紫外-可見分光光度法測定刺玫果中總黃酮的含量

李仁杰，丁建秋，姜瑋倫，姚慧敏*

(1.通化師范學院吉林省重點實驗室長白山藥用植物研究實驗室，通化134002；2.吉林省白山市第七中學，白山134700）

刺玫果為薔薇科薔薇屬植物山刺玫（Rosadavurica Pall.）的成熟果實，又名野薔薇果，廣泛分布于東北及內蒙、山西等省。該果實性溫，味酸，營養豐富，民間大量采食或用于泡茶、泡酒等[1]。刺玫果所含大量活性成分均具有極高的藥用價值，在抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、對心血管系統的作用等方面的研究都取得了進展[2～7]。目前，刺玫果正在作為一種天然保健藥物被日益重視和廣泛開發，市場上已出現由刺玫果原料為主研制的保健食品，如果汁、果酒、果醋等[8]。

目前文獻中對于刺玫果及其保健品總黃酮的含量測定方法主要為高效液相色譜法[9～10]和紫外-可見分光光度法。與高效液相色譜法相比較，紫外-可見分光光度法具有適用性較廣、操作簡單、測試時間短、精密度和準確度較好等特點，在中藥總黃酮的含量測定上有著不可替代地位。因此，本文以蘆丁為對照品，采用紫外-可見分光光度法對刺玫果中總黃酮的含量進行測定，以便對刺玫果及系列產品進行質量控制。

1 儀器與試藥

紫外分光光度儀 （上海儀電分析儀器有限公司，INESA-L6）；電熱套（北京中興偉業有限儀器公司）

蘆丁（中國藥品生物制品檢定所）；刺玫果（批號：161106、161107、161108）采自吉林省通化市長白山區，經通化師范學院生命科學學院朱俊義教授鑒定為刺玫果）；試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取在120°C干燥至恒重的蘆丁對照品10mg，置10mL容量瓶中，加70%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取2mL，置10mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

準確稱取刺玫果粉末10g，加適量水浸泡1.5h，按料液比為1：10進行煎煮、提取溫度為80℃進行煎煮，煎煮3次，每次煎煮1.5h，濾過，合并3次煎液，濃縮至100mL，取濃縮液5mL至10mL容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2 溶液的顯色

分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各1mL，分別置25mL量瓶中，各加70%乙醇至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加70%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，以相應試劑為空白，進行檢測。

2.3 測定波長的選擇

精密量取對照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照2.2中方法進行顯色，以相應試劑為空白，在400～800nm波長范圍內進行掃描。對照品溶液在510nm有較大吸收，故確定蘆丁測定波長為510nm。

2.4 標準曲線的繪制

精密量取對照品溶液 l、2、3、4、5、6mL，分別置25mL量瓶中，按照2.2中方法進行顯色，以相應試劑為空白，于波長510nm下進行檢測。以對照品濃度C為縱坐標（X），吸光度A為橫坐標（Y），進行線性回歸。蘆丁在8～48μg·mL-1濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系，其線性回歸方程為y=0.0108x+0.1647（r=0.9998）。

2.5 精密度實驗

精密量取對照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照2.2中方法進行顯色，連續測定5次，測得吸光度值，RSD為0.54%，結果表明儀器精密度良好，可滿足實驗測定要求。

2.6 穩定性實驗

精密量取對照品溶液3mL，置25mL量瓶中，按照 2.2 中方法進行顯色，室溫放置，分別于 0、2、4、6、8、12h，測定吸光度值，RSD為0.73%，結果表明，溶液顯色后放置12h內穩定性良好。

2.7 重復性實驗

取同一批刺玫果藥材（161106批），依次按2.1和2.2項下方法操作，測得吸光度值，按標準曲線計算樣品含量，RSD為0.56%，結果表明本方法樣品重復性良好。

2.8 回收率實驗

精密稱取已知含量的刺玫果10g，共6份，依次按照2.1項下方法制備供試品溶液。取6份供試品溶液各1mL，精密加入濃度為200μg·mL-1蘆丁對照品3mL，依次按2.2項下方法操作，測得吸光度值，將吸光度值帶入線性回歸方程，計算回收率，結果見表1。

表1 刺玫果回收率測定結果

刺玫果平均加樣回收率分別為100.387%，RSD為0.85%，加樣回收率符合含量測定要求。

2.9 含量測定

分別取三批刺玫果各10g，按“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，依次按2.2項下方法操作，測得吸光度值，按外標法計算含量，刺玫果含量測定結果見表2。

表2 刺玫果含量測定結果

3 討論

黃酮類化合物是藥用植物的主要有效成分，具有重要的藥用價值。近年來國內的大量研究表明刺玫果具有抗衰老，防治心血管疾病等作用，增強免疫作用，保肝作用和預防癌癥等作用[11～13]。

本文以蘆丁為對照品，采用紫外-可見分光光度法對刺玫果中總黃酮的含量進行測定，實驗結果表明，蘆丁在8～48μg·mL-1濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系，其線性回歸方程為y=0.0108x+0.1647（r=0.9998）。經計算刺玫果中總黃酮平均含量為11.820mg·g-1。通過方法學考察說明儀器精密度好，方法重現性好，樣品經顯色后的12h內吸光度較穩定，該方法簡便、準確，可以用于刺玫果的質量控制。