DH71CRP血液分析儀在測定C反應蛋白中的性能驗證

劉玲玲，宿亞菲，張樂，陳冬哲，王召寶，邢芳林，楊琳，劉立存，孫雯雯

1. 山東大學附屬省立醫院 臨床醫學檢驗部，山東 濟南 250021；2. 濟寧醫學院 醫學信息工程學院，山東 日照 276826

引言

C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）多用于對感染的診斷、自身免疫性疾病活動的判斷、炎癥的診斷及療效評估等[1-2]。快速定量測定CRP，可快速指導臨床用藥，避免對病毒感染或可能自限性表皮細菌感染的病人濫用抗生素；CRP可以輔助細菌與非細菌感染間的鑒別，判斷組織炎癥或損傷的程度，而且有利于觀察患者對治療的反應及術后監測。末梢血CRP檢測在兒童醫院、婦幼保健院、各級綜合醫院的兒科化驗室、急診化驗室已經廣泛開展，但目前市場上儀器、試劑、方法學很多，不同品牌的儀器、試劑之間檢測結果的一致性有很多差異。DH71CRP血液分析儀全血檢測CRP，用血量少（末梢血模式僅需20 μL），檢測時間短（1 min），能同時完成血常規計數、血細胞五分類和CRP的檢測。根據ISO15189:2012 CNAS CL02《醫學實驗室質量和能力認可準則》的要求，參考WS/T403-2012：《臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標》[3]，最新發布的衛生行業標準WS/T492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》[4]，NCCLS EP5-A2[5]、EP15-A2[6]、EP0-A2[7]、EP6-P2[8]、EP9-A2[9]、C28-A2[10]文 件， 參 考CRP及其他檢驗項目測定的性能驗證的研究資料[11-17]，對本實驗室新安裝的DH71CRP血液分析儀測定CRP的性能進行驗證和評價。

1 資料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 驗證儀器及參比儀器

驗證儀器為DH71CRP全自動血液分析儀（帝邁），參比儀器為日本HORIBA公司生產的Pentra MSCRP血液分析儀（與OLYMPUS AU5800比對結果合格，校準與性能驗證合格，室內質控在控）和AU5830全自動生化分析儀（OLYMPUS ，參加國家衛計委臨床檢驗中心室間質評CRP檢測項目、成績合格,校準與性能驗證合格，室內質控在控）。1.1.2 試劑

原裝配套試劑（帝邁，在有效期內）；ABX原裝配套試劑（在有效期內），共同的質控品為Pentra MSCRP配套的CRP定值質控品ABX CRP Trol（日本HORIBA公司,批號：170224L3N3；有效期：20180224）；OLYMPUS AU5800全自動生化分析儀原裝配套試劑（在有效期內），質控品為特定蛋白定值質控品LPC（朗道公司，批號：463；有效期 ：20180228）。

1.2 標本來源

所有檢測標本選擇2017年6月20日至2017年7月12日就診的門診和住院患者和健康體檢人員的EDTA抗凝全血標本和血清標本。

1.3 方法

性能驗證指標：精密度（批內、批間）、準確度、可比性、線性范圍、臨床可報告范圍、攜帶污染率等。

1.3.1 CRP的檢測

用DH71CRP血液分析儀和Pentra MSCRP血液分析儀檢測全血CRP，在保證兩分析儀校準和室內質控均合格的條件下，嚴格按照儀器與試劑說明書操作。

1.3.2 本底（空白）檢測

用儀器配套稀釋液作為標本，在儀器選定的檢測模式下計數3次。3次結果最大的要小于廠家聲明的本底計數要求；若開機本底未達到要求者，必須廠家售后服務工程師檢修合格后才能做余下相關測試。

1.3.3 攜帶污染率測定

根據EP10-A2文件，取高濃度全血標本，連續測定3次，測定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度全血標本，連續測定3次，測定值分別為L1、L2、L3。按公式計算攜帶污染率。攜帶污染率＝(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4 精密度驗證

根據WS/T403-2012、WS/T492-2016和EP5-A2、EP15-A2文件，參照廠家聲明的精密度要求進行驗證。

1.3.4.1 批內精密度

取高、低2個水平的新鮮全血，連續重復測定21次，取后20次結果計算CV及S；將實驗所得的CV值與儀器廠家聲明的CV值（≤10mg/L，S≤0.5 mg/L；≥10 mg/L，CV≤5.0%）進行比較。

1.3.4.2 批間精密度

取高、低兩個水平質控品，每天測定3次，每次檢測之間相隔2 h，連續測定5 d，一共收集15個數據。如果因為質量控制程序或操作問題判斷一次為失控，應剔除數據，并增加執行一次檢測；計算變異系數（CV），標準差（S）。實驗所得的CV值與儀器廠家聲明的CV值（CV≤10.0%）進行比較，CV小于或等于CRP精密度評價標準判為合格。

1.3.5 準確度驗證

本研究使用臨床患者樣品系統間的比對參考WS/T492-2016驗證方案進行準確度的驗證。參考WS/T407-2012[18]《醫療機構內定量檢驗結果的可比性驗證指南》、EP9-A2文件，具體方案如下：4天內共選取20份當日采集的CRP結果分布在可報告范圍內的的患者血液標本，同時在參比儀器和驗證儀器上進行檢測，計算配對結果之間的差值，并繪制差值與比較值之間的差值圖，用圖形顯示；將數據進行配對t檢驗計算，確定方法之間的平均差值以及差值的標準差；計算置信區間和（或）驗證限，將測量的差值（或百分差值）與廠家的聲明進行比較。

1.3.6 線性范圍驗證

參照WS/T408-2012[19]：臨床化學設備線性評價指南要求，參照EP6-A2文件，本試驗選取1份接近預期上限的高值全血標本，與儀器配套的稀釋液進行混合配制，分別按100%、80%、60%、40%、20%、10%的比例進行稀釋，每個稀釋度測定2次。將實測值均值與理論值作比較（偏離應小于10%），計算y＝ax＋b，驗證線性范圍。判定標準：a值在1±0.05范圍內，相關系數r≥0.975或r2≥0.95為可接受。

1.4 統計學分析

采用Excel 2003軟件進行數據分析，對各指標的檢測結果分別計算算術平均值、S及相對偏差，可比性和線性驗證計算回歸方程y＝ax＋b和r。

2 結果

2.1 攜帶污染率

DH71CRP血液細胞分析儀測定CRP的攜帶污染率＝(L1-L3）/(H3-L3)×100%=(3.3-3)/(140.6-3)×100%=0.22%， 廠家聲明的攜帶污染率是≤0.5%，符合要求。

2.2 精密度驗證

批間、批內精密度驗證結果均低于判定標準，見表1，達到了儀器聲明的精密度。

表1 DH71CRP血液分析儀全血樣本的CRP精密度驗證結果

2.3 準確度驗證

參考WS/T492-2016驗證方案進行準確度的驗證，使用臨床患者樣品進行全血檢測CRP兩系統對比試驗和全血與血清CRP兩系統對比試驗，均計算配對結果之間的差值，并繪制差值與比較值之間的差值圖，用圖形顯示；將數據進行配對t檢驗計算，確定方法之間的平均差值以及差值的標準差；計算置信區間和（或）驗證限，將測量的差值（或百分差值）與廠家的聲明進行比較。全血CRP檢測的比對結果，見表2。圖形顯示，見圖1。全血與血清CRP檢測的比對結果，見表3。圖形顯示，見圖2。

表2 DH71CRP血液分析儀全血CRP的準確度驗證

置 信 限 ：P=0.01，t臨 界 值 ：2.861，n=20， 上 限 ：12.98%，下限：3.17%。

驗證限：P=0.01；上限：19.91%，下限：10.09%；廠家聲明15%，實驗室計算的“偏倚”8.08%落在置信限之中，證明了廠家的聲明。

圖1 全血CRP比對的百分差值圖

表3 DH71CRP血液分析儀全血CRP與血清的準確度驗證

置 信 限 ：P=0.01，t臨 界 值 ：2.861，n=20， 上 限 ：18.48%，下限：0.42%.

驗證限：P=0.01；上限：21.16%，下限：8.84%；廠家聲明15%，實驗室計算的“偏倚”6.49%落在置信限之中，證明了廠家的聲明。

2.5 線性驗證

參照WS/T408-2012、EP6-A2文件，本試驗選取1份接近預期上限的高值全血標本，與儀器配套的稀釋液進行混合配制，分別按100%、80%、60%、40%、20%、10%的比例進行稀釋，每個稀釋度測定2次。將實測值均值與理論值作比較（偏離應小于10%），計算y＝ax＋b，驗證線性范圍。得到CRP的線性回歸方程：y=0.9724x-1.6159，r=0.9975，線性范圍為0～210 mg/L。見圖3。

圖3 DH71CRP血液分析儀測定全血CRP線性驗證

3 討論

CRP在肝臟合成的能夠與肺炎鏈球菌C多糖體反應的急性時相反應蛋白，近年來越來越多的研究證實CRP在炎癥性疾病、創傷、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、心腦血管疾病等的診斷、鑒別診斷、療效評價、預后評估中有重要的臨床應用價值[20]。特別是評價急診患者急性感染和炎性疾病的客觀指標之一，與其他的炎癥指標PCT、SAA、WBCC聯合檢測提高了CRP的診斷效能，有利于急診和兒科患者的個性化診斷和治療，避免了抗生素的濫用[21]。快速、準確的CRP檢測系統成為臨床的迫切需要。

本研究中，DH71CRP全自動血液分析儀免疫比濁法檢測全血CRP的精密度（批內CV%低值2.23%，高值6.41%；批間CV%低值3.97%，高值3.75%）、攜帶污染率（0.22%）、準確度（與Pentra MSCRP血液分析儀檢測全血CRP結果比對分析，回歸方程：y=1.1284x-5.107，r=0.9942；同時由于CRP檢測采用了HCT校正技術，其檢測結果與全自動生化分析儀AU5800血清CRP的比對分析，回歸方程：y=0.8197x+15.015，r=0.9933）和線性（線性回歸方程為：y=0.9724x-1.6159，r=0.9975，線性范圍為 0.2～210 mg/L）。在精密度、準確度、攜帶污染率性能均達到了廠家聲明的要求，但線性范圍未達到廠家聲明的0.2～320 mg/L，但能滿足臨床患者全血標本檢測CRP的需求，是一臺性能良好的檢測全血CRP的血液分析儀，完全能滿足臨床上全血CRP的準確定量分析。

綜上所述，DH71CRP全自動血液分析儀免疫比濁法檢測全血CRP，主要性能符合質量目標要求。但是，在使用中應當注意如果儀器CRP結果有“*”的報警提示時，需要查找標本、儀器、試劑等檢測系統的原因，采取合理的、有效的措施，確保患者檢驗報告的準確性，給臨床醫師提供更多有價值的信息。如果樣本CRP結果＞210 mg/L時，必須使用儀器配套的稀釋液對全血樣本進行預稀釋后，再進行測定，測定結果乘以稀釋倍數后發報告。因此，要求檢驗人員在日常報告審核工作中，應根據本科室制定的復檢規則并結合儀器報警提示信息，在必要時進行標本復檢。