耳復康口服液對順鉑致豚鼠耳聾的影響

劉曉斌，馬俊杰，王華民，李斌峰，馬珍珍，郝少君，孫建華，張正臣

0 引言

耳復康口服液系我院院內制劑，組方由人參、紅花、酸棗仁、骨碎補、路路通、石菖蒲、枸杞、麥冬等組成，臨床應用效果良好。研究顯示，耳復康口服液可改善腎上腺素致小鼠微循環障礙，對腎上腺素致急性血瘀癥小鼠微循環障礙模型毛細血管開放數及血流情況有很好的改善作用，可改善慶大霉素致聾豚鼠的聽力障礙[1-4]，而其對順鉑所致豚鼠耳聾是否存在保護作用，其機制如何，值得進一步研究。本文探討耳復康口服液對順鉑所致豚鼠耳聾的影響，為耳復康口服液在臨床上治療耳鳴耳聾提供實驗依據[5-7]。

1 實驗材料

1.1 藥品及試劑 耳復康口服液，由人參、紅花、川芎、麝香、酸棗仁、石菖蒲、骨碎補、路路通、杞果、麥冬組成；功能主治：益氣活血化瘀、醒腦通竅、祛風通絡、滋陰潛陽。主要用于耳鳴、耳聾及氣虛血瘀性中風；生產廠家：中國人民解放軍第三七一醫院；用法用量：口服，1～2支/次，3次/d；規格：10 ml/支；生產批號：20150706。耳聾左慈丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批準文號：國藥準字Z11020011)。豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號：20180101SR)，丙二醛(MDA)測試盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號：20180101SR)。

1.2 儀器 耳聲發射檢測儀(河南邁松醫用設備制造有限公司，注冊證號：豫械注準字20152210139)；順鉑(齊魯制藥有限公司，批準文號：國藥準字H37021358)。

1.3 動物 Hartley豚鼠，雌雄各半，級別：普通級，合格證編號：37009700000359，提供單位：濟南金豐實驗動物有限公司，許可證號：SCXK(魯)20140006，實驗動物使用許可證編號：SYXK(豫)2015-0005。

2 方法與結果

2.1 方法 將72只健康豚鼠隨機分為空白組，模型組，陽性(耳聾左慈丸)組，耳復康大、中、小劑量組，每組12只，除空白組外，其余各組均給予腹腔注射順鉑注射液4 mg/kg，連續3 d。第4天采用ABR閾值測定對模型復制情況進行評價。造模成功后，除空白組及模型組外，耳聾左慈丸組給藥劑量2.7 g/kg(相當于人臨床劑量的9倍)，耳復康大、中、小劑量組給藥劑量18、9、4.5 ml/kg(相當于人臨床劑量的18、9、4.5倍)給予相應劑量灌胃給藥，所有組別均每天灌胃給藥，1次/d，各組灌胃均持續14 d。于末次給藥后取豚鼠耳蝸。表觀指標：聽覺耳動反射；聽力病理指標：耳蝸組織；生化指標：SOD、MDA。

2.2 結果 聽覺耳動反射又稱普賴厄反射，表現為耳廓豎起以應答刺激的聲音。分別于造模后第3天、給藥第14天，距豚鼠30 cm處用力擊掌發出掌聲作為刺激聲，以此觀察豚鼠耳廓豎起抖動情況。每次檢測擊掌5次，每次擊掌間隔5 s，檢測期間保持周圍環境安靜無明顯雜音以保證檢測不被影響。按照耳廓豎起抖動的強弱程度，將其強度分為4個等級：陰性(-)：耳廓完全無抖動，耳廓反射消失；弱陽性(+)：耳廓抖動微弱，耳廓反射閾值重度提高；中陽性(++)：耳廓抖動較明顯，耳廓反射閾值輕度提高；強陽性(+++)：耳廓抖動非常明顯，耳廓反射閾值幾乎無變化。

2.2.1 耳復康口服液對順鉑所致豚鼠耳聾的影響 ①造模后第3天，各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響：各組給予順鉑注射液3 d后，采用聽覺耳動反射(普賴厄反射)觀察豚鼠耳廓豎起抖動情況，結果見表1。Ridit檢驗顯示，與空白組比較，各組豚鼠耳廓抖動微弱(P<0.01)，說明造模成功。

表1 造模后第3天各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響

②給藥第14天，各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響：各組給予順鉑注射液14 d后，采用聽覺耳動反射(普賴厄反射)觀察豚鼠耳廓豎起抖動情況，結果見表2。結果顯示，經Ridit檢驗，與空白組相比，模型組動物耳廓反射顯著減弱(P<0.01)，說明模型制作成功。給藥14 d后，與模型組相比，陽性組和耳復康大、中、小劑量均可顯著改善順鉑致豚鼠聽覺耳動反射情況(P<0.01)。

表2 給藥第14天各組對順鉑所致豚鼠耳聾的影響

2.2.2 耳復康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型TEOAE的影響 與空白組相比，模型組豚鼠總反應能量升高，說明模型制作成功(P<0.01)。與模型組相比，陽性組及耳復康大、中劑量組豚鼠聽力總反應能量顯著改善(P<0.01)，耳復康小劑量組豚鼠聽力總反應能量明顯改善(P<0.05)，見表3。

2.2.3 耳復康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型MDA、SOD的影響 與空白組相比，模型組SOD水平降低(P<0.01)，MDA水平升高(P<0.01)，說明模型制作成功。與模型組相比，陽性組及耳復康大、中劑量組SOD水平升高(P<0.01)，耳復康小劑量組SOD水平升高(P<0.05)；與模型組相比，陽性組、耳復康大劑量組MDA水平降低(P<0.01)，耳復康中、小劑量組MDA水平降低(P<0.05)，見表4。

2.2.4 耳復康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型耳蝸組織病理切片的影響 空白組：毛細胞胞核與細胞漿形態基本正常，未見病理改變；模型組：毛細胞胞漿空泡樣變，個別細胞固縮；陽性組：毛細胞胞核飽滿，無空泡樣變性，毛細胞未見明顯病理改變；耳復康大劑量組：毛細胞形態正常，未見病理改變；耳復康中劑量組：少量毛細胞胞漿空泡樣變；耳復康小劑量組：少量毛細胞胞漿空泡樣變，個別細胞固縮。見圖1。

表3 耳復康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型TEOAE的影響

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

表4 耳復康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型MDA、SOD的影響

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

圖1 耳復康口服液對順鉑致豚鼠耳聾模型耳蝸組織病理切片的影響(HE，400×)

3 討論

順鉑是療效顯著的廣譜化療藥之一，其不良反應較大[8-10]。對耳的毒副作用雖然出現較遲[11-13]，但目前沒有較好的防治辦法[14]，因此，探尋克服其耳毒性作用的方法至關重要。

隨著年齡的增長，體內的氧代謝減慢，產生的自由基增多，過多的自由基損傷耳蝸細胞，造成聽力的下降和逐漸消失。在抗氧化酶系統中，SOD是重要的一員，可以清除體內代謝產生的氧自由基，測定血清SOD活性，可以反映機體的自由基清除能力。測定耳蝸SOD活性，可以反映SOD對耳蝸的保護作用。MDA是氧化反應產生大量脂質過氧化物的重要產物之一，反映機體自由基的生成水平和組織損傷程度，常與SOD共同作為研究自由基的指標。

耳復康口服液由人參、紅花、麝香、骨碎補、路路通等中藥組成。諸藥合用，具有益氣、活血化瘀、醒腦通竅、祛風通絡、滋陰潛陽的功效。腎中真陽真陰皆得補益，陽蒸陰化，腎氣充盈，則耳聾自除。本研究結果顯示，順鉑誘導豚鼠發生耳聾后，耳復康口服液的干預能夠降低模型豚鼠的反應[15-18]。耳復康大、中、小劑量均可顯著改善順鉑致豚鼠聽覺耳動反射情況；3種劑量均可改善豚鼠聽力總反應能量，升高血清SOD水平，降低MDA水平，改善耳蝸病理組織。

綜上所述，耳復康口服液能改善豚鼠聽覺耳動反射，降低血清中MDA水平，提高SOD水平，能改善耳蝸病理組織。初步認為耳復康口服液能對抗順鉑所致豚鼠耳聾的情況。

致謝：本實驗在河南中醫藥大學苗明三教授指導下完成，特此致謝！