血紅蛋白電泳、MCV在地中海貧血篩查中的應(yīng)用

張麗 孫兩爭(zhēng) 楊明玉

【摘要】 目的：探討分析血紅蛋白電泳、MCV在地中海貧血篩查中的應(yīng)用。方法：選取2017年1月-2018年9月在本婦幼保健院進(jìn)行婚檢、產(chǎn)檢的疑似地中海貧血的319例患者為研究對(duì)象，所有患者均行血紅蛋白（Hb）電泳、MCV檢測(cè)、基因檢測(cè)，其中以基因檢測(cè)結(jié)果為地貧篩查診斷的金標(biāo)準(zhǔn);對(duì)比分析Hb電泳、MCV檢測(cè)、Hb電泳+MCV聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果、敏感度（Se）、特異度（Sp）、準(zhǔn)確度（Ac）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV）、陰性預(yù)測(cè)值（NPV）。結(jié)果：319例患者，經(jīng)基因檢測(cè)陽(yáng)性180例，陰性139例;經(jīng)MCV檢測(cè)陽(yáng)性243例，陰性76例;經(jīng)Hb電泳檢測(cè)陽(yáng)性136例，陰性183例;MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)，陽(yáng)性177例，陰性142例。MCV檢測(cè)、Hb電泳檢測(cè)、MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)三種地貧檢測(cè)結(jié)果（Se、Sp、Ac、PPV、NPV）比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)的Se、Sp、Ac、PPV、NPV均顯著高于MCV檢測(cè)和Hb電泳檢測(cè)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：MCV檢測(cè)、Hb電泳檢測(cè)對(duì)婚檢、產(chǎn)檢人群地中海貧血篩查均具有一定的臨床指導(dǎo)意義，MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)地貧較單一檢測(cè)敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值更高，檢測(cè)效果更佳，對(duì)臨床診斷治療更具指導(dǎo)性意義。

【關(guān)鍵詞】 血紅蛋白電泳; 地中海貧血; 基因檢測(cè); 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值

【Abstract】 Objective：To investigate and analyze the application of hemoglobin electrophoresis and mean corpuscular volume（MCV）in screening of thalassemia.Method：319 patients suspected to be thalassemia while accepting pre-marital medical check-up or antenatal care at this maternal and child care service centre from January 2017 to September 2018 were selected as this study objects，all patients underwent hemoglobin electrophoresis，mean corpuscular volume（MCV）and genetic testing separately，in which，the results of genetic testing was deemed as the gold standard for thalassemia screening;the testing results，the sensitivity（Se），specificity（Sp），accuracy（Ac），positive predictive value（PPV）and negative predictive value（NPV）for single MCV detection，Hb electrophoresis，MCV+Hb electrophoresis combined detection detection were compared.Result：Among 319 patients，180 patients was positive for thalassemia and 139 patients was negative upon genetic testing，243 positive and 76 negative patients upon MVC，136 positive and 183 negative upon hemoglobin electrophoresis，as well as 177 positive and 142 negative after combined detection.There were significant differences in the detection results（Se，Sp，Ac，PPV，NPV）of MCV，hemoglobin electrophoresis and combined detection（P<0.05），and the Se，Sp，Ac，PPV，NPV for MCV+Hb electrophoresis combined detection were higher than MCV and Hb electrophoresis，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：MCV and Hb electrophoresis ?plays a guidance role in screening of thalassemia for pre-marital medical check-up or antenatal care in clinical，the combined detect of MCV+Hb electrophoresis combined detection has higher sensitivity，specificity，accuracy，PPV and NPV compared to single detection，which has better detection effect and is instructive for diagnosis and treatment.

【Key words】 Hb electrophoresis; Thalassemia; Mean corpuscular volume; Positive predictive value

First-authors address：Maternal and Child Health Hospital of Pingshan District in Shenzhen，Shenzhen 518122，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.17.036

地中海貧血（Thalassemia）又稱珠蛋白生成障礙性貧血，是常見(jiàn)的遺傳病之一[1]，因基因缺陷導(dǎo)致血紅蛋白中一種或多種珠蛋白鏈合成缺陷或減少產(chǎn)生的貧血或病理狀態(tài)，然而基因缺陷復(fù)雜多樣，致使缺乏的珠蛋白鏈類型、數(shù)量及臨床癥狀變異性非常大[2]，該種以血紅蛋白產(chǎn)生異常為特征的遺傳性常染色體隱性血液病在世界范圍內(nèi)主要分布在地中海、中東、印度次大陸和東南亞地區(qū)，在我國(guó)南方地區(qū)較為普遍，主要見(jiàn)于廣東、廣西、福建、云南、貴州和四川等地[3-7]。隨著社會(huì)不斷地發(fā)展、環(huán)境的改變，血紅蛋白病發(fā)病率呈升高趨勢(shì)，該類疾病防治機(jī)制尚未健全[8]，為降低地中海貧血兒出生率，在正常體檢、婚檢、產(chǎn)檢地中海貧血篩查顯得尤為重要，臨床上應(yīng)用非常普遍的篩查方法有平均紅細(xì)胞體積（MCV）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（Hb）電泳等[9-10]，且檢測(cè)結(jié)果皆可以作為臨床上篩查地貧的標(biāo)準(zhǔn)，但是因篩查過(guò)程受多種因素干擾導(dǎo)致診斷準(zhǔn)確率欠佳，為充分發(fā)揮篩查結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性，本研究將探討MCV、血紅蛋白電泳及兩者聯(lián)合檢測(cè)的應(yīng)用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2018年9月在本婦幼保健院院進(jìn)行婚檢、產(chǎn)檢的疑似地中海貧血的319例患者為研究對(duì)象，其中男168例，女151例，年齡24～37歲，平均（26.85±4.36）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：在本院接受婚前檢查或產(chǎn)檢發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞脆性<60%或RDW≤16。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有抑郁癥、存在溝通障礙、其他惡性疾病（白血病、惡性腫瘤等）。本研究已獲得本院倫理委員會(huì)許可，且所有患者均就參與本研究簽署書(shū)面知情同意書(shū)，并愿意配合研究的完成。

1.2 研究方法 所有患者均行血紅蛋白（Hb）電泳、MCV檢測(cè)、基因檢測(cè)，其中以基因檢測(cè)結(jié)果為地貧篩查診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[11];對(duì)比分析Hb電泳、MCV檢測(cè)、MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果、敏感度（Se）、特異度（Sp）、準(zhǔn)確度（Ac）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV）、陰性預(yù)測(cè)值（NPV）;其中兩種檢測(cè)方法均出現(xiàn)陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果計(jì)為聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性。所有檢測(cè)操作前采取患者空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血2～4 mL，使用一次性真空采血管（EDTA-K2）收集所采血液并按規(guī)定編號(hào)，均勻搖晃后置標(biāo)本于5 000 r/min，離心半徑13.5 cm，抗凝離心5 min，去血漿以10倍0.9%氯化鈉水溶液洗滌紅細(xì)胞三次，盡量將紅細(xì)胞上多余生理鹽水去除，取10 μL紅細(xì)胞置于裝有130 μL溶血素的試管內(nèi)搖勻，置室溫下培育10 min備用。

1.2.1 MCV檢測(cè) 去EDTA-K2抗凝靜脈血2 mL，采用COULTER?LH750全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，嚴(yán)格按照儀器操作說(shuō)明檢測(cè)血液平均紅細(xì)胞體積（MCV），結(jié)果以成年人MCV≤80 fL為截?cái)嘀担?0 fL

1.2.2 Hb電泳檢測(cè) 使用Helena血紅蛋白電泳儀、掃描儀、分析系統(tǒng)以及電泳儀廠家配套血紅蛋白測(cè)定試劑盒;打開(kāi)電腦及電泳儀開(kāi)關(guān)，檢查試劑及做相應(yīng)準(zhǔn)備工作，按順序每孔加入10 μL備用樣本，將載樣盤插入儀器相應(yīng)位置，其他步驟（如膠片、海綿條放置時(shí)間、位置等嚴(yán)格按照操作說(shuō)明執(zhí)行）;在電腦上按照電泳分析軟件操作步驟進(jìn)行電泳分析并讀取結(jié)果。參考值：成年人血紅蛋白A（HbA）在97%～98%、血紅蛋白A2（HbA2）在2.5%～3.5%為正常，若HbA2低于2.5%則提示可能α地中海貧血陽(yáng)性，若HbA2高于3.5%則提示可能β地中海貧血陽(yáng)性[13]。

1.2.3 基因檢測(cè) 取患者外周血液2～4 mL，通過(guò)DNA提取試劑盒[天根生化科技（北京）有限公司]提取DNA，采用PCR技術(shù)進(jìn)行基因突變位點(diǎn)檢測(cè)，其他步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求和操作規(guī)程操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MCV檢測(cè)、Hb電泳檢測(cè)、MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)及基因檢測(cè)結(jié)果 319例患者：經(jīng)基因檢測(cè)，陽(yáng)性180例（男89例，女91例），陰性139例（男79例，女60例）;經(jīng)MCV檢測(cè)，陽(yáng)性243例，陰性76例;經(jīng)Hb電泳檢測(cè)，陽(yáng)性136例，陰性183例;MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)，陽(yáng)性177例，陰性142例。見(jiàn)表1。

2.2 MCV檢測(cè)、Hb電泳檢測(cè)、MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)地貧結(jié)果 MCV檢測(cè)、Hb電泳檢測(cè)、MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)三種地貧檢測(cè)結(jié)果（Se、Sp、Ac、PPV、NPV）比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;MCV+Hb電泳聯(lián)合檢測(cè)的Se、Sp、Ac、PPV、NPV均顯著高于MCV檢測(cè)和Hb電泳檢測(cè)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

地中海貧血最早發(fā)現(xiàn)于地中海沿岸的希臘、意大利等沿岸城市，并因此而得名[14]，據(jù)資料顯示地中海貧血已經(jīng)威脅著229個(gè)國(guó)家約71%的人群（包括新生兒）[15]。隨著旨在為全球受地中海貧血威脅的國(guó)家和人群提供有關(guān)該病預(yù)防及管理策略的國(guó)際地中海貧血聯(lián)盟（Thalassemia International Federation）的成立以及科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，我國(guó)為在多地區(qū)逐漸形成較為完善的地貧篩查機(jī)制仍在不斷努力，但是受不同地域限制、不同級(jí)別醫(yī)院診斷技術(shù)條件以及諸多外部因素（如經(jīng)濟(jì)條件）的影響，地貧篩查主要以初步診斷（MCV、血紅蛋白電泳、MCH等）為主。基因診斷雖是地貧診斷的金標(biāo)準(zhǔn)（可通過(guò)DGGE、SSCP、DNA序列測(cè)定等檢測(cè)技術(shù)對(duì)未知地貧基因進(jìn)行直接、準(zhǔn)確地篩查）[11，16-18]，其檢測(cè)條件、技術(shù)、經(jīng)驗(yàn)以及檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)較高，對(duì)有條件的地區(qū)或人群相對(duì)首選適用。故而對(duì)于大多數(shù)婚檢、產(chǎn)檢的人群而言，為預(yù)防地貧患兒的出生探索更為有效適用的篩查方法尤為重要。

本研究對(duì)比分析平均紅細(xì)胞體積（MCV）、血紅蛋白電泳以及聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)對(duì)于檢測(cè)特異度而言，與血紅蛋白電泳、MCV+血紅蛋白電泳聯(lián)合檢測(cè)相比，單一MCV檢測(cè)特異度（64.75%）最低，這是因?yàn)閷?duì)于地貧患者而言多表現(xiàn)出MCV降低趨勢(shì)，但是缺鐵性貧血或小細(xì)胞低色素貧血中亦會(huì)出現(xiàn)MCV偏低的情況，因而MCV對(duì)于地貧篩查而言特異性相對(duì)受限[19-20];血紅蛋白電泳是一種借助血紅蛋白具有不同等電點(diǎn)進(jìn)而有效分離并鑒定血紅蛋白成分的技術(shù)，篩查地貧時(shí)可在一定程度上有效提示α地中海貧血或β地中海貧血，是地貧篩查的主要且常用手段，但是對(duì)于輕度地貧無(wú)明顯的特異性癥狀，通過(guò)血紅蛋白電泳篩查可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，故而需要更精確的篩查診斷方法（條件許可時(shí)通過(guò)基因檢測(cè)直接確診）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)MCV+血紅蛋白電泳聯(lián)合檢測(cè)較單一檢測(cè)方法大大提高了敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、PPV和NPV。

本研究缺陷在于未能探討MCV檢測(cè)、紅細(xì)胞（RBC）脆性試驗(yàn)、血紅蛋白電泳、兩兩聯(lián)合以及三者聯(lián)合篩查地貧結(jié)果，因此將來(lái)應(yīng)做進(jìn)一步研究，以為臨床地貧篩查提供更有價(jià)值的參考。

總之，MCV檢測(cè)、血紅蛋白電泳檢測(cè)對(duì)婚檢、產(chǎn)檢人群地中海貧血篩查均具有一定的臨床指導(dǎo)意義，與單一方法檢測(cè)相比，MCV+血紅蛋白聯(lián)合檢測(cè)地貧具有更高的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值，檢測(cè)效果更佳，對(duì)臨床診斷治療更具指導(dǎo)性意義。

參考文獻(xiàn)

[1] Huang H，Xu L，Chen M，et al.Molecular characterization of thalassemia and hemoglobinopathy in Southeastern China[J].Sci Rep，2019，9（1）：3493-3501.

[2]杜萌，朱寶生，呂濤.地中海貧血致病機(jī)制及基因治療進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制，2017，33（1）：58-61.

[3] Li B，Zhang X Z，Yin A H，et al.High prevalence of thalassemia in migrant populations in Guangdong Province，China[J].BMC Public，Health，2014，14（1）：905-912.

[4] Lai K，Huang G，Su L，et al.The prevalence of thalassemia in mainland China：evidence from epidemiological surveys[J].Sci Rep，2017，7（1）：920-930.

[5]林娜，黃海龍，王燕，等.福建地區(qū)269對(duì)同型地中海貧血基因攜帶者夫婦產(chǎn)前基因診斷結(jié)果分析[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2016，24（6）：395-398.

[6]張杰，賀靜，曾小紅，等.云南省人群地中海貧血遺傳多樣性的研究[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，37（1）：28-34.

[7]劉富華，賈藝聰，陳潔晶，等.廣西地區(qū)13589例地中海貧血篩查結(jié)果及基因突變類型分析[J].臨床血液學(xué)雜志，2015，28（11）：966-969.

[8]梁秋.我國(guó)地中海貧血診治進(jìn)展與現(xiàn)狀[J].臨床醫(yī)學(xué)研究與實(shí)踐，2016，1（24）：195-196.

[9]盧燦娣，魏權(quán)，陳麗娟，等.血紅蛋白電泳在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值研究[J].心血管病防治知識(shí)（學(xué)術(shù)版），2015（10）：142-143.

[10]薛艷梅.MCV MCH RBC計(jì)數(shù)和血紅蛋白電泳在地中海貧血篩查中的診斷價(jià)值[J].醫(yī)學(xué)信息，2014（17）：182.

[11]劉貴建，孫士鵬.地中海貧血的實(shí)驗(yàn)診斷：項(xiàng)目和方法的選擇及臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35（5）：385-389.

[12]李銘臻，潘干華，周冰燚，等.β地中海貧血篩查中MCV可靠性的分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2014，22（5）：22-23.

[13] Alauddin H，Mohamad Nasir S，Ahadon M，et al.Hb lepore/β0-thalassaemia with α+-thalassaemia interactions，a potential diagnostic pitfall[J].Malays J Pathol，2015，37（3）：287-292.

[14] Taher A T，Weatherall D J，Cappellini M D.Thalassaemia[J].Lancet，2018，391（10116）：155-167.

[15] Penman B S，Gupta S，Weatherall D J.Epistasis and the sensitivity of phenotypic screens for beta thalassaemia[J].Br J Haematol，2015，169（1）：117-128.

[16]韓文平，王樹(shù)輝，徐琴，等.貴陽(yáng)地區(qū)育齡人群HbA2篩查輕型β-地中海貧血截?cái)嘀档拇_定[J].貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，42（10）：1121-1124.

[17]唐娟，張崇林，蔣群芳，等.β-地中海貧血基因診斷技術(shù)進(jìn)展及無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷的研究[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2015，21（12）：5-6.

[18] Jalil T，Yousafzai Y M，Rashid I，et al.Mutational Analysis Of Beta Thalassaemia By Multiplex Arms-Pcr In Khyber Pakhtunkhwa，Pakistan[J].J Ayub Med Coll Abbottabad，2019，31（1）：98-103.

[19]吳蓓穎，江岑，王也飛，等.血常規(guī)、血清鐵及血紅蛋白電泳聯(lián)合檢測(cè)在地中海貧血非高發(fā)地區(qū)的篩查意義[J].中華血液學(xué)雜志，2016，37（10）：908-911.

[20] Thongyou Y，Tongprasert F.A comparison of mean corpuscular volume（MCV）between thalassemia-carrier and non-thalassemia-carrier pregnant women receiving highly active antiretroviral therapy（HAART）[J].Taiwan J Obstet Gynecol，2017，56（6）：736-739.

（收稿日期：2019-03-20） （本文編輯：張爽）