丹參酮抗小鼠輻射損傷實驗研究*

龔 睿，蔡周權，謝 晨，徐麗萍

（四川省科學城醫院藥劑科，四川 綿陽 621900）

目前，許多天然藥物中提取的有效成分均證實其能抑制自由基的產生，增強機體的自身抗氧化能力，發揮抗輻射作用。中藥丹參為唇形科丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根，主要成分為脂溶性和水溶性化學成分[1]。丹參酮是中藥丹參根中的脂溶性成分，包括10多種單體，均具有鄰醌或對醌結構，由于此類化合物易被還原為二酚類衍生物，后者又易被氧化為醌，在轉變過程中起電子傳遞作用，在生物體內的代謝產物易參與機體的多種生物化學反應，從而表現出多種藥理作用[2]。目前，相關研究更傾向于其抗腫瘤[3]、抗肝纖維化[4]、抗炎[5]等作用。本課題組曾在體外試驗中證實丹參酮具有一定的體外抗氧化作用，本研究中擬對丹參酮體內的抗氧化作用進行探討，為臨床開發有效且毒副作用少的抗輻射藥物。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、試藥與儀器

動物：BALB／c小鼠30只，SPF級，雄性，年齡12～16周，體質量為（20±2）g，購自成都達碩實驗動物有限公司，動物合格證編號為SCXK＜川＞015-030。適應性喂養7d，實驗期間自由飲水、進食，實驗結束后采用斷頸法處死。

試藥：98%丹參酮ⅡA提取物（西安開來生物工程有限公司，批號為K176845）；維生素C（成都麥卡希化工有限公司，批號為2017041301，分析純）；水為蒸餾水；薇婷脫毛膏（利潔時家化＜中國＞有限公司）；谷胱甘肽還原酶（GR）試劑盒、谷胱甘肽（GSH）試劑盒、總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒和丙二醛（MDA）試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

儀器：SH4型紫外線光療儀（上海希格碼高技術有限公司，光譜范圍UVB為280～330 nm，輻射強度為13 mW／cm2）；紫外線強度檢測儀（世駿電子股份有限公司）；毛細采血管（揚州市金環醫療器械廠）；UV-6100型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）；7DZ5-WS型離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）。

1.2 方法

分組：將實驗小鼠隨機分為正常對照組（Ⅰ組，生理鹽水）、模型對照組（Ⅱ組）、模型對照組維生素C 5 g／L（Ⅲ組），3 個劑量丹參酮組（2.5，5.0，10.0 g／L，Ⅳ ～Ⅵ組），各5只。實驗期間自由進食、飲水。

小鼠模型建立：各組小鼠用脫毛劑將背部脫毛，暴露皮膚面積2 cm×3 cm。用模擬UVB光源照射，UVB輻照強度13 mW／cm2，距離小鼠約20 cm垂直高度處照射，每天照射10 min。實驗期間每5 d脫毛1次。

給藥方法：Ⅰ組每日給予0.5 mL生理鹽水灌胃，不予照射；Ⅱ組每日上午給予0.5 mL生理鹽水灌胃，下午給予紫外線照射10 min；Ⅲ組上午給予5 g／L維生素C注射液0.5 mL，下午給予紫外線照射10 min；Ⅳ組上午給予2.5 g／L丹參酮液0.5 mL，下午給予紫外線照射10 min；Ⅴ組下午給予紫外線照射10 min；Ⅵ組下午給予紫外線照射10 min。均連續給藥14 d。

1.3 標本采集與指標檢測

樣本采集：按上述實驗方法照射14 d后，取30只10 mL裝有1%肝素2 mL的離心管，用毛細血管取眼眶血后裝入上述離心管中，將裝有血液的離心管在離心機上4 000 r／min離心10 min，取上清液，備用。

小鼠血清GR，GSH，T-AOC，MDA檢測：嚴格按相關試劑盒（南京建成生物工程研究所）操作流程檢測小鼠血清中GR活力、T-AOC能力、GSH含量及MDA含量。

1.4 統計學處理

采用SPSS13.0統計學軟件分析。計量資料以表示，組間比較行t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

結果見表1及圖1。與Ⅰ組相比，Ⅱ組血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量均明顯下降，MDA含量明顯上升（P＜0.05）；與Ⅱ組相比，Ⅲ～Ⅵ組血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量均明顯上升，MDA含量明顯下降（P＜0.05）；Ⅲ組與Ⅳ～Ⅵ組相比，血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量、MDA含量差異不大。

表1 各組小鼠抗氧化物質的含量／能力比較（±s）

表1 各組小鼠抗氧化物質的含量／能力比較（±s）

注：與Ⅱ組比較，*P ＜0.05。圖 1 同。

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圖1 各組小鼠各抗氧化物的含量／能力

3 討論

紫外線被皮膚吸收后可通過多種途徑誘發光化學反應及級聯反應，往往產生活性氧（ROS），主要包括氧離子、過氧化物和處于激發態的氧、羥基化合物等。有些活性氧是自由基，屬于體內高活性分子，包括超氧陰離子（O2·-）、羥自由基（·OH）和過氧化氫（H2O2）等[6]。UVB作為太陽光紫外線的一部分，是產生機體氧自由基的主要成分，這些氧自由基可引發不飽和脂肪酸脂質過氧化而使細胞損傷[7]。ROS生成和消除失衡對細胞生理學的某些影響被稱為氧化應激[8]。生物機體在面對上述威脅時，通過提升自身的抗氧化防御體系，包括抗氧化酶系和抗氧化因子水平，對氧自由基進行清除及催化、分解有毒、有害物質，以達到防輻射的效果。這種機體防御體系的抗氧化能力的強弱與健康程度密切相關，該防御體系的抗氧化作用主要通過3條途徑：清除自由基和活性氧以免引發脂質過氧化；分解過氧化物，阻斷過氧化鏈；除去起催化作用的金屬離子。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸（PUFA）的過氧化引起細胞損傷，且還能通過脂質過氧化物的分解產物引起細胞損傷，其中毒性最大的就是MDA，其產生的量與氧自由基的量及脂質過氧化的程度呈正相關，故檢測含量可反映氧自由基的水平及脂質過氧化的程度。GR是一種黃素酶，廣泛存在于各臟器的組織細胞中，在體內可催化氧化型谷胱甘肽（GSSG），還原成還原型谷胱甘肽（GSH），后者可使含巰基（—SH）酶處于還原狀態及活性狀態，維持紅細胞膜的完整性，防止血紅蛋白氧化。GSH是由谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸組成的三肽，是組織中主要的非蛋白質巰基化合物，是體內的一種低分子清除劑，可清除O2-及H2O2等，GSH量的多少是衡量機體抗氧化能力大小的重要指標[9]。

有實驗研究了丹參酮對不同疾病動物模型的抗氧化作用，丹參酮ⅡA衍生物對大鼠心肌缺血再灌注損傷模型中MDA含量的影響[10-11]。結果表明，丹參酮ⅡA衍生物預處理能顯著減少大鼠心肌缺血再灌注損傷引起的心肌炎性浸潤氧化損傷，減少MDA的活性。表明丹參酮ⅡA衍生物具有保護心肌缺血再灌注損傷的作用，其作用機制與其顯著抑制炎癥與氧化損傷有關。李澤等[12]研究發現，丹參酮ⅡA磺酸鈉（STS）呈劑量依賴性地減輕AngⅡ誘導的心肌纖維化，提高抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的表達，增強抗氧化應激反應，降低心肌組織脂質過氧化水平。高文強等[13]發現，利用丹參酮Ⅰ（T- Ⅰ）預處理可降低X射線導致的膀胱上皮細胞活力下降，且可減少細胞內的活性氧水平；在體內試驗中，T-Ⅰ能顯著減輕早期膀胱組織損傷，降低組織內氧化應激水平。本研究結果與前期研究結果一致，在丹參酮預處理中，相對于模型對照組，丹參酮實驗組小鼠血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量明顯上升，MDA含量明顯下降（P＜0.05），丹參酮的不同濃度組與維生素C組小鼠的血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量、MDA含量差異不大。總之，丹參酮能清除氧自由基，減輕紫外線輻射對機體的損傷。