CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁組織中表達相關性與預后的影響

馬秀麗　劉偉昌　馮園終　劉虎　陳慶明　趙玉梅

[摘要] 目的 探討CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁組織中表達相關性與預后的影響因素。 方法 該研究于2016年7月—2017年7月共方便選取胃癌患者116例，根據術后患者的復發情況，將其分為術后復發組（52例）和術后未復發組（64例）。應用免疫組織化學SP法測定CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁組織中的表達。 結果 與未復發組相比，復發組胃癌組織的E-Cadherin及CD68陽性表達分別為61.5%、59.6%，顯著增加，差異有統計學意義（χ2=9.63、8.12，P<0.05）。與未復發組相比，復發組的胃癌旁組織E-Cadherin及CD68陽性表達分別為65.4%、78.8%，顯著增加，差異有統計學意義（χ2=9.89、12.12，P<0.05）。復發組胃癌組織中出現淋巴結轉移、III～IV期、浸潤深度≥5 cm與沒有淋巴結轉移、Ⅰ～Ⅱ期、浸潤深度≤5 cm，E-Cadherin及CD68的表達顯著增加，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 胃癌組織中腫瘤相關巨噬細胞浸潤的機制及E-Cadherin的過表達可明顯延長胃癌患者的生存率。

[關鍵詞] CD68;E-Cadherin;胃癌;預后

[中圖分類號] R735.2? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2019）05（c）-0024-03

[Abstract] Objective To investigate the relationship between CD68 and E-Cadherin expression and prognosis in gastric cancer and adjacent tissues. Methods From July 2016 to July 2017， 116 patients with gastric cancer were convenient selected and enrolled. According to the recurrence of postoperative patients， they were divided into postoperative recurrence group （52 cases） and postoperative non-recurrence group （64 cases）. The expression of CD68 and E-Cadherin in gastric cancer and adjacent tissues was determined by SP immunohistochemistry. Results Compared with the non-recurrent group， the positive expressions of E-Cadherin and CD68 in the recurrent gastric cancer tissues were 61.5% and 59.6%， respectively， and the difference was statistically significant （χ2=9.63， 8.12， P<0.05）. Compared with the non-recurrent group， the positive expressions of E-Cadherin and CD68 in the paracancerous tissues of the recurrent group were 65.4% and 78.8%， respectively， and the difference was statistically significant （χ2=9.89， 12.12， P<0.05）. Lymph node metastasis occurred in the recurrent gastric cancer， stage III-IV， invasive depth ≥5 cm and no lymph node metastasis， stage I-II， invasive depth less ≤5 cm， E-Cadherin and CD68 expression increased significantly， statistically significant （P<0.05）. Conclusion The mechanism of tumor-associated macrophage infiltration and the overexpression of E-Cadherin in gastric cancer can prolong the survival rate of gastric cancer patients.

[Key words] CD68; E-Cadherin; Gastric cancer; Prognosis

胃癌是當今世界范圍內消化道最常見的惡性腫瘤之一，其預后較差，5年生存率較低[1]。影響胃癌預后的因素很多，但腫瘤細胞的浸潤和轉移是導致胃癌患者死亡率升高的主要因素[2]。E-Cadherin是一種細胞粘附蛋白，主要表達于上皮細胞連接部，參與調節細胞的分化，維持上皮結構，并與腫瘤侵襲和轉移有關[3]。目前研究表明粘附分子參與了胃癌細胞的轉移過程[4]。腫瘤組織內及其周圍的巨噬細胞（TAM）參與腫瘤發展的多個環節，并在促進血管和淋巴管生成過程中起重要作用[5]。胃癌組織中高密度浸潤的TAM能促進腫瘤的復發，而高密度浸潤TAM是胃癌病人預后不良的重要因素。故該研究方便選取2016年7月—2017年7月該院收治的116例患者為研究對象，探討胃癌的發生發展機制對于拓展胃癌治療新思路和改善胃癌患者預后具有十分重要的意義。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

該研究方便選取胃癌患者116例，根據術后患者的復發情況，將其分為術后復發組（52例）和術后未復發組（64例）。入組標準：①年齡20～80歲，性別不限;②行胃癌根治術后，術式包括全胃切除術，胃大部切除術，R0（切緣陰性），切緣均未見癌組織浸潤，進行淋巴結清掃D1-D0;③所有患者均未行術前新輔助放療化療，TNM分期為T1-T2N0期患者術后未進行輔助化療或免疫治療者，余分期者不限（參考2013年第2版NCCN胃癌治療指南）;④隨訪3年以上（包括術后3年內死亡病例），資料完整者[6]。排除標準：①胃癌分期較晚者行姑息性手術者或已有周圍臟器侵犯行聯合臟器切除者;②TNM分期為T1-T2N0期患者術前、術后已行輔助放化療或免疫治療者;③隨訪不足3年;④資料不完整者[7]，所選病例均通過倫理委員會的批準，患者及家屬均知情同意。

1.2? 研究方法

1.2.1? 組織芯片制備? 收集武威市人民醫院符合該研究的胃癌病例及相關組織蠟塊，分別挑選出胃癌組織及其癌旁組織蠟塊，將組織芯片設計成2組，一組為癌周圍正常組織芯片組，另一組為癌組織芯片，副主任醫師閱片標記靶點來制作組織芯片，將構建好的組織芯片蠟塊，快速4 μm厚連續切片，并拷片，免疫組織化學染色步驟采用SP法，組織芯片切片經脫蠟、梯度精水化后進行抗原修復，具體為pH 6.0枸櫞酸鈉緩沖液抗原修復，微波爐加熱。抗原修復盒內液體溫度保持在95℃左右并持續20 min，試劑A阻斷內源性過氧化物酶活性，試劑B封閉血清，一抗4℃過夜，試劑C信號放大，DAB染色及封片。所選抗體CD68和E-Cadherin均購自福州邁新生物技術公司，均為工作液。

1.2.2? 結果判定? 所有標本參照2010年WHO最新分類進行分型。免疫組化結果根據陽性細胞數目比例及著色強度判斷，<5%為0 分，5%～25%為1 分，26%～50%為2分，>50%為3 分。未著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。以二者得分相乘，0 分記為陰性（-），1～3 分為弱陽性（1+），4 分為中度陽性（2+），6分和9分為強陽性（3+）[8]。

1.2.3? 觀察指標? 應用胃癌組織及其癌周正常組織制作組織芯片，進行免疫組織化學染色及其結果判讀。主要觀察指標：E-Cadherin及CD68的異常表達可以預測胃癌患者術后的復發率。次要觀察指標：觀察E-Cadherin及CD68對胃癌組織的浸潤深度、淋巴轉移數量和TNM分期的影響。

1.3? 統計方法

應用SPSS 21.0統計學軟件進行數據統計學分析。對計量資料進行單樣本K-S正態性檢驗，正態分布數據以（x±s）表示，比較采用獨立樣本t檢驗;計數資料以“率”描述，比較采用χ2檢驗/Fisher分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2? 結果

2.1? 胃癌組織E-Cadherin及CD68的表達情況

與未復發組相比，復發組胃癌組織的E-Cadherin及CD68陽性表達顯著增加（P<0.05）。見表1。

2.2? 胃癌旁組織E-Cadherin及CD68的表達情況

與未復發組相比，復發組的胃癌旁組織E-Cadherin及CD68陽性表達顯著增加（P<0.05）。見表2。

2.3? 復發組胃癌組織E-Cadherin及CD68陽性表達

復發組胃癌組織中出現淋巴結轉移與沒有淋巴結轉移，E-Cadherin及CD68的表達顯著增加，差異有統計學意義（P<0.05）。III～IV期與Ⅰ～Ⅱ期相比，胃癌組織E-Cadherin及CD68表達顯著增加，有統計學意義（P<0.05）。與胃癌組織的浸潤深度≤5 cm相比，浸潤深度≥5 cm顯著增加，差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3? 討論

胃癌患者的癌組織及癌周圍正常組織上皮細胞均有E-Cadherin的表達，在胃癌術后未復發組和復發組之中E-Cadherin的異常表達存在明顯差異，并且在胃癌術后未復發和復發的患者中，對比不同的癌組織浸潤深度、淋巴轉移數量和TNM分期，隨著浸潤深度、淋巴結轉移數量的增加以及胃癌的不斷進展，E-Cadherin的異常表達的也呈逐漸增加趨勢。同時發現胃癌患者TNM分期越晚其癌組織內浸潤的巨噬細胞遠遠多于癌周圍正常組織，這種對胃癌細胞喪失吞噬、殺傷功能的免疫細胞在腫瘤微環境中促進了胃癌組織的進展和轉移，進而導致胃癌患者術后的復發率增高。

目前胃癌的發病率逐年提升，該研究通過對胃癌患者癌組織中及癌旁正常組織中E-Cadherin及CD68的異常表達來，對患者胃癌術后的復發率的影響及對胃癌的浸潤深度、淋巴結轉移數量和TNM分期的影響的研究對延長胃癌患者的生存率和減少復發率有重要意義，也將為胃癌患者的免疫治療提供一個新的途徑，由以上結果可知，與未復發組相比，復發組胃癌組織的E-Cadherin及CD68陽性表達分別為61.5%、59.6%，顯著增加，差異有統計學意義（P<0.05）。與未復發組相比，復發組的胃癌旁組織E-Cadherin及CD68陽性表達分別為65.4%、78.8%，顯著增加，差異有統計學意義（P<0.05），這與董海峰等人[9]在相關研究中得出有關胃癌組織以及胃癌旁組織的E-Cadherin及CD68陽性率的結果相近，具有臨床意義。

該研究存在一定局限性，包括作為回顧性研究，樣本量較小。因此，有待進一步擴大樣本量，進一步加大對患者進行長期隨訪的工作。

綜上所述，胃癌組織中腫瘤E-Cadherin的過表達可明顯延長胃癌患者的生存率。

[參考文獻]

[1]? Wu H， Cai Z， Lu G， et al. Impact of c-erbB-2 protein on 5-year survival rate of gastric cancer patients after surgery： a cohort study and meta-analysis[J].Tumori，2017，103（3）： 249-254.

[2]? Yao Y， Liu Z， Guo H， et al. Elevated TRIM23 expression predicts poor prognosis in Chinese gastric cancer[J].Pathol Res Pract，2018，214（12）： 2062-2068.

[3]? Wanga XZ， Gu JL， Gao M， et al. Peperomin E Induces Promoter Hypomethylation of Metastatic-Suppressor Genes and Attenuates Metastasis in Poorly Differentiated Gastric Cancer[J]. Cell Physiol Biochem，2018，50（6）： 2341-2364.

[4]? Zhao K， He J， Wang YF， et al. EZH2-mediated epigenetic suppression of EphB3 inhibits gastric cancer proliferation and metastasis by affecting E-cadherin and vimentin expression[J]. Gene，2018，686：118-124.

[5]? Wang HC， Chen CW， Yang CL， et al. Tumor-Associated Macrophages Promote Epigenetic Silencing of Gelsolin through DNA Methyltransferase 1 in Gastric Cancer Cells[J]. Cancer Immunol Res，2017，5（10）：885-897.

[6]? Liu H，Lin C，Shen Z， et al.Decreased expression of granul ocyte-macrophage colony-stimulating factor is associated with adverse clinical outcome in patients with gastric cancer undergoing gastrectomy[J].Oncol Lett，2017，14（4）：4701-4707.

[7]? Wang F， Li B， Wei Y， et al. Tumor-derived exosomes induce PD1+ macrophage population in human gastric cancer that promotes disease progression[J].Oncogenesis，2018，7（5）：41.

[8]? 李軍，牟林軍，孫玉寶.胃癌組織中 HIF-1α，CD68 及 Sema4D 蛋白的表達及臨床[J].濰坊醫學院學報，2016，38（6）：454-457.

[9]? 董海峰，鄭英斌，龐志剛.E-鈣黏蛋白與波形蛋白在胃癌中的表達及意義[J].中華實用診斷與治療雜志，2018，32（6）：580-582.

（收稿日期：2019-02-27）