四川3295例β地中海貧血基因檢測結(jié)果分析

謝雅梅 張宇

（成都市婦女兒童中心醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心 四川 成都 610091）

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月-2018年6月在成都市婦女兒童中心醫(yī)院進(jìn)行地貧基因檢查的3295例樣本為研究對象，年齡16天-65歲，其中男性1054例，女性2241例。

1.2 儀器與試劑

Luminex液相芯片平臺(tái)200，PCR儀器（BIO-RAD）

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

標(biāo)本基因組DNA提取：按照Qigen試劑盒全血DNA提取試劑盒操作進(jìn)行。地中海貧血基因檢測：1）PCR：同一受檢DNA樣本分別使用試劑盒的PCR MixA和PCR MixB擴(kuò)增，反應(yīng)體系均為25μl反應(yīng)條件分別為A：37℃ 10min；95℃ 10min；95℃30sec,52℃ 45sec,72℃ 30sec,30個(gè)循環(huán)；95℃ 30sec，65℃45sec，72℃ 30sec,25個(gè)循環(huán)；72℃ 5min；4℃保存。B：37℃10min；95℃ 10min；97℃ 20sec，72℃ 2min 50sec,40個(gè)循環(huán)；72℃ 5min；4℃保存。2）雜交：分別取A和B管PCR產(chǎn)物2.5μl和45μl雜交液雜交，條件95℃5min，60℃15min。3）顯色：按照試劑盒要求制備顯色工作液，雜交后向每個(gè)反應(yīng)孔中加入25μl顯色工作液，混勻后60℃顯色7min。4）上機(jī)檢測，判讀結(jié)果。具體操作嚴(yán)格按照試劑盒提供說明書進(jìn)行，且每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰陽性質(zhì)控和空白對照。

2.結(jié)果

2016年1 月-2018年6月檢測樣本3295例，共檢測單純型β地中海貧血基因突變1079例，陽性率32.75%。β地中海貧血基因突變檢測出18基因型，其中βCD17/β基因型最常見，檢出388例，受檢人群發(fā)生率11.78%，占β地中海貧血基因突變35.96%。其次是βCD41-42/β和βⅣS-Ⅱ-654/β基因型，分別占25.95%和25.12%。且檢出重型β地貧患者純合子和雙重雜合突變基因型共6例，3例與CD17突變有關(guān)。具體基因型分布見表。

表 β地中海貧血基因突變類型分布情況

3.討論

β地中海貧血一般由β珠蛋白基因點(diǎn)突變引起，少數(shù)由β珠蛋白基因缺失引起。本實(shí)驗(yàn)共檢測出17種點(diǎn)突變和1種基因缺失。其中β0/N和β+/N雜合子一般無癥狀或者表現(xiàn)為輕度地中海貧血。而雙重雜合子β+/β0和純合子β0/β0，β+/β+一般表現(xiàn)為重型地中海貧血。β地中海貧血基因突變存在明顯的地域性，在廣東，廣西，海南地區(qū)以βCD41-42/β最為多見[1-3]，福建地區(qū)以βⅣS-Ⅱ-654/β最為多見[4]。而本實(shí)驗(yàn)以βCD17/β最為多見，與學(xué)者報(bào)道貴州地區(qū)β地中海貧血基因突變分布情況相同[5]，且檢出重型β地貧患者純合子和雙重雜合突變基因型共6例，3例與CD17突變有關(guān)。因此對于β地中海貧血篩查意義宣傳極其重要,增強(qiáng)攜帶者的高危夫婦篩查和宣傳教育，對于預(yù)防和避免重型β地中海貧血患兒出生，減少社會(huì)和家庭負(fù)擔(dān)有重要指導(dǎo)意義。

但本研究樣本主要來源于成都及其周邊地區(qū)人群，不能全部代表四川的總體基因分布，后期還需要進(jìn)一步收集檢測，為四川提供地中海貧血基因分布數(shù)據(jù)，宣傳優(yōu)生優(yōu)育和進(jìn)行產(chǎn)前篩查措施。