ADAM12L在胃癌中的表達及臨床意義

王艷平，趙 靜，紀元博

胃癌在臨床比較常見，病死率較高，特別是在發展中國家，是全球癌癥相關死亡的第三大原因。胃癌的預后通常較差，特別是晚期患者[1]。目前，晚期胃癌的常規治療包括手術切除和圍手術期化療[2]。用于胃癌診斷和治療的生物標志物，包括碳水化合物抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、CA19-9和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)，都存在敏感性和特異性問題。因此，迫切需要進一步研究揭示遺傳改變，鑒定新的生物標志物以及探索與胃癌相關的途徑[3]。解整合素—金屬蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAMs)是30多種蛋白質的大家族，屬于鋅依賴性蛋白酶，具有黏附、融合和信號傳導活性的多結構域蛋白[4]。已有文獻顯示，ADAM12L在乳腺癌等中高表達[5]，但其在胃癌中表達情況鮮有報道。本研究采用qRT-PCR檢測了ADAM12L在胃癌組織以及癌旁組織中的表達情況，并分析其與胃癌臨床病理特征之間的關系，為臨床治療提供參考。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2013年5月至2015年5月在我院外科行普通外科切除的96例胃癌患者，均經病理確診。術前均接受化療和放療，其中男57例，女39例，年齡24～81歲，中位年齡57歲，見表1。胃癌組織和癌旁組織切除后，放入液氮罐-80 ℃凍存。

1.2 qRT-PCR測定ADAM12LmRNA表達情況Trizol提取癌組織、癌旁組織總RNA，測定純度。按照逆轉錄試劑盒說明書逆轉錄生成cDNA。采用light cycleR 96實時熒光定量PCR儀(Roche Diagnostics，德國)進行基因擴增，引物序列由Santa Cruz公司提供。ADAM12L上游：5’-GAACCATCACCCTGCAACCT-3’，下游：5’-AAGCCTAGCTAGAGGACCGT-3’，產物107 bp。β-actin上游：5’-CAAGCCGTAGGACCCAGTTT-3’，下游：5’-CACAATGACGTGTTGCTGGG-3’，產物232 bp。采用相對定量2-△△Ct法比較目的基因水平。

1.3 Western blot方法檢測蛋白的表達常規方法提蛋白質，調整各樣本蛋白總量，參照說明書進行SDS-PAGE凝膠電泳，參照說明分別孵育一抗和二抗，Bio-Rad凝膠成像系統成像拍照，以β-actin為內參分析待測蛋白相對表達值。

2 結果

2.1 癌組織和癌旁組織ADAM12LmRNA表達癌組織的ADAM12LmRNA表達水平為(3.12±0.87)，癌旁組織ADAM12LmRNA表達水平為(1.02±0.57)，癌組織的ADAM12LmRNA表達水平明顯高于癌旁組織ADAM12LmRNA的表達水平(P<0.05)。

2.2 癌組織和癌旁組織ADAM12L蛋白表達癌組織的ADAM12L蛋白表達水平為(2.08±0.35)，癌旁組織ADAM12L蛋白表達水平為(0.82±0.25)，癌組織的ADAM12L蛋白表達水平明顯高于癌旁組織ADAM12L蛋白表達水平(P<0.05)，見圖1。

1：癌旁組織；2：癌組織。圖1 Western blot方法檢測蛋白的表達

2.3 ADAM12L表達與胃癌臨床病理特征表1顯示，ADAM12L基因表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小無相關性(P>0.05)，而與組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移、浸潤程度存在一定的相關性(P<0.05)。

表1 ADAM12L表達與臨床病理特征的關系 例

2.4 生存率比較以96例胃癌組織中ADAM12L mRNA表達量的中位數3.12為界，≥3.12為高表達組，<3.12為低表達組。ADAM12L基因高表達患者的36個月存活率為79.17%(9/24)，低表達患者的36個月存活率為56.95%(41/72)。兩組整體生存曲線分布比較，差異有統計學意義(P<0.05)。其中低表達的患者生存狀況要明顯好于高表達患者。見圖2。

圖2 生存曲線

2.5 多因素Cox回歸分析Cox逐步多因素分析顯示，組織分學分級、臨床分期、淋巴結轉移、浸潤程度和ADAM12L水平是重要的預測不良事件的指標。

表2 多因素Cox回歸分析

注：該Cox回歸模型還包括了年齡、性別、腫瘤大小等。

3 討論

人ADAM12基因位于染色體10q26上，編碼兩種不同形式的蛋白質：跨膜形式，ADAM12L和剪接分泌形式ADAM12S，兩者都是活躍的金屬蛋白酶[6]，其中ADAM12L與肝癌、卵巢癌、肺癌、結直腸癌、前列腺癌等的發生、進展相關[7]，但尚沒有有關胃癌的報道。本研究結果表明，ADAM12LmRNA、蛋白在胃癌組織中高表達，提示ADAM12L的高表達可能促進了胃癌的發生和進展。ADAM12L基因表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小不相關(P>0.05)，而與組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移、浸潤程度存在一定的相關性(P<0.05)。有研究顯示，基底細胞樣乳腺癌組織的ADAM12L蛋白與mRNA水平明顯高于癌旁組織，且與淋巴結轉移和臨床分期存在一定的相關性[7]。本研究結果與其一致，說明ADAM12L表達水平可以作為臨床診斷、預測以及療效監測的新標志物。

惡性腫瘤的發生和進展包含了多因素、多階段的過程，并由多種因素彼此作用[8-9]。研究顯示，ADAM12高表達與腫瘤進展程度有關，并與其他指標存在關聯性。Narita D等采用定量逆轉錄聚合酶鏈反應免疫組織化學證實，ADAM12L在腫瘤細胞和腫瘤周圍成纖維細胞中顯示出中度至強度的免疫表達，其中導管癌具有更高的ADAM12L表達[10]。Wang J等通過免疫組織化學和Western印跡檢查蛋白質水平，發現ADAM12L和ADAM12S參與腫瘤侵襲。此外，ADAM12L被發現與垂體腺瘤中Ki-67增殖指數呈正相關[11]。這都提示了ADAM12 的表達上調是腫瘤的發生和進展的重要因素[12]。由于ADAM12對細胞黏附作用存在一定的影響，而細胞黏附促進了腫瘤的發生和進展，由此說明ADAM12 表達上調可能通過細胞黏附作用促使胃癌轉移[13]。本研究3 a隨訪顯示，ADAM12L基因高表達患者的36個月存活率明顯低于低表達的患者，提示ADAM12L與患者的生存期相關。Aghababaei M等研究發現，ADAM12L和ADAM12S在人體內高度表達，促進細胞遷移和侵襲，提示ADAM12L可能在調節增殖、侵襲行為方面發揮核心作用[14]。本研究通過Cox逐步多因素分析顯示，組織分學分級、臨床分期、淋巴結轉移、浸潤程度和ADAM12L水平是重要的預測不良事件的指標，這也間接說明ADAM12L可以反映胃癌患者預后，并可以作為胃癌治療的新靶點。

總之，ADAM12L無論是在基因水平還是蛋白質水平方面，其在胃癌組織表達均上調，而且其上調與胃癌的發生、進展以及臨床預后密切相關，提示ADAM12L可以作為判斷胃癌進展、預后的新指標。