留蘭香質量標準探討*

萬紅才，徐作剛，劉曉艷，段 萍，羅洪蓮，曾 琦，安 軍

（貴州省黔南州食品藥品檢驗所，貴州 都勻 558000）

留蘭香Mentha spicataL.為唇形科植物，全草入藥，夏、秋二季采收，除去雜質，鮮用或陰干；氣芳香，味辛涼[1]，功能疏風清熱、解表和中、里氣止痛，用于感冒頭痛、胃痛、咳嗽、腹脹、吐瀉、痛經、肢麻、跌撲腫痛。目前對民族藥材留蘭香的質量控制僅有性狀描述[2]。本研究中建立了其葉含量、水分、總灰分、酸不溶性灰分及揮發油含量測定等相關檢測項目，以保證該民族藥材的藥用安全性、有效性和可靠性，同時也為下一步的開發研究提供參考?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DM-2500型生物顯微鏡，萊卡Las-v3.8型顯微照相系統（德國萊卡公司）；SK250LHC型超聲波清洗器（上?？茖x器有限公司）；AG135型電子天平（梅特勒托利多）；揮發油測定器；水分測定管及配套玻璃儀器；水浴鍋及常規實驗器材。

1.2 試藥

香芹酮對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為C11052000，含量為98.2%）；樣品采集于都勻翁奎（編號為 201701，201707，201708）、都勻大坪東沖（編號為201703）、都勻劍江河（編號為 201702）、開陽毛云（編號為 201706）、威寧草海（編號為 201704）、遵義桐梓（編號為201705）等貴州各地，經貴州省食品藥品檢驗所李揚主任藥師鑒定為正品；硅膠G預制板（批號為20110712）、硅膠G板（批號為0110916）均由青島海洋化工有限公司生產；有機試劑及其他化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 顯微鑒別

市場上留蘭香偽品時有發現，采用顯微鑒別能對偽品作初步判定[3-4]。對3個不同采集地點的留蘭香進行顯微鑒別，其顯微鑒別特征見圖1。本品葉表面觀：上表面腺鱗圓形或橢圓形，頭部8細胞，直徑約至100 μm，小腺毛長 20～30 μm，直徑約 10 μm，頭部及柄部均為單細胞；下表面非腺毛3～15個細胞，長30～150 μm，直徑約30 μm，常彎曲，微具疣突；氣孔多見，直軸式。

圖1 顯微鑒別圖

2.2 薄層色譜鑒別

溶液制備：分別稱取留蘭香藥材細粉3.0 g，優化提取方法，對提取溶劑、提取方法進行考察，最終以加乙醇30 mL，水浴回流30 min，濾過，取續濾液2 mL，作為供試品溶液。此方法操作簡便，溶劑毒性小，耗時短，提取較完全。另取香芹酮對照品約10 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

展開系統考察：選用極性適當的溶劑，分別以正已烷 -乙酸乙酯 -甲酸（15∶8∶0.1，V∶V∶V）、石油醚 -乙酸乙酯 -甲酸（10∶1∶0.2，V∶V∶V）、石油醚 -乙酸乙酯 -甲酸（12∶8∶2，V∶V∶V）和正已烷 -乙酸乙酯 -甲酸（10∶1∶0.1，V∶V∶V）進行考察，根據色譜圖分離效果，結合展開劑的毒性、主要斑點的Rf值及清晰度，選取后一種為展開系統。

點樣量考察：取制備的供試品溶液 2，3，5，6，8，10 μL及對照品溶液10 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以正已烷 -乙酸乙酯 -甲酸（10∶1∶0.1，V∶V∶V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，點樣量在5～10 μL時，所顯主斑點均清晰，分離度好背景淺，故選取5～10 μL為點樣體積。

耐用性考察：按國家藥典委員會《中藥分析方法驗證指導原則實施細則》相關要求進行考察。溫度考察了低溫（4 ℃）、室溫（24 ℃）、高溫（40 ℃），相對濕度考察了低濕度（25% ）、中等濕度（50% ）和高濕度（75% ），薄層板分別選用硅膠G預制板（批號20110712）和硅膠G板（批號為0110916），結果均較好。

薄層色譜鑒別：按上述優化的方法分別制備各地采集樣品的供試品溶液，取對照品溶液，照薄層色譜法（2015 年版《中國藥典（四部）》通則 0502）試驗。8 批留蘭香樣品色譜圖中，在對照品色譜相應位置上均顯相同顏色的斑點，詳見圖2。采用香芹酮對照品做主要成分鑒定，能把同科同屬植物薄荷偽品作有效區別，是專屬性強的有效方法之一[5]，彌補了顯微鑒別法的局限性。

2.3 指標成分檢查

葉含量：藥材所含揮發油成分在全草植物體的不同部位（器官）中含量是不均衡的，葉中的含量要遠高于其他部位（器官）；由于該藥材在采收季節、加工、炮制、運輸過程中，常因其葉在干燥后易脫落或碎裂而致其藥材中所含葉量少而主要為莖根，使得藥材和飲片中揮發油含量下降；為了保證藥材的完整性，把葉含量作為控制藥材質量指標之一；參照2015年版《中國藥典（一部）》中薄荷藥材檢查方法[6]及2015年版《中國藥典（四部）》通則0211藥材和飲片的取樣法[7]29取樣，稱定質量；把根莖和葉分離，稱取葉的質量，計算即得。詳見表1。

圖2 薄層色譜圖

表1 各成分含量測定結果（%）

水分：中藥材含有過量的水分時，極易造成中藥霉爛變質，使有效成分分解，且相對減少了實際用量而影響療效，因此，控制中藥中的水分含量對保證中藥質量有密切關系；留蘭香藥材及飲片中主要含揮發性成分，水分測定按2015年版《中國藥典（四部）》通則0832水分測定第四法測定[7]103。結果見表 1。

總灰分及酸不溶性灰分：測定灰分的目的是限制中藥中無機雜質如泥土、沙石的含量，以保證中藥的純度，《中國藥典》已將灰分測定作為一種常規檢查，對大多數藥材和飲片規定了限量檢查指標[7]204。總灰分測定法用的供試品須粉碎，使能通過2號篩，混勻后，取供試品3～5 g，依法測定，根據殘渣質量，計算供試品中總灰分的含量（%）。酸不溶性灰分測定根據殘渣質量，計算供試品中酸不溶性灰分的含量（%）。結果見表1。

揮發油含量測定：按2015年版《中國藥典（四部）》通則2204測定[7]203。測定的留蘭香樣品須粉碎，使能通過 2號至 3號篩，混勻，取供試品適量（150.00～200.00 g），置2 000 mL的硬質圓底燒瓶中，加水650～700 mL與玻璃珠數粒，保持微沸3 h，依法測定，讀取揮發油量，并計算供試品中揮發油的含量（%），結合8批以上不同采集地點、時間來源樣品的測定結果，確定含量的限度。詳見表2。

表2 揮發油含量測定結果（%）

3 討論

顯微鑒別方法是通過對留蘭香顯微特征進行觀察、測量所總結出的具有代表性的共性描述，可簡便快速地對該藥材進行初步判定。

薄層色譜鑒別法的建立試驗中采用提取方法、點樣量、展開系統及耐用性等能與相似藥材薄荷區分開，可行性與專屬性可作為該藥材的質量控制方法之一。

因留蘭香葉是含揮發油成分的主要器官，采用控制葉含量測定來控制該藥材質量，保證了藥材的完整性，同時提高了有效成分揮發油的含量，經測定8批留蘭香藥材含葉平均值為18.04%，按不低于平均值的80%制訂標準。

留蘭香藥材中葉含量不得少于15.52%，再結合現行2015年版《中國藥典》中對該類藥材的限量要求和實際測定結果，建議留蘭香藥材葉含量不得少于14.00%。

由于留蘭香含有揮發性成分，因此建立甲苯法測定其水分，經測定8批留蘭香藥材平均值為10.86%，建議留蘭香藥材水分不得超過15.00%。

該藥材為全草入藥，采收時可能會帶入泥土、砂石，有建立總灰分及酸不溶性灰分檢查的必要性，根據對8批留蘭香藥材樣品的檢測，總灰分平均值為7.89%，酸不溶灰分為1.34%，建議留蘭香藥材總灰分平均值為10.00%，酸不溶灰分為2.00%。

樣品中揮發油含量的多少關系到藥材的優劣，結果8批留蘭香藥材揮發油平均值為0.36%，按不低于平均值的80.00%制訂標準，留蘭香藥材揮發油不得少于0.26%，建議留蘭香藥材揮發油含量不得少于0.25%（mL／g）。

此標準在原質量標準基礎上增加顯微鑒別、薄層色譜鑒別、各項檢查及揮發油含量測定等方法，形成了一個較完整的質量評價體系，可進一步加強對該藥材的質量控制，保障民眾用藥安全。