3種測定輸血器中鄰苯二甲酸二乙酯溶出量方法比較

蘭婉玲，劉興蘭，朱 茜，高小艷，游延軍，張 磊

（四川省食品藥品檢驗檢測院，四川 成都 610097）

一次性使用輸血器多采用聚氯乙烯（PVC）材料，PVC類產品在加工中均會加入一定量增塑劑，現臨床使用的增塑劑多為鄰苯二甲酸二乙酯（DEHP），部分增塑劑可能溶出并進入血液中[1]。現行一次性使用輸血器標準GB8369-2005[2]中并未制訂DEHP溶出量的檢測方法，GB14232.1-2004[3](“傳統型血袋”標準)中對血袋DEHP有測定方法和限度要求。YY/T 0927-2014[4]指南中提到，可采用氣相色譜（GC）法、氣相色譜-質譜聯用（GC/MS）法、紫外-可見分光光度（UV）法檢測DEHP的溶出量[5-9]。本研究中采用上述3種檢測方法，對四川省評價性抽驗的8家企業一次性使用輸血器中增塑劑DEHP的溶出量進行測定，為增修輸血器中DEHP的檢測方法提供參考，并可推廣到所有含DEHP增塑劑輸液輸血類產品中DEHP溶出量的測定。現報道如下。

1 材料

1.1 儀器

Carry 100型紫外分析儀（美國Varian公司）；GC-2010型氣相色譜儀（日本Shimadzu公司）；Thermo Trace GC Ultra/Tsq Quantum Xls型氣相色譜-質譜儀（美國Thermo Fisher公司）；一次性使用輸血器（國內8家生產企業，42批次，詳見表 1）。

表1 試驗用輸血器來源

1.2 試劑

DEHP對照品（德國Dr.Ehrenstorfer GmbH，批號為C16173000，含量為98.5% ）；甲醇、乙醇、正己烷為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 紫外-可見分光光度法

2.1.1 測定波長

經全波長掃描，確定測定波長為272 nm。

2.1.2 溶液制備

取DEHP對照品適量，精密稱定，以無水乙醇制成對照品溶液。用質量濃度為0.937 3～0.937 8 g/mL的乙醇作為浸提液，取適量，分別加入3支輸血器中（加至約總容量的90%），在37℃下浸泡1 h，取出，收集浸提液混合，搖勻，即得供試品溶液。以乙醇作為陰性對照溶液。

2.1.3 方法學考察

專屬性考察：取2.1.2項下3種溶液各適量，按2.1.1項下條件進樣測定，記錄色譜圖。詳見圖1。結果陰性對照溶液在與DEHP對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

線性關系考察：取DEHP對照品適量，精密稱定，取無水乙醇制成質量濃度為 119.200，59.590，35.760，23.837，11.920 μg/mL的系列對照品溶液，精密量取10 μL，按2.1.1項下條件進樣測定，記錄吸光度。以DEHP 質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、吸光度（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y1=0.003 1X1-0.000 6，r=0.999 8(n=5)。結果表明，DEHP 質量濃度在11.92～119.20μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗：取2.1.2項下對照品溶液適量，按2.1.1項下條件連續進樣測定6次，記錄吸光度。結果的RSD為2.90%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.1.2項下供試品溶液（批號為151011）適量，分別于室溫下放置 0，10，20，24，48 h 時按2.1.1項下色譜條件進樣測定，記錄吸光度。結果的RSD為3.28%（n=5），表明供試品溶液室溫放置48 h內基本穩定。

重復性試驗：精密稱取樣品（批號為151011）適量，按2.1.2項下方法制備供試品溶液，再按2.1.1項下條件進樣測定，記錄吸光度并計算含量。結果的RSD為4.68%（n=6），表明方法重復性良好。

2.2 GC法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：HP-5 柱（30 m ×0.32 mm，0.25 μm）；程序升溫：初始溫度90℃，以20℃ /min的速率升溫至200℃、保持1 min，以20℃ /min的速率升溫至240℃、保持2min，以20℃/min的速率升溫至270℃，保持2min；進樣口溫度：250℃；檢測器溫度：280℃；進樣量：1.0μL。

2.2.2 溶液制備

取DEHP對照品適量，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加正己烷定容，即得質量濃度為595.925 μg/mL的對照品溶液。以正己烷作為陰性對照溶液。

2.2.3 方法學考察

專屬性考察：取2.2.2項下對照品溶液、陰性對照溶液和2.1.2項下供試品溶液各適量，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。詳見圖2。結果陰性對照溶液在與DEHP對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

圖1 紫外-可見分光光譜圖

圖2 氣相色譜圖

線性關系考察：取DEHP對照品適量，精密稱定，加正己烷制成質量濃度為 119.200，59.590，35.760，23.837，11.920 μg/mL的系列對照品溶液，精密量取1 μL，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以DEHP 質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y2=1 097.5X2-3 127.1，r=0.999 6(n=5)。結果表明，DEHP 質量濃度在11.920～119.200 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2.2.2項下對照品溶液適量，按2.2.1項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果的RSD為1.73%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為151011）適量，共6份，分別加入低、中、高質量濃度的DEHP對照品溶液，按2.1.2項下方法制備供試品溶液，再按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算回收率。結果見表2。

表2 GC加樣回收試驗結果（n=9）

2.3 GC/MS法

2.3.1 試驗條件

色譜柱：TR-5MS 柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；離子源溫度：230℃；電子能量：70 eV；程序升溫：初始溫度150℃、保持1 min，再以20℃ /min的速率升溫至280℃、保持7 min；進樣口溫度：280℃；進樣體積：1 μL；測定方式：SIM 定量；定量離子：m/z149。

2.3.2 方法學考察

專屬性試驗：取2.2.2項下對照品溶液、陰性對照溶液和2.1.2項下供試品溶液各適量，按2.3.1項下試驗條件進樣測定，記錄質譜圖。詳見圖3。結果陰性對照溶液在與DEHP對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

線性關系考察：取DEHP對照品適量，精密稱定，取正己烷制成質量濃度為 2.38，1.19，0.60，0.06，0.03μg/mL的系列對照品溶液，精密量取1μL，按2.3.1項下試驗條件進樣測定，記錄離子信號強度。以DEHP質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、離子信號強度（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y3=2×106X3+7 713.5，r=0.999 7(n=5)。結果表明，DEHP質量濃度在0.03～2.38 μg/mL范圍內與離子信號強度線性關系良好。

圖3 氣相色譜-質譜圖

精密度試驗：取2.2.2項下對照品溶液適量，按2.3.1項下試驗條件連續進樣測定6次，記錄離子信號強度。結果的RSD為3.07%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為151011）適量，共6份，分別加入一定質量濃度的DEHP對照品溶液，按2.1.2項下方法制備供試品溶液，再按2.3.1項下試驗條件進樣測定，記錄離子信號強度并計算回收率。結果見表3。

2.4 樣品測定

取42批樣品各適量，分別按2.1.2項下方法制備供試品溶液，再按上述3種試驗條件進樣測定，平行測定3次，計算樣品含量。結果見表4。

3 討論

一次性使用輸血器里DEHP的溶出量是與輸血器PVC粒料中DEHP的加入量有關，不同企業的輸血器產品配方不完全一樣，由本研究結果可知，8家企業的DEHP增塑劑加入比例差異不大。

采用同一個對照品，3種不同測定方法測定同一供試品溶液，UV法測試的數據與GC和GC/MS法的結果差異較大。分析原因大致如下：鄰苯二甲酸酯是一類增塑劑，其結構相似，DEHP及其他鄰苯二甲酸酯類成分在272 nm[4]波長處均有吸收，測定結果為在272 nm波長處有紫外吸收的所有成分，故導致UV檢測結果虛高。

表3 GC/MS加樣回收試驗結果（n=6）

表4 8家生產企業一次性使用輸血器中DEHP溶出量試驗結果

在GC和GC/MS法中，首先，兩者對供試品的分離行為是一致的，MS采用了高速電子束撞擊氣態分子，把電離出來的離子加速導入質量分析器中，然后按碎片離子的質荷比大小順序進行收集和記錄，得MS圖，可以定性和定量，可以分離與DEHP類似成分的其他鄰苯二甲酸酯成分，增加了鑒定功能。只要GC優化色譜條件，樣品中物質分離度好，GC與GC/MS的結果基本一致。氣相色譜儀比氣相色譜/質譜儀價格便宜很多，氣相色譜儀的普及度要高于質譜，可在國家標準中規定采用GC/MS法用于鑒定存在鄰苯二甲酸酯類的化合物，從檢測限分析，建議測定常量采用GC法，測定遷移量微量采用GC/MS法。

據文獻[10-16]報道，DEHP增塑劑具有生殖毒性、致癌和致畸性，對血液系統有影響，有肝臟毒性。所以在使用以DEHP為增塑劑的PVC產品時，往往需要控制DEHP加入量，以控制產品中DEHP的溶出量。紫外-可見分光光度法在安全性評價上可作為一個警示，具體精準分析還需采用GC法和GC/MS法的數據更準確。

臨床目前使用的輸液器、輸血器及血袋產品大多為以DEHP為增塑劑的PVC材質的產品，現行有效的血袋標準（GB14232.1-2004標準方法）的測定方法為紫外-可見分光光度法，輸血器（GB8369-2005）和輸液器（GB8368-2005）在標準中并未設置DEHP的指標，本研究中僅以一次性使用輸血器為例說明，結果3種方法下DEHP遷移量出現完全不同的結果，建議在輸血器和輸液器標準中以適宜的方法增加DEHP遷移量的指標控制，修訂血袋中DEHP對應的方法和指標，真實地反映產品特性和產品風險，以免虛高的數據引起老百姓對使用產品的恐慌，造成不必要且不良的社會影響。