的含量，與A組、B組差異顯著(P<0.05)，A組與B組之間無顯著差異(P>0.05)。

2.3 免疫指標 見表4。

表4 各組免疫指標對比 (μg/L)

由表4可知，在所測的三個指標中，添加枯草芽孢桿菌的C組IgM含量顯著高于A組和B組(P<0.05)，A組與B組之間無顯著差異(P>0.05)。

2.4 白細胞介素 見表5。

表5 各組白細胞介素指標對比 (ng/L)

由表5可知，添加枯草芽孢桿菌的C組IL-4的含量顯著高于對A組和B組(P<0.05)，IL-2的含量也高于A組和B組(0.05

3 討論

（1）本研究將黃芪和枯草芽孢桿菌加入飲水中供試驗鼠飲用，期間觀察試驗鼠的生長、生理以及健康狀況，最終采樣進行對比分析。由上文研究內容及結果可知，在采食量上，黃芪組的采食量高于對照組和枯草芽孢桿菌組，說明添加黃芪能夠提高動物采食量。在體重增長上，黃芪組稍低于對照組與枯草芽孢桿菌組，這種現象有可能是將日糧中更多的營養物物質用于提升自身免疫力以及促進代謝。（2）根據血液指標與免疫球蛋白的分析，在飲水中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著提高AST、TP、ALB、IgM以及IL-2和IL-4的含量，這些指標濃度的增加對將會直接影響動物的免疫力，因此對于本次試驗而言，添加枯草芽孢桿菌的C組免疫力強于對照組A組與添加黃芪的B組。

4 結論

在飲水中添加枯草芽孢桿菌對免疫力的增強效果優于添加黃芪的效果，因此本次試驗的結果將作為日后繼續研究相關方面的參考依據。

[1] 張偉慶, 黃福佳, 楊蕭華. 枯草芽孢桿菌工程菌(WＢ800Ｎ-CC31)對大鼠免疫指標的影響[J]. 黑龍江畜牧獸醫, 2017(5下): 184-186.

[2] 惠明, 竇麗娜, 田青等. 枯草芽孢桿菌的應用研究進展[J]. 安徽農業科學, 2008, 36(27): 11623-11624,11627.

[3] 仇麗. 枯草芽孢桿菌在養殖中的應用[J]. 漁業現代化, 2002(4).

[4] 余東游, 毛翔飛, 秦艷等. 枯草芽孢桿菌對肉雞生長性能及其抗氧化和免疫功能的影響[J]. 中國畜牧雜志, 2010, 46(3): 22-25.

[5] 王迪, 張文風, 張杰. 黃芪配甘草對小鼠細胞免疫功能的影響[J]. 長春中醫藥大學學報, 2006, 22(3): 42-43.

[6] 王晨等. 黃芪及其復配組合調節正常小鼠免疫功能的探索[J]. 中國現代藥, 2018, 5: 20, (5).

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[8] 王永芬, 喬宏興. 益生菌-黃芪復合物生物制劑的制備及其對肉仔雞的影響[J]. 中國農業大學學報, 2011, 16(1): 54-59.

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[10] 張萍萍, 張晗. 大運動量期間補充黃芪飼料對小鼠身體功能恢復的影響[J]. 中國老年學雜志, 2018,6,38.

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致 謝

感謝本次舉辦的科技創新大賽給了我一個鍛煉與提升自身能力以及開闊眼界的機會，感謝山東農業大學給我提供了良好的試驗環境以及學長學姐提供相關的技術指導，最應該感謝的是我的母親林雪彥教授，含辛茹苦的養育以及無微不至的教導使我能夠清楚的認識到漫長的人生道路該如何去走，感謝她對我本次試驗的大力支持。最后，感謝我的所有老師以及同學們，是他們良好的教育和品行給我創造了美好的學習環境，感恩，感謝，感激。

（2019–04–25）

S852.61+6

A

1007-1733(2019)08-0013-03