決明子水煎提取工藝優(yōu)化及其顆粒劑中指標成分量值轉(zhuǎn)化研究*

薛佩蕓 ，陳 萍 ，2，郭 冬

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046； 2.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003）

決明子為豆科決明屬植物決明Cassia obtusifoliaL.或小決明Cassia toraL.的干燥成熟種子，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，稱之“能治諸眼疾，久眼益精光，輕身”。決明子味甘、苦、咸，性微寒，歸肝、大腸經(jīng)，有清熱明目、潤腸通便功效[1]，主要用于治療目赤腫痛、畏光多淚、頭痛眩暈、視暗不明、大便秘結(jié)等癥，也是防治肥胖癥、高脂血癥、便秘等的藥食兩用佳品[2-5]。由于市場上其配方顆粒存在質(zhì)量標準不明確、質(zhì)量不均一、劑量不統(tǒng)一等問題[6]，現(xiàn)通過L9（34）正交試驗優(yōu)化決明子水煎提取工藝條件，以出膏率、橙黃決明素及大黃酚含量為評價指標，建立其含量測定方法，開展配方顆粒制備工藝研究，比較飲片-提取液-干粉-配方顆粒間指標成分量值轉(zhuǎn)化的相關(guān)性，探索配方顆粒質(zhì)量一致性。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BT25S型電子分析天平、BS210S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器<北京>有限公司）；ZLG型中藥浸膏專用離心噴霧干燥機（浙江錢江偉岸干燥設(shè)備有限公司）；GZL100-25L型干法制粒機（石家莊科源機械設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

橙黃決明素對照品（批號為111900-201605，含量為98.3%）、大黃酚對照品（批號為110796-201621，純度為99.2%），均購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純，美國Tedia公司）；磷酸（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；水為純凈水，其他試劑均為分析純。決明子飲片 3批（批號分別為 171002，171201，180401）均購于陜西興盛德中藥飲片有限公司，經(jīng)陜西省中醫(yī)藥研究院楊智峰教授鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Welchrom C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B），梯度洗脫，0～15 min（38%A），15～30 min（38%A→90%A），30～40 min（90%A），40～45 min（90%A → 38%A）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：284 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.1.2 溶液制備

混合對照品溶液：取橙黃決明素對照品、大黃酚對照品各適量，精密稱定，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1，V∶V）溶液，制成每 1 mL 含橙黃決明素 131.65 μg、大黃酚246.80 μg的混合對照品溶液。

供試品溶液：稱取決明子飲片（批號為171002）9份（1～9號），每份50.0 g，按正交試驗方案進行提取，定容至1 000 mL；精密吸取1～9號水煎液各20 mL，加鹽酸1.0 mL，水浴加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1，V/V）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中并定容，搖勻，濾過，即得。

陰性對照溶液：精密吸取水20 mL，按供試品溶液制備項下方法“加鹽酸1.0 mL”起同法制備。

2.1.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗：分別精密吸取2.1.2項下3種溶液，按2.1.1項下色譜條件測定，結(jié)果橙黃決明素和大黃酚峰的保留時間分別為18.436，31.877 min，分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于7 800，拖尾因子為0.95～1.05。詳見圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.1.2項下對照品0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，置 10 mL 容量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1，V/V）溶液定容，精密吸取10 μL，按2.1.1項下色譜條件測定，重復(fù)2次。以各成分的峰面積平均值（Y）為縱坐標、質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標進行線性回歸，得橙黃決明素回歸方程為Y1=79.628 39X1-36.251 51，R2=0.999 96（n=6），質(zhì)量濃度線性范圍為1.3165～32.9125μg/mL；大黃酚回歸方程為Y2=25.758 86X2-20.043 53，R2=0.999 96（n=6），質(zhì)量濃度線性范圍為2.468 0～61.700 0 μg/mL。

精密度試驗：精密吸取混合對照品溶液10 μL，按2.1.1項下色譜條件連續(xù)進樣6次。結(jié)果橙黃決明素及大黃酚峰面積的RSD分別為0.23%及0.20%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：分別精密吸取同一供試品(批號為171002)溶液10 μL，室溫下按2.1.1項下色譜條件分別于 0，2，4，8，12，20，24 h 時進樣。結(jié)果橙黃決明素及大黃酚峰面積的RSD分別為0.79%及0.96%（n=7），表明供試品溶液室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取樣品(批號為 171002)水煎液6份，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，進樣測定。結(jié)果橙黃決明素及大黃酚峰面積的RSD分別為1.48%及2.71%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的同一樣品水煎液（含量：橙黃決明素0.073%，大黃酚0.028%）6份，每份5 mL，分別精密加入適量橙黃決明素對照品及大黃酚對照品，以2.1.2項下方法制備供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件進樣測定。結(jié)果見表1。

2.2 出膏率測定

精密吸取1～9號水煎液100 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于烘箱105℃干燥至恒重，冷卻后迅速精密稱定，計算出膏率：出膏率y（%）=（m1/100×V）/m2×100%（m1為干浸膏質(zhì)量，V為樣品溶液體積，m2為飲片質(zhì)量）。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.3 提取工藝優(yōu)化

2.3.1 單因素試驗

吸水率：稱取決明子飲片（批號為171002）2份，每份50.0 g，置燒杯中，加水至剛好沒過飲片（約200 mL），計時，隨時觀察，3 h內(nèi)每間隔20 min計量1次，計算吸水率，結(jié)果為80.0%，故在煎煮前應(yīng)浸泡1 h左右，故選擇0，30，60 min作為正交試驗浸泡時間。繼續(xù)浸泡過夜，得吸水率為200.0%，則最少應(yīng)加水5倍，故選擇加水量6，8，10倍作為正交試驗加水量因素的3個水平。

提取時間：稱取決明子飲片（批號為171002）6份，每份50.0 g置圓底燒瓶中，加入10倍量純化水，分別加熱回流 30，60，90，120，150，180 min，濾過，合并濾液，以水定容至500 mL。按2.1.2項下供試品溶液制備項下方法“精密吸取1～9號水煎液各20 mL”起，制備供試品溶液，進樣測定；按2.2項下方法計算出膏率，結(jié)果90 min后最高，橙黃決明素及大黃酚含量均趨于穩(wěn)定，故選擇回流60，90，120 min作為正交試驗提取時間因素的3個水平。

2.3.2 正交試驗

因素水平：以預(yù)試驗結(jié)果為基礎(chǔ)，并以出膏率及橙黃決明素和大黃酚含量為考察指標，選擇浸泡時間（因素A）、加水量（因素B）、提取時間（因素C）及提取次數(shù)（因素D）作為影響因素進行工藝優(yōu)化[7-9]，因素水平設(shè)計見表2。

表2 因素水平表

正交設(shè)計及結(jié)果：采用L9（34）正交設(shè)計表優(yōu)化提取工藝，試驗安排及結(jié)果見表3。

方差分析：出膏率影響因素影響強度為D>B>C>A，其中因素D具有顯著性，最佳條件為A3B3C2D3；由于A無顯著性，綜合考慮選擇A2，因此確定最優(yōu)組合為A2B3C2D3，即浸泡0.5 h，加10倍量水，煎 3次，每次 1.5h。方差分析結(jié)果見表4。

表3 正交試驗安排及結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

驗證試驗：稱取決明子飲片3份，每份50.0 g，依據(jù)最佳工藝條件A2B3C2D3進行驗證。結(jié)果見表5，可見，該提取工藝穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。

2.4 配方顆粒制備及中試數(shù)據(jù)[10-13]

取3批決明子飲片各10.0 kg，加入10倍量水浸泡0.5 h，煎煮1.5 h，濾過，藥渣再加入10倍量水，煎煮1.5 h，濾過，合并濾液，于60℃減壓濃縮至相對密度為1.04～1.31 g/mL后進行噴霧干燥，得噴干粉。以噴干粉 -糊精（1∶1，m/m）混合，干法制粒，過 14目篩整粒，再過65目篩篩除未成型的粉末進行二次制粒。最終得粒度在10～80目的3批決明子配方顆粒。中試數(shù)據(jù)見表6。

表5 最佳工藝驗證試驗結(jié)果（%）

表6 配方顆粒中試數(shù)據(jù)結(jié)果（kg）

2.5 指標成分量值傳遞

2.5.1 橙黃決明素及大黃酚量值轉(zhuǎn)化

稱取飲片0.5 g，精密稱定，按2015年版《中國藥典（一部）》決明子飲片含量測定項下供試品溶液的制備方法制備飲片供試品溶液；精密量取提取液20 mL，按2.1.2項下供試品溶液的制備項下方法“加鹽酸1.0 mL”起同法制備提取液供試品溶液；稱取干粉配方顆粒各0.2 g，精密稱定，加入10 mL熱水，超聲處理30 min，按2.1.2項下供試品溶液制備項下方法“加鹽酸1.0 mL”起分別同法制備干粉供試品溶液和配方顆粒供試品溶液。取各供試品溶液適量，按2.1項下方法測定橙黃決明素及大黃酚含量及轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表7。

表7 飲片→中間體→配方顆粒指標成分量值轉(zhuǎn)化結(jié)果（%）

2.5.2 量值轉(zhuǎn)化分析

假設(shè)成型工藝研究中各環(huán)節(jié)中無損失，比較決明子飲片-提取液-干粉-配方顆粒間指標成分量值轉(zhuǎn)化的相關(guān)性。由表7可知，由飲片到配方顆粒成品，橙黃決明素總轉(zhuǎn)移率約為78%，在制備工藝全過程中橙黃決明素含量較穩(wěn)定，轉(zhuǎn)移率高，一致性好；大黃酚總轉(zhuǎn)移率在13%左右，主要由于飲片→提取液大黃酚轉(zhuǎn)移率較低（約15%）。綜上所述，決明子飲片-提取液-干粉-配方顆粒間指標成分的量值轉(zhuǎn)化過程較好地保留了原飲片成分。

3 討論

在選擇指標成分時，參考2015年版《中國藥典（一部）》，以橙黃決明素及大黃酚作為評價指標，飲片→提取液→干粉→配方顆粒間橙黃決明素及大黃酚含量考察，水煎工藝大黃酚損失大，確定以橙黃決明素、出膏率作為配方顆粒質(zhì)量控制指標。

本試驗中考察了淀粉、糊精2種輔料，結(jié)果糊精比淀粉流動性、成型性更好，不易吸濕，故選擇糊精作為輔料。通過干粉與糊精比例多次配伍考察，最終確定干粉比糊精（1 ∶1，m/m）制粒，效果最佳。

量值轉(zhuǎn)化將傳統(tǒng)的中藥湯劑制備成中藥配方顆粒后，由于劑型發(fā)生明顯改變，可能影響指標成分的量值轉(zhuǎn)化。本研究中通過考察飲片-提取液-干粉-配方顆粒中指標成分的量值轉(zhuǎn)化，追溯各工藝過程中指標成分的含量及轉(zhuǎn)移率，評價了配方顆粒制備工藝的均一性，也為配方顆粒替代傳統(tǒng)湯劑研究提供了借鑒。