不同稀釋倍數(shù)和容器對(duì)蛋種雞和肉種雞精液品質(zhì)的影響

秦國(guó)棟 史雪萍 張彩燕 李莉 吳雪松 王述柏

不同稀釋倍數(shù)和容器對(duì)蛋種雞和肉種雞精液品質(zhì)的影響

秦國(guó)棟 史雪萍 張彩燕 李莉 吳雪松 王述柏*

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 青島 266109）

本試驗(yàn)旨在研究不同稀釋倍數(shù)和容器對(duì)蛋種雞和肉種雞精液品質(zhì)的影響。分別采集45周齡海蘭褐父母代蛋種公雞和AA+父母代肉種公雞精液，采用生理鹽水對(duì)精液按照不同稀釋比例進(jìn)行等溫及時(shí)稀釋?zhuān)胺N雞和肉種雞采集的精液均分6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，原精液：生理鹽水比例分別為1:0、1:1、1:5、1:10、1:50、1:100。保存精液的容器分別采用塑料集精管和玻璃集精管，精液稀釋后立即檢測(cè)精子活力以及畸形率。結(jié)果表明，蛋種雞、肉種雞精液稀釋倍數(shù)1:50和1:100組比較，精子活力和畸形率均無(wú)顯著差異(P>0.05)；相同稀釋倍數(shù)下，塑料集精管和玻璃集精管比較，精子活力和畸形率亦均無(wú)顯著差異(P>0.05)；稀釋倍數(shù)為1:0、1:1、1:5、1:10的精液，精液密度過(guò)大無(wú)法檢測(cè)。結(jié)論：海蘭褐殼父母代種雞和AA+父母代肉種雞的新鮮精液，便于進(jìn)行精液品質(zhì)鏡檢的適宜稀釋倍數(shù)為原精液:稀釋液≥1:50，精液短時(shí)間保存集精管采用玻璃及塑料材質(zhì)均可。

種公雞 精子活力 畸形率 稀釋倍數(shù) 精液容器

精液品質(zhì)檢查是對(duì)種公雞進(jìn)行選種的重要環(huán)節(jié)，精子密度、活力和畸形率等指標(biāo)是衡量精液品質(zhì)的重要指標(biāo)[1]。禽類(lèi)精液具有射精量少、密度大、精子對(duì)環(huán)境敏感性強(qiáng)等特點(diǎn)，目前對(duì)禽類(lèi)精液進(jìn)行品質(zhì)檢查的方法有CASA計(jì)算機(jī)輔助精子分析儀法、Makler精子計(jì)數(shù)池法、吸光光度法和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法[2]。計(jì)算機(jī)輔助分析法，檢測(cè)數(shù)據(jù)較為精確，但儀器價(jià)格昂貴且技術(shù)要求高，難以普及；Makler精子計(jì)數(shù)池法，存在因計(jì)數(shù)池深度太淺(10μm)影響精子的正常運(yùn)動(dòng)從而使精子所測(cè)活力比真實(shí)值低的問(wèn)題[3]。而血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室高度為0.1mm，其高度不會(huì)影響精子尾部的鞭打，精子在其中可自由運(yùn)動(dòng)。顯微鏡鏡檢方法具有操作簡(jiǎn)單，節(jié)約成本優(yōu)點(diǎn)，仍然是目前生產(chǎn)中常用的檢查方法[4]。雞精液的精子密度一般在(2~4)×109/mL[5]。因精子密度過(guò)大，原精液不進(jìn)行稀釋難以進(jìn)行鏡檢，因此，適宜的稀釋倍數(shù)是實(shí)施精液鏡檢的關(guān)鍵因素。迄今有關(guān)不同種類(lèi)及品種家禽精液品質(zhì)檢查的適宜稀釋倍數(shù)研究報(bào)道很少。本試驗(yàn)研究了不同精液稀釋倍數(shù)和保存容器對(duì)種公雞精液品質(zhì)的影響，旨在為生產(chǎn)或科學(xué)試驗(yàn)中種公雞精液品質(zhì)檢查工作的順利開(kāi)展提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 45周齡海蘭褐父母代種公雞8只和AA+父母代種公雞8只。

1.2 儀器設(shè)備 OLPUS顯微鏡、恒溫水浴鍋、采精杯、10ml玻璃集精管、10mL塑料集精管、血球計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、載玻片、蓋玻片等。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用背腹式按摩法分別采集8只海蘭褐父母代種公雞和8只AA+父母代種公雞的精液，兩種公雞的精液分別混勻，用移液槍取1 ml蛋種雞精液分別加入塑料和玻璃集精管中，用移液槍取1 ml肉種雞精液加入玻璃集精管，采用生理鹽水作為稀釋液，對(duì)精液按照不同稀釋比例進(jìn)行等溫及時(shí)稀釋?zhuān)瑑煞N精液均分6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，原精液：生理鹽水比例分別為1:0、1:1、1:5、1:10、1:50、1:100。采用OLPUS顯微鏡檢查500個(gè)精子，計(jì)算精子活力和精子畸形率。自采精至稀釋后鏡檢，間隔時(shí)間保持在5min。

1.4 精子活力的檢測(cè) 采用OLPUS顯微鏡檢查精子的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，記錄直線運(yùn)動(dòng)、非直線運(yùn)動(dòng)精子數(shù)(包括死精子，擺動(dòng)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的精子)數(shù)，計(jì)算精子活力[6]。

1.5 精子畸形率測(cè)定 采用OLPUS顯微鏡檢查精子形態(tài)，記錄不同類(lèi)型的精子數(shù)量，畸形精子的判定標(biāo)準(zhǔn)及精子畸形率的計(jì)算參見(jiàn)文獻(xiàn)[6]。

1.6 數(shù)據(jù)處理 用Excel2016軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)分析組間差異顯著性，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同稀釋倍數(shù)和保存容器對(duì)種雞精子活力的影響 不同稀釋倍數(shù)、保存容器對(duì)種雞精子活力的影響見(jiàn)表1。原精液以及稀釋倍數(shù)為1:1、1:5、1:10組的精液，由于精子密度過(guò)大看不清，難以檢測(cè)計(jì)數(shù)精子活力。塑料集精管存放的蛋種雞稀釋精液，1:50和1:100組之間，精子活力無(wú)顯著差異(P>0.05)；玻璃集精管存放的肉種雞和蛋種雞稀釋精液，1:50和1:100組之間，精子活力亦無(wú)顯著差異(P>0.05)；相同稀釋倍數(shù)下，玻璃集精管存放的蛋種雞精液的精子活力略高于塑料集精管(P>0.05)。

表1 不同稀釋倍數(shù)和保存容器對(duì)種公雞精子活力的影響(%)

注：“-” 為精子密度過(guò)大，難以檢測(cè)精子活力。同行數(shù)據(jù)無(wú)肩標(biāo)小寫(xiě)字母表示差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 不同稀釋倍數(shù)、保存容器對(duì)種公雞精子畸形率的影響 不同稀釋倍數(shù)、保存容器對(duì)種公雞精子畸形率的影響見(jiàn)表2。原精液以及稀釋倍數(shù)為1:1、1:5、1:10組的精液，由于精液密度過(guò)大，精子形態(tài)看不清楚，畸形率無(wú)法檢測(cè)。塑料集精管、玻璃集精管存放的蛋種雞稀釋精液，1:50和1:100組之間精子畸形率均無(wú)顯著差異(P>0.05)；玻璃集精管存放的肉種雞稀釋精液精子畸形率1:50和1:100組之間亦無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 不同稀釋倍數(shù)和保存容器對(duì)種公雞精子畸形率的影響(%)

3 討論

3.1 不同稀釋倍數(shù)和保存容器對(duì)種公雞精子活力的影響 池春梅試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)生理鹽水與精液按照1:1稀釋效果最好，比原精液的受精率高3.57%[7]，滿都拉研究表明，稀釋不同倍數(shù)的種公羊精液，精子活力有顯著差異，稀釋液在室溫下保存，以稀釋8倍的效果較好，精子存活時(shí)間達(dá)24h，精子活力高，稀釋4倍與16倍的精液，保存結(jié)果亦良好[8]。祝盤(pán)大報(bào)道，羊精液稀釋2~128倍，無(wú)論是在室溫或低溫下保存，精子生存時(shí)間與存活指數(shù)均較原精液為高，但稀釋倍數(shù)過(guò)高，精子活力會(huì)受到影響，未經(jīng)稀釋的原精掖，在室溫下保存2h，便不能用來(lái)輸精[9]。彭秀麗(2001)采用1%NaCl做為稀釋劑，雞精液分別按稀釋倍數(shù)1:1、1:1.5、1:2稀釋?zhuān)l(fā)現(xiàn)1:1稀釋時(shí)種蛋受精率較高，精子活力較強(qiáng)[10]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，公雞原精液、1:1、1:5、1:10稀釋倍數(shù)的精液，精子密度過(guò)大在顯微鏡下難以計(jì)數(shù)，在玻璃和塑料兩種材質(zhì)的集精管中稀釋倍數(shù)為1:50、1:100的精液，稀釋后立即檢測(cè)精子活力，發(fā)現(xiàn)稀釋倍數(shù)和容器不同，精子活力無(wú)顯著差異。

3.2 不同稀釋倍數(shù)和保存容器對(duì)種公雞精子畸形率的影響 精子形態(tài)檢測(cè)是評(píng)估精子功能最有價(jià)值的指標(biāo)之一，形態(tài)是否正常與種蛋受精率有直接關(guān)系，畸形精子越少種蛋受精率越高[11]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，海蘭褐父母代種公雞及AA+父母代肉種公雞原精液、稀釋倍數(shù)為1:1~10的精液，400倍顯微鏡下難以看清楚精子形態(tài)，原精液與生理鹽水按1:50、1:100稀釋倍數(shù)的稀釋精液，鏡檢精子形態(tài)清晰便于觀察，精液在玻璃和塑料兩種材質(zhì)的集精管中進(jìn)行稀釋后立即鏡檢，精子畸形率無(wú)顯著差異。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，海蘭褐父母代種公雞和AA+父母代種公雞進(jìn)行精液品質(zhì)檢查的適宜稀釋倍數(shù)為原精液:稀釋液≥1:50；采用玻璃及塑料材質(zhì)的集精管短期保存精液，精子活力和畸形率無(wú)顯著差異。

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（2019–03–29）

青島農(nóng)業(yè)大學(xué)創(chuàng)新立項(xiàng)(201710435011)；山東省家禽產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(SDAIT-11-14)

S831.3

A

1007-1733(2019)08-0008-03