枳實芍藥散對C-IBS大鼠VIP的調節作用

辛 丹 季旭明 張亞楠 王 媛 王世軍 滕佳林

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome, IBS)是臨床常見腸道功能紊亂性疾病，其主要特征為腹部疼痛伴隨大便性狀和排便次數改變[1,2]。其中，便秘型腸易激綜合征(C-IBC)較為常見[3]?，F代研究表明C-IBS的病因涉及胃腸紊亂及內臟感覺異常等。血管活性腸肽(VIP)是一種重要的肽類神經遞質，廣泛分布于胃腸道和神經系統。杜麗娟等[4]研究發現VIP在結腸中含量最高，它能夠調節腸動力，參與腸道動力紊亂的反應，對胃腸道平滑肌有松弛作用，從而抑制胃腸蠕動，導致便秘的發生，與C-IBS的病理形成過程有關[5～7]。枳實芍藥散由枳實、白芍兩味藥物組成，始載于《金匱要略》，是治療腹痛腹滿的經方，其組方精簡，主治血瘀氣滯之腹滿脹痛，符合中醫對IBS的治則。因此，本研究擬觀察枳實芍藥散對C-IBS大鼠的作用及對VIP表達的影響，從而探討枳實芍藥散治療C-IBS的可能機制。

材料與方法

1.動物:成年雄性Wistar大鼠60只，SPF級，體質量為200±20g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物使用許可證號：SCXK(京)20160006。確保實驗室的溫度保持在22～25℃，將大鼠適應性喂養1周后開始實驗。

2.儀器和主要試劑:高速粉碎機(永康市速鋒工貿有限公司、YB-1000A型)，移液器(Finnpipette)，電熱恒溫培養箱(武漢一恒蘇凈科學儀器有限公司，37℃)，洗板機(Tianshi，988洗板機)，酶標儀(Rayto，RT-6100)，離心機(微量高速離心機，TG16W)，冷凍離心機(TGL16M臺式高速冷凍離心機)，VIP ELISA試劑盒(上海創祥生物科技有限公司)，枳實、芍藥購自濟南市中魯醫院，匹維溴銨片購自北京萬生藥業有限責任公司。

3.藥物制備:枳實、白芍用打成粉末，參照《金匱要略》枳實芍藥散的原方藥物比例，結合《中華人民共和國藥典》(2015年，第1部)及臨床實際用藥情況，用時按給藥劑量新鮮配制成0.164g/ml的混懸液，并將匹維溴銨配制成13.5mg/ml混懸液。

4.分組及造模:將60只SPF級的Wistar大鼠隨機分為空白組和實驗組，空白組10只，實驗組50只?？瞻捉M大鼠給予26～28℃生理鹽水灌胃，2毫升/只，每天1次，共14天；實驗組大鼠給予0～4℃冰生理鹽水灌胃，2毫升/只，每天1次，共14天[8]。造模結束后，在空白組和實驗組當中各隨機選取6只大鼠，檢測其糞便含水量，據此評價造模是否成功。

5.給藥：實驗組大鼠隨機分為模型對照組、匹維溴銨組、枳實芍藥散高劑量組、枳實芍藥散中劑量組和枳實芍藥散低劑量組，每組10只。空白組和模型對照組均按照10ml/(kg·d)給予26～28℃生理鹽水灌胃；匹維溴銨組大鼠按照0.0135g/(kg·d)給予匹維溴銨混懸液治療；枳實芍藥散組大鼠高劑量組用藥量為3.28g/(kg·d)、中劑量組用藥量為1.64g/(kg·d)、低劑量組用藥量為0.82g/(kg·d)。

6.小腸推進率:大鼠取材前禁食不禁水12h，各組大鼠均給予墨汁1ml灌胃，用20%烏拉坦6ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，30min之后，剖開下腹分離腸系膜，取出上至幽門下至回盲部的腸道，置于托盤上將小腸輕輕的拉直，測量上至幽門下至回盲部全長(小腸總長度)和墨汁前沿距幽門的距離(墨汁推進長度)，計算出小腸的推進率。小腸推進率(%)=墨汁推進的長度/小腸的總長度×100%。

7.ELISA檢測VIP的表達:給藥結束后，按照6ml/kg的比例腹腔注射20%烏拉坦以麻醉大鼠，打開腹腔，用一次性真空負壓管腹主動脈采血，靜置30min后，以3000r/min離心分離血清，ELISA檢測各組大鼠血清中VIP含量的變化。

結 果

1.模型評價:與空白組(49.57%±11.78%)比較，模型對照組糞便含水量(31.33%±12.13%)明顯降低，且差異有統計學意義(P<0.05)，說明造模成功，結果見圖1。

圖1 糞便含水量比較

2.枳實芍藥散對小腸推進率的影響：各組大鼠小腸推進率結果差異有統計學意義。與空白組(78.16%±5.81%)比較，模型對照組(58.17%±3.42%)、匹維溴銨組(69.62%±3.92%)、枳實芍藥散高劑量組(64.35%±2.10%)、枳實芍藥散中劑量組(63.61%±4.27%)和枳實芍藥散低劑量組(59.77%±4.92%)的小腸推進率降低，差異有統計學意義(P<0.01)；與模型對照組比較，枳實芍藥散高劑量組和枳實芍藥散中劑量組的小腸推進率升高，差異有統計學意義(P<0.05)；與模型對照組比較，匹維溴銨組的小腸推進率顯著升高，差異有統計學意義(P<0.01)。詳見圖2。

圖2 各組大鼠小腸推進率比較與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.01，##P<0.05

3.枳實芍藥散對C-IBS大鼠血清VIP的影響：ELISA結果顯示各組大鼠VIP相對表達量比較差異有統計學意義。與空白組(54.68±4.44pg/ml)比較，模型對照組(272.08±15.83pg/ml)、枳實芍藥散高劑量組(113.39±7.60pg/ml)、枳實芍藥散中劑量組(177.44±23.33pg/ml)和枳實芍藥散低劑量組(209.67±20.02pg/ml)VIP的表達水平明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)；與空白組比較，匹維溴銨組(95.33±18.85pg/ml)VIP的表達水平升高，差異有統計學意義(P<0.01)；與模型對照組比較，匹維溴銨組、枳實芍藥散高劑量組、枳實芍藥散中劑量組和枳實芍藥散低劑量組VIP的表達水平下降，差異有統計學意義(P<0.01)，詳見圖3。

圖3 各組大鼠血清中血管活性腸肽濃度比較與空白組比較，*P<0.01，**P<0.05；與模型組比較，#P<0.01

討 論

IBS是多種因素相互交織、相互作用所導致的，目前尚無完善的治療方法[9]。現代醫學對C-IBS病因的研究涉及胃腸紊亂及腸道微生物菌群改變、內臟感覺異常和腦-腸軸活動異常、炎癥和免疫成分的改變以及基因與遺傳及精神心理因素等，以胃腸動力紊亂和內臟感覺異常最為常見[10～14]。古代中醫書籍并沒有C-IBS病名的詳細記載，臨床中根據其腹痛、腹部不適、大便困難等表現，將其歸屬為中醫“便秘”的范疇[15]。本病主要發生在大腸，其常見的病機有胃腸氣機郁滯，津虧血少等。

《金匱要略·婦人產后》曰：“產后腹痛，煩滿不得臥，枳實芍藥散主之”。枳實辛散苦降，為破氣消積，化痰除痛之要藥。白芍有益血斂陰、柔肝止痛和平抑肝陽的功效。枳實和白芍兩藥配伍，組成枳實芍藥散。臨床運用時沒有局限于“產后腹痛”，凡氣血郁滯、氣機不暢者均能以此方為主化裁使用，符合中醫對IBS腹痛腹滿的中醫治則。從發病癥狀和病因來看，本方的適應證與腸易激綜合征很接近[16]。筆者實驗結果發現，枳實芍藥散高劑量組和枳實芍藥散中劑量組均能升高C-IBS大鼠的小腸推進率，說明枳實芍藥散可以改善C-IBS大鼠胃腸紊亂的癥狀。

VIP是調節胃腸蠕動的重要腸神經遞質。VIP對胃腸道的作用具體表現在以下幾個方面：①抑制胃腸運動，延長胃排空時間；②抑制腸道環形機收縮，使結腸處于較長時間的舒張狀態；③對腸壁內神經叢的抗應激及穩定作用。在結腸動力障礙的患者中，VIP的舒張反應明顯減弱，說明VIP可能通過神經機制直接對腸道肌條收縮產生影響。研究發現，C-IBS患者結腸粘膜VIP含量升高，使蠕動性收縮不易發生，從而導致便秘[17]。筆者的實驗結果發現模型對照組中VIP表達量增高，給予枳實芍藥散治療后，其表達量下降，以枳實芍藥散高劑量組下降最為明顯，結果表明枳實芍藥散可以下調C-IBS大鼠VIP表達水平。

綜上所述，枳實芍藥散對C-IBS具有較好的治療效果，其機制可能與降低VIP的水平有關。因此采用枳實芍藥散治療具有一定的可行性，但其具體作用機制還有待于進一步研究。