血小板減少性紫癜患者抗核抗體以及抗心磷脂抗體的檢驗及其臨床應用價值探討

劉 亞 余志斌

（重慶天府礦務局職工總醫院檢驗科，重慶 400700）

特發性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）屬于臨床治療中一種具有較高發生率的出血性疾病，多數研究者均認為疾病的發生與免疫因素、病毒感染存在密切相關性[1]。抗心磷脂抗體（ACA）為屬于一種抗磷脂抗體，其結合在磷脂抗原中，是自身免疫性抗體，與諸多自身免疫性疾病的發生均存在密切關系。既往研究顯示，ACA通過與血小板中的膜磷脂抗生素原相互結合，破壞血小板，導致血小板出現消耗性減少[2]。本研究主要探討血清ANA、ACA水平與ITP存在的相關性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取48例2016年4月至2018年6月在本院接受診治的ITP患者作為研究對象。其中男16例，女32例，年齡14～58歲，平均（38.9±4.8）歲。選擇相同時間段在本院接受健康體檢，且體檢結果為良好的48名健康者作為參照組，所有入選者均簽署知情同意書，自愿加入研究。納入者男18名，女30名；年齡15～59歲，平均（38.7±4.6）歲；在納入者相關基線資料（年齡、性別等）對比上，兩組間差異無顯著性（P＞0.05），具有可比性。

1.2 病例納入及排除標準：納入標準：①符合ITP相關臨床診斷標準[3]；②血小板計數≤50×109/mL；③簽署相關知情文件，自愿參與研究；④臨床檢驗資料齊全。排除標準：①伴有系統性紅斑狼瘡；②伴有其他結締組織病。

1.3 方法：抗核抗體、抗心磷脂抗體試劑均為德國EUROIMMUN公司提供。應用到儀器主要為 BC5800 全自動細胞分析儀（深圳邁瑞）、全自動酶標分析儀（上海訊達儀器公司）。在受檢者空腹狀態下采集其2 mL靜脈血作為標本，靜置使血清分離，該分離過程控制在3 h內結束，然后將樣本放置于-20 ℃環境中待測。檢驗過程中相關操作均嚴格按照儀器及試劑說明書規范進行。

1.3.1 ACA檢測：通過酶聯免疫吸附試驗法行ACA含量檢測。使用稀釋液按照1∶201比例將待測血清樣本稀釋，然后再與質控、標準血清同時加至包被微孔中。經過孵育洗滌流程之后再將酶標記抗體加入。完成孵育洗滌流程后再將顯色劑加入，通過酶標儀進行比色。以標準曲線為根據將標本中抗心磷脂抗體含量計算出來。

1.3.2 ANA檢測：抗原基質為猴肝片、Hep-2細胞。通過間接免疫熒光法實施ANA含量檢測。以猴肝片以及Hep-2細胞細胞核是否有特異性熒光產生作為根據判斷檢測標本中是否存在ANA。

1.3.3 ENA檢測：選用免疫印跡法進行ANA含量檢測。先將皮膚敏感抗原、將親和層析純化核抗原核糖核蛋白、Scl-70、Jo-1、平滑肌抗原轉印至硝酸纖維薄膜上，再將血清、酶標記抗體加入。以硝酸纖維薄膜為根據判斷是否顯現顏色。以滴度是否＞1∶100作為根據，判斷是否存在某種抗ENA抗體。具體操作按照試劑盒說明書規范實施。給予患者7 d治療后，再抽取其靜脈血送檢，行血小板計數復查。治療方法為給予患者免疫球蛋白、糖皮質激素、止血藥等。

1.4 觀察指標及檢驗結果判斷：觀察ACA、ANA以及ENA檢測結果，ACA含量＞12 IU/mL判定為陽性；抗核抗體滴度＞1∶100判斷為ANA陽性；觀察研究組患者治療前、后血小板計數。

1.5 統計學方法：以SPSS 22.0軟件為工具行數據統計學分析。計數資料（檢測陽性率等）采用例數和百分比（%）表示，比較行χ2檢驗；計量資料（血小板計數）采用均數±標準差（±s）表示，比較行t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

表1 兩組ACA、ANA檢測結果對比[n（%）]

表2 兩組抗ENA抗體檢測結果對比[n（%）]

表3 兩組ANA及ACA陽性、陰性ITP治療前后血小板計數比較（±s）

表3 兩組ANA及ACA陽性、陰性ITP治療前后血小板計數比較（±s）

組別 例數 治療前(×10/L) 治療后(×10/L) t P 99 ANA陽性組 14 19.28±11.35 202.45±119.25 5.694 0.000 ANA陰性組 34 19.90±10.63 221.35±142.35 5.788 0.000 t-0.087 0.756 - -P-0.926 0.355 - -ACA陽性組 20 18.26±11.36 203.42±115.62 7.111 0.000 ACA陰性組 28 18.82±10.47 240.46±108.94 8.241 0.000 t-0.059 2.875 - -P-0.950 0.032 - -

2 結 果

2.1 兩組ACA、ANA檢測結果比較：研究組ACA/ANA陽性率均顯著高于參照組（P＜0.05），見表1。

2.2 兩組抗ENA抗體檢測結果比較：在研究組患者中，有10例ANA為陽性的標本中出現≥1種ENA抗體，抗SSA、nRNP陽性最高，見表2。2.3 兩組治療前后血小板計數比較：治療后，所有患者血小板計數均有顯著提高，但ACA陽性組顯著低于ACA陰性組（P＜0.05），見表3。

3 討 論

ACA是一種自身抗體，其靶抗原為內皮細胞膜上帶負電荷心磷脂以及血小板。ACA能夠與帶負電荷磷脂、狼瘡樣抗凝物質發生交叉反應。臨床研究顯示，ACA與習慣性流產、血栓形成、神經系統疾病發生、血小板減少均存在密切相關性[4]。本研究分析結果顯示，研究組ACA陽性率高達70.83%，而健康者陽性率則為0。張文蘭文獻指出，與ACA陰性者相比，ACA陽性者出現血小板減少的概率要高出3倍。曹新春等[5]文獻指出，帶負電荷的磷脂以及其他靶抗原均有可能是ACA的靶抗原。本次研究分析結果顯示，ACA陽性組患者治療后血小板計數顯著低于ACA陰性組。該結果表明，ACA陽性可能是導致ITP患者血小板計數明顯減少的一個重要原因，具體機制可能如下：①ACA可對血小板活化產生促進作用，血小板活化后構成內膜的負電荷磷脂能夠翻轉到表面，轉變能夠與ACA發生反應的狀態，血小板、ACA二者相互作用，導致巨噬細胞系統對血小板產生的破壞、吞噬作用不斷增加，進而使血小板出現消耗性減少；②血小板在ACA促進下活化后，血小板內容物花生四烯酸的釋放明顯減少，對內皮細胞釋放前列環素產生明顯抑制作用，進而引發血小板聚集，導致血栓形成，進一步減少血小板計數[6-7]。由此可知，行ACA測定在一定程度上能夠反映ITP患者血清血小板遭受損傷情況，對ITP臨床診斷具有一定意義。

ANA是一種自身抗體的總體，其靶抗原為細胞核內各種蛋白質分子以及蛋白質分子的復合物[8]。在類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、血小板減少性紫癜等多種自身免疫性疾病中，細胞核的核內染色質、核仁、非組蛋白、由相關蛋白與RNA構成的各種核糖核蛋白粒子均能夠成為機體自身免疫反應攻擊靶子，最終形成ANA[9]。周蓮等[10]報道指出，在機體其他細胞的細胞核、血小板二者無交叉抗原情況下，ANA陽性可能與血小板減少性紫癜的發生和進展無關聯，但二者存在交叉抗原情況下，ANA則可能是導致血液中血小板計數減少的一個重要因素。本次研究分析結果顯示，ITP患者ANA陽性率顯著高于健康者，ANA陽性、陰性組治療后血小板計數比較無顯著差異。該結果表明，ITP患者血清中雖然含有抗血小板抗體，但因該抗體、機體其他細胞細胞核二者間未存在交叉抗原，因此ANA產生有可能只是該疾病患者的一種伴隨癥狀，因此該項指標無法作為ITP臨床診斷的輔助性指標。但是當ITP患者出現ANA陽性時必須高度警惕，加強隨訪，仔細觀察患者病情是否會發展成為其他自身免疫性疾病。綜上所述，ACA陽性可能是導致血清血小板含量減少的一個重要影響因素，同時還可反映血小板損傷情況，對ITP診斷及療效、預后評估均具有重要意義。