一氧化氮熏蒸抑制干制灰棗黑曲霉病及貯藏品質保持

陳 燕，張 健，魏 佳，吳 斌，張 平，王吉德

一氧化氮熏蒸抑制干制灰棗黑曲霉病及貯藏品質保持

陳 燕1，張 健2，魏 佳2，吳 斌2，張 平2，王吉德1※

（1. 新疆大學化學化工學院，烏魯木齊 830046；2. 新疆農業科學院農產品貯藏加工研究所，烏魯木齊 830091）

黑曲霉（,）是引起干制灰棗貯期腐爛的主要病原菌之一，本文以新疆灰棗為試材，開展了一氧化氮（NO）氣體熏蒸對灰棗貯藏過程中黑曲霉病發生的抑制作用及貯藏品質影響的研究。在室溫貯藏條件下，分析了不同濃度NO熏蒸對黑曲霉（）及灰棗黑曲霉病的抑制作用；探討了NO對灰棗自然病蟲害和品質參數的影響。結果表明 NO熏蒸可以顯著抑制的生長，降低了對果實侵染引起黑曲霉病的嚴重程度，病害抑制作用與熏蒸濃度呈正相關。濃度為600L/L的NO熏蒸能完全抑制的生長和黑曲霉病害的發生，抑制率均為100%；灰棗貯藏50 d后，失質量率、霉變率、蟲蛀率、褐變程度和表面菌落總數顯著低于對照處理（<0.05），分別降低了0.484%、1.73%、3.40%、0.138和1.22 lg（CFU/g）；NO延緩了灰棗果實含水率、可溶性固形物、還原糖、可滴定酸和維生素C含量的下降，可以較好保持干制灰棗果實的外觀和營養品質。該研究為NO氣體熏蒸技術在干制果品貯藏期病害防控方面提供了新的研究思路。

一氧化氮；熏蒸；病害控制；灰棗；黑曲霉；貯藏品質

0 引 言

灰棗（Mill，）鼠李科（）棗屬，自20世紀70年代初開始在新疆種植，已成為新疆紅棗產業的主導品種之一。目前，灰棗種植主要在新疆喀什、若羌和阿克蘇等地區有分布，其干制后品質優良，果實肉厚、酸甜可口、風味獨特，深受消費者喜愛[1-2]。新疆灰棗采后大部分由棗農經自然晾曬干制后，發往全國各地直接銷售。由于在銷售過程貯存方法不當，易感染真菌病害及滋生蟲卵等品質劣變等問題，黑曲霉（，）是灰棗采后最主要的致病菌之一，果實帶菌率高，染病后會發生黑斑、腐爛等病害癥狀[3]。嚴重影響了灰棗的商品價值和食用安全性，如何抑制貯存期微生物滋生引起的病害是保證灰棗采后品質和食品安全性的關鍵。

一氧化氮（NO）是生物體內一種作用廣泛且具有信號轉導功能的氣態自由基分子，在生物體內扮演重要的信使角色。它不僅對動物的生命活動有著重要的調節作用，還參與調控植物生長發育、成熟衰老及脅迫響應等過程[4-7]。近年來，眾多研究發現外源NO處理能明顯延緩桃子[8]、草莓[9]、甜櫻桃[10]、番木瓜[11]和冬棗[12]等果實的采后質量損失、果肉軟化、褐變、抗氧化和病原菌的侵染，延長貯藏壽命。當前NO在果蔬采后的研究主要集中在鮮果方面，對于干制果品貯藏作用的研究鮮有報道。本研究以新疆灰棗為試材，分析NO氣體熏蒸后對灰棗中分離的黑曲霉（）及其引起灰棗病害的抑制作用，篩選適宜的NO熏蒸濃度，探討NO熏蒸對貯藏過程中灰棗果實自然病害發生和貯藏品質的影響，為NO熏蒸技術在干制果品貯藏領域的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

干制灰棗產自新疆喀什伽師縣，果實貯藏于冷庫中（溫度為（0±1.0）℃，相對濕度為70%±10%）。選擇大小均勻、無病蟲害、無機械傷的果實進行后續試驗。

致病菌為實驗室從腐爛的灰棗中分離、鑒定和保存的。

NO氣體（純度≥99.5%）烏魯木齊新天意標準氣體有限公司；瓊脂培養基（PDA）青島高科園海博生物技術有限公司；吐溫80 成都市科隆化學品有限公司；2,6-二氯靛酚 上海邦景實業有限公司。試驗所用試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

SW-CJ-2FD超凈工作臺，蘇州凈化設備廠；UV-2600紫外分光光度計，日本島津有限公司；LDZX-30KBS立式壓力蒸汽滅菌鍋，上海申安醫療器械廠；Centrifge5810R型高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司；DHP-9272B型恒溫培養箱，上海一恒科技有限公司。

1.3 方 法

1.3.1 致病菌的分離、純化、鑒定和孢子懸浮液的制備

致病菌的分離與純化：參照郝莉花等[13]的方法分離純化致病菌。

致病菌鑒定：參照Le等[14]的方法進行基因分型分析，使用基本局部比對搜索工具（BLAST；http:// www.ncbi.nlm. nih.gov/BLAST）進行比對。鑒定致病菌為黑曲霉（）。

孢子懸浮液：參照馬岳岳等[15]的方法，孢子懸浮液濃度為1×109CFU/L。

1.3.2 NO熏蒸對灰棗體內黑曲霉病發生的抑制作用

灰棗果實用75％的乙醇清洗表面5 min，沿著果實縱向切開一條損傷缺口，用無菌蒸餾水洗滌2次，取出損傷果實吹干表面水分，放入蓋上有均勻透氣孔的聚乙烯盒（20 cm×15 cm×10 cm）中，均勻噴灑孢子懸浮液。處理后的果實放入熏蒸設備（30 L）中進行NO氣體熏蒸3 h。NO熏蒸濃度分別為300、600、900、1 200和1 500L/L，以空氣熏蒸為空白對照CK（為方便操作，試驗過程在空氣環境下進行，NO可能會與空氣中的氧氣（O2）反應生成二氧化氮（NO2），該反應速率極低，可能會引起0.5%～1%的NO損失）；熏蒸后放入相對濕度75%～99%，溫度20～25℃的恒溫箱中培養5 d，每天觀察果實病害發生和測定發病率。

1.3.3 NO熏蒸對體外的抑制作用

接種到含有PDA培養基的培養皿中，將培養皿放入熏蒸設備，采用與1.3.2相同濃度NO氣體熏蒸處理，以空氣熏蒸為對照CK。熏蒸結束后封口，在28 ℃條件下培養7 d，定期觀察菌落生長情況并測量菌落直徑。

1.3.4 NO熏蒸對灰棗自然病蟲害和貯藏品質的影響

采用1.3.2和1.3.3篩選出的NO熏蒸濃度，對灰棗果實（每個處理20.00 kg）熏蒸3 h，以空氣熏蒸為對照。熏蒸結束后，將果實分裝于保鮮盒中，每盒500 g，放置在常溫、避光（溫度為（23±2.0）℃，相對濕度為50%±5%條件下貯藏，每10 d取一次樣，測定自然病蟲害和品質指標。其中，自然病蟲害指的是灰棗在常規貯藏條件下，自然發生的霉菌病害和蟲害的現象，分別通過霉變率和蟲蛀率來計算。