慈航丹方藥3 種方法提取液鎮痛、抗炎的比較研究

于定榮 李超 陳暢 顧雪竹 張方博 王麗芳 麻印蓮

原發性痛經在中醫學上稱為“經行腹痛”，是一種常見的婦科疾病，通常在婦女經期或行經前后的期間發作，而又多見于青年女性，嚴重危害女性患者的身體以及心理健康。目前，原發性痛經的中藥治療已經有大量的報道。常見的有溫經湯[1-2]、少腹逐瘀湯[3]、當歸四逆湯[4]、桃紅四物湯[5]等方藥，對各型的原發性痛經具有較好的臨床療效。慈航丹為其中方劑之一，被收載于《全國中藥成藥處方集》（撫順方）[6]，由益母草等4味中藥組成，用于活血調經止痛，療效顯著。本實驗將慈航丹方藥用3種方法進行提取，以分子量≤1 000 Da的半仿生提取液（semi-bionic extract，SBE）、醇提取液（alcohol extract，AE）、水提取液（water extract，WE）對小鼠痛經模型及抗炎作用進行比較研究，本研究旨在評估慈航丹方藥對實驗性痛經模型小鼠的鎮痛作用及抗炎作用，并比較3種方法提取液的作用效果，為半仿生提取法提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗藥品

水合氯醛（青島宇龍海藻有限公司，批號：T20080943，水合氯醛溶液10%），苯甲酸雌二醇注射液 （廣州白云山明興制藥有限公司，批號：081006；2 mg/mL）；縮宮素注射液 （西南藥業股份有限公司，批號：071113；10單位/mL）；前列地爾注射液（本溪恒康制藥有限公司，批號20071126；5 μg/mL）；EDTA（北京吉美生物技術有限公司，批號20070618，分析純AR 250g）。

益母草、當歸、川芎、香附四種中藥飲片均來源于山東博康中藥飲片有限公司，其中益母草批號：20071213；當歸批號：20080441；川芎批號：20080221；香附批號：20080109。

1.2 實驗動物

試驗動物：雌性ICR小鼠，體質量為18～22 g；Wistar大鼠，體質量為180～220 g，雌雄各半；以上動物來源于山東中醫藥大學動物室（均為清潔二級），合格證號：SCXK（魯）20071218。

1.3 樣品液的制備

1.3.1 分子量≤1 000 Da提取物的SBE 樣品液的制備 將處方比例量益母草、當歸、川芎、香附混合粉碎，以水為溶劑，連續提取3次。第一次提取2.0 h，加水量為藥重量的10倍，pH用HCl調整為6.0；第二次提取時間為1.0 h，加水量為藥重量的8倍，pH值用NaOH調整為7.5；第三次提取時間為1.0 h，加水量為藥重量的8倍，pH值用NaOH調整為9.0。分別將3次提取液濾過，高速離心20 min（2 000 r/min），再以中空纖維膜濾過，將濾液濃縮，合并，最后定容至1 000 mL（其質量濃度為174 g/L）[7]。

1.3.2 分子量≤1 000 Da提取物的AE液、WE液的制備 照1.3.1項下方法，將3煎溶劑分別改為80%乙醇和中性水，其余依法操作，即得（其質量濃度均為174 g/L）。

1.4 供試液（分子量≤1 000 Da）的制備

將1.3項下制備的SBE、WE、AE 3種樣品液（質量濃度為174 g/L），分別濃縮，制備得SBE、WE、AE 3種供試液，供大鼠測定血清雌二醇（E2）含量測定（質量濃度均為700g/L）。

2 實驗方法

2.1 對藥物誘發痛經模型的影響

2.1.2 前列腺素PGE1所致小鼠痛經模型試驗 取1項下雌性小鼠36只，按2.1.1項下方法分組，以（20 mL/kg）劑量給各組動物灌胃給藥，一天1次，連續灌胃給藥2周，直至最后給藥的第2天和第3天，通過皮下注射苯甲酸雌二醇注射液（1 mL/kg）后再禁食12 h；在末次給藥40 min后，通過腹腔注射前列腺素PGE1（1.2 mg/kg），記錄其30 min內扭體次數和潛伏期，并由公式Ⅰ計算其鎮痛抑制率[9]。根據2.1.1項下方法，比較3種提取液對由前列腺素PGE1引起小鼠痛經樣反應的影響。

2.2 抗炎試驗

2.3 統計學方法

采用SigmaStat 3.5 統計學軟件分析數據，計量資料用表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 對藥物誘發痛經模型的影響試驗結果

3.1.1 縮宮素所致小鼠痛經反應試驗結果 與對照組相比，所有的試驗組都有抑制縮宮素所致的小鼠痛經的作用，具有極顯著性差異（對照組與SBE組t值=25.177，P＜0.01；對照組與AE組t值=17.765，P＜0.01；對照組與WE組t值=8.408，P＜0.01），且AE組、WE組與SBE組相比，也有極顯著性差異（AE組與SBE組t值=7.412，P＜0.01；WE組與SBE組t值=16.769，P＜0.01），各組動物中SBE組扭體次數最少，表明其產生抑制痛經的作用最強。見表1。

3.1.2 前列腺素PGE1所致小鼠痛經模型試驗結果 與對照組相比，3組均能極顯著地抑制痛經的作用（對照組與SBE組t值=28.640，P＜0.01；對照組與AE組t值=20.421，P＜0.01；對照組與WE組t值=9.460，P＜0.01），此外，AE組、WE組與SBE組相比，也有極顯著性差異（AE組與SBE組t值=11.000，P＜0.01；WE組與SBE組t值=19.181，P＜0.01）；3組之中SBE組扭體次數最少，表明其抑制痛經的效果最強。見表2。

3.2 抗炎試驗結果

3.2.1 小鼠耳腫脹試驗結果 除對照組外，各組均能抑制小鼠的耳廓腫脹，與對照組比較，各組均有極顯著性差異（對照組與SBE組t值=15.866，P＜0.01；對照組與AE組t值=12.106，P＜0.01；對照組與WE組t值=5.872，P＜0.01），其中SBE組抑制小鼠的耳廓腫脹效果最為明顯；且SBE組、AE組之間也存在著顯著性差異（AE組與SBE組t值=3.759，P＜0.05）；SBE組和WE組有極顯著性差異（WE組與SBE組t值=9.994，P＜0.01）。見表3。

3.2.2 大鼠棉球肉芽腫試驗結果 與對照組相比，SBE組、AE組、WE組均能極顯著性地減輕大鼠棉球肉芽腫（t對照組與SBE組=25.613，P＜0.01；對照組與AE組t值=18.139，P＜0.01；對照組與WE組t值=13.840，P＜0.01），其中以SBE組對抗慢性炎癥的肉芽組織增生的作用最強；但試驗組中，SBE組與AE、WE組也存在著極顯著性差異（AE組與SBE組t值=7.474，P＜0.01；WE組與SBE組t值=11.773，P＜0.01）。見表4。

表1 3 種方法提取液對縮宮素所致小鼠痛經模型的影響結果

表2 3 種方法提取液對前列腺素PGE1 所致小鼠痛經模型的影響結果

表3 3 種方法提取液對小鼠的耳腫脹度及抑制作用結果

表4 3 種方法提取液對大鼠棉球肉芽腫的影響

4 討論

中醫認為，痛經是由于患者氣血運行不通，宮胞經血流受阻所致；而現代醫學認為，原發性痛經發病機制與前列腺素密切相關：前列腺素的異常增加是其重要的致病因素，導致子宮發生異常收縮，從而減少子宮血流量，引起其周圍神經的敏感性，從而產生疼痛。目前，原發性痛經的病理機制還沒有完全明確，現代醫學通過緩解緊張的子宮平滑肌細胞、擴張血管以及加快血液流通速度作為治療痛經的原則[12]，針對原發性痛經西醫主要是采取對癥治療，包括使用非甾體消炎藥、激素避孕藥、鈣通道阻滯劑等，但在臨床上產生的不良反應較多[13]。近年來中醫治療原發性痛經方面的臨床研究已經有大量報道，但實驗性研究較少[14-16]，且以縮宮素和前列腺素為較公認的在體子宮痙攣（類痛經反應）病理模型。本試驗以縮宮素和前列腺素PGE1建立小鼠痛經模型，并結合大鼠的抗炎試驗比較慈航丹方藥3種方法提取液的鎮痛、抗炎的作用效果。試驗結果表明，慈航丹方藥3種方法提取液（分子量≤1 000 Da）對縮宮素、前列腺素PGE1所致小鼠痛經以及對小鼠耳腫脹、大鼠棉球肉芽腫均具有顯著的影響，均能顯著性地抑制藥物誘發所致痛經及具有抗炎作用；其作用效果依次為：SBE組＞AE組＞WE組；其中SBE組抑制痛經和抗炎作用最強。該研究也為中藥治療月經不調在臨床上提供了一定的實驗依據。

5 小結

慈航丹方藥3種方法提取液（分子量≤1 000 Da）對縮宮素、前列腺素PGE1所致小鼠痛經模型均有極顯著性的鎮痛作用；對小鼠耳腫脹、大鼠棉球肉芽腫均有極顯著性的抗炎作用；其中以半仿生提取液（SBE液）的鎮痛、抗炎作用最強，表明慈航丹方藥水提、醇提以及半仿生提取3種提取方法中，以半仿生提取法的效果最佳。