湛江地區478例兒童地中海貧血基因檢測及結果分析

龐偉鴻 陳曉煜 葉曉云 李 艷 陳亞珍

廣東省湛江中心人民醫院，廣東湛江 524045

地中海貧血是一種珠蛋白鏈合成比例失衡的單基因遺傳病，據受損珠蛋白的不同可分為α-地中海貧血和β-地中海貧血兩大類，均呈常染色體隱性遺傳。α-地中海貧血主要由發生于16 號染色體短臂末端α-珠蛋白基因簇內包含α 基因在內的缺失引起，少數由點突變引起，β-地中海貧血主要由發生于位于11 號染色體短臂的β 基因內的點突變引起[1-2]。其臨床癥狀差異較大，輕者與常人無異，重者會出現胎兒水腫或夭折現象，有些患者需要終生輸血來維持生活，給家庭社會帶來沉重的負擔[3]。湛江本就屬于地中海貧血高發地區，但是自2003 年10 月1 日國家婚姻法確定取消了強制婚前檢查（包括了地中海貧血檢查）開始，使得一部分夫婦取消了婚檢甚至產檢，造成嬰兒出生缺陷率上升，為下一代的健康埋下了隱患。因此對該地區中可能攜帶地中海貧血基因兒童進行篩查，運用先進的PCR+膜技術進行地中海貧血基因檢測，并統計該地區兒童地中海貧血多發基因類型和其發生率，可有效地減少育齡夫婦因攜帶同型地中海貧血基因而可能生出中、重型地中海貧血患兒的機率。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從2015 年1 月～2017 年12 月在湛江中心人民醫院門診和住院部就診的疑診地中海貧血兒童共478 例，其中男251 例，女227 例，年齡3 ～12 歲，平均（7.5±1.4）歲。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 采用無菌抗凝管（EDTA 抗凝管），抽取靜脈血2mL 混勻，樣本采集后應立即送檢。4℃保存不超過3d，-20℃保存不超過3 個月進行檢測。標本運送時建議采用低溫保存運送。

1.2.2 αβ 地中海貧血基因檢測 取待檢血液200μL，具體操作步驟嚴格按照作業書規程進行。觀察膜條上出現的藍色斑點顯色來判定結果，該檢測用于中國人常見的3 種α 缺失型地中海貧血（-SEA、-α3.7和-α4.2），2 種α 突變型地中海貧血（CS、QS）及11 種β 突變型地中海貧血（CD41-42、CD43、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVS Ⅰ-1、CD27-28）。若在突變或缺失檢測探針處出現顯色強度與相應的正常對照探針相近的藍紫色斑點，則該位點為地中海貧血突變或缺失的雜合子。

2 結果

2.1 本組478例檢測者檢測結果

經過基因檢測確診為地中海貧血280 例，其中α-地中海貧血159 例，β-地中海貧血107 例，α-地中海貧血復合β-地中海貧血14 例，還發現一例有巴氏綜合征（胎兒水腫）。其中α-地中海貧血以東南亞型缺失的α-地中海貧血為主，數量達111 例（23.22%），其次是3.7 雜合缺失的α-地中海貧血數量為36 例（7.52%）。β-地中海貧血以41-42 位點純合突變的β-地中海貧血為主，數量為45 例（9.41%），其次是654 位點雜合突變的β-地中海貧血為31 例（6.48%）。見表1。

2.2 α-地中海貧血基因檢測結果

159 例α-地中海貧血共檢測出185 個含有6種常見α-地中海貧血等位基因，攜帶率、頻率和分布情況，見表2。

表1 478例檢測者檢測結果

2.3 β-地中海貧血基因檢測結果

107 例β-地中海貧血共檢測出115 個含有10 種常見等位基因，攜帶率、頻率和分布情況，見表3。

表2 α-地中海貧血基因檢測結果

表3 β-地中海貧血基因檢測結果

3 討論

流行病學資料顯示，地中海貧血廣泛流行于地中海沿岸、東南亞及我國南方地區，其發生率、基因突變類型和頻率存在明顯的種族地域及人群差異。基因是由珠蛋白鏈的分子結構及合成來決定的，若正常人父母雙方各繼承2 個α 珠蛋白基因（αα/αα）合成足夠的α 珠蛋白鏈；自父母雙方各繼承1 個β 珠蛋白基因合成足夠的β 珠蛋白鏈。因珠蛋白基因的缺失或突變，肽鏈合成障礙致使發病，β 及α 在地中海貧血中是常見的類型。地中海貧血的檢測方法包括地中海貧血的初篩試驗和基因確診，前者主要有平均紅細胞體積MCV、平均紅細胞血紅蛋白含量MCH 和紅細胞脆性試驗及血紅蛋白電泳，可以初步診斷地中海貧血[4-5]；而后者則依靠地中海貧血基因的分子生物學診斷。本研究中的478 例檢測者已有302 例經初步懷疑是地中海貧血，在進行地中海貧血基因檢測后有280 例確診為地中海貧血，發生率為58.57%。其中α-地中海貧血159 例，占33.26%，β-地中海貧血107例，占22.38%。α-地中海貧血復合β-地中海貧血14 例，占2.93%；與賀鈺等報道的檢測結果[3]相符。由于中型和重型的α 或β 地中海貧血均為致死性或致殘性血液病，目前尚無理想的治愈方法，因此，通過大規模人群的遺傳篩查、基因分型檢測、遺傳咨詢和產前診斷，避免受累胎兒的出生是最佳選擇[6-8]。

從本地區兒童地中海貧血發生情況來看，結果依然不容樂觀。自2003 年國家取消強制婚前檢查，我國出生缺陷發生率有所上升[9-11]。相關數據顯示[12-13]：地中海貧血發生率沒有得到改善反而有所上升。此外，還發現14 例αβ 復合型地中海貧血，1 例巴氏綜合征（胎兒水腫）。由于αβ 復合型地中海貧血的血紅蛋白電泳表現不典型，應同時進行α 和β 地中海貧血基因檢測，避免復合型地中海貧血的漏診。

159 例α-地中海貧血共檢測出185 個α-地中海貧血等位基因，攜帶率為38.70%，以-SEA 基因為最多111 個，攜帶率為23.22%，構成比占60.00%。其次是-α3.7 和-α4.2 構成比分別為19.47%、9.73%；此結果與同類研究結果吻合[14]。107 例β-地中海貧血患者共檢測出115 個β-地中海貧血患者等位基因，攜帶率為24.06%，其中β41-42 基因45 例，攜帶率為9.41%，構成比占39.13%。其次是β654和β17 構成比分別為26.96%、9.56%。此結果與文獻報道[15]的相符。地中海貧血基因同型攜帶者婚配的下一代有1/4 的機會患重癥地中海貧血[16]。因此，監測本地區人群中地中海貧血患者的基因類型和頻率，對減少地中海貧血的危害，提高本地區的人口素質具有重要的意義。

總而言之，基因檢測技術可精準的檢測出兒童地中海貧血的類型，初步了解了湛江地區兒童地中海貧血的基因突變普，為地中海貧血的診斷提供了科學的依據，更是促進了湛江地區地中海貧血的防治工作，對提高湛江地區得到人口質量有著重大的經濟和社會效益。