紫外可見分光光度法測定恩諾沙星可溶性粉的不確定度評估

袁曉春

（錦州市農業農村綜合服務中心，遼寧 錦州 121000）

測量不確定度是與測量結果關聯的一個參數，用于表征合理賦予被測量值的分散性。測量不確定度越大，表示測量能力越差，反之，表示測量能力越強。不過，不管測量不確定度多小，測量不確定度范圍必須包括真值（一般用約定真值代替），否則表示測量過程已經失效。隨著實驗室認可和資質認定對實驗室檢測能力要求的逐漸提高，測量不確定度已成為一個完整的定量分析結果的重要組成部分[1]。本文以紫外分光光度法測定恩諾沙星可溶性粉為例，按照2017 年版《獸藥質量標準》化學卷檢測方法進行測量，依據《JJF1059.1-2012 測量不確定度評定與表示》，并參考相關文獻對測量過程中產生的不確定度分量進行分析和評估，從而評定其不確定度[2-8]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1800紫外分光光度計（日本島津）；AG285電子天平（梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司）；250 mL、100 mL 容量瓶（天玻牌A 級）；5 mL 移液管（天玻牌A級）。

1.2 試劑

恩諾沙星對照品（中國獸醫藥品監察所、批號：H0081505）；恩諾沙星可溶性粉（10%、100 g規格，某獸藥廠提供）；氫氧化鈉（國藥集團化學試劑有限公司、分析純）。

2 試驗方法

取本品適量（約相當于恩諾沙星25 mg），精密稱定，置250 mL容量瓶中，加0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液10 mL，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置100 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按照紫外-可見分光光度法（中國獸藥典附錄0401），用1 cm比色池，在271 nm的波長處測定吸光度；另取恩諾沙星對照品，同法測定。

按照2017 年版《獸藥質量標準》化學卷檢測恩諾沙星可溶性粉含量方法，計算公式見式1。

式中：A供為供試品吸光度；A對為對照品吸光度；W對為試樣質量（g）；W供為對照品質量（g）；對照品濃度為99.6%；供試品標示量為10%；對照品稀釋倍數為10 000；供試品稀釋倍數為10 000。

3 不確定度傳播

3.1 分析不確定度來源

本試驗中，不確定度來源于稱量、定容、量取和樣品比色測定引入的不確定度。

3.2 量化不確定度分量

3.2.1 稱量的不確定度

對照品質量稱定的不確定度Ums來源包括天平的示值不確定度UmS1、天平重復性不確定度UmS2及其天平偏載誤差UmS3。

十萬分之一天平的示值不確定度UmS1，根據天平附帶資料，天平稱量允許誤差為±0.04 mg。US1=0.04/=0.023 1 mg。

由天平重復性帶入的不確定度UmS2，根據天平附帶資料，天平稱量重復性0.04 mg。US2=0.04/=0.023 1 mg。

天平偏載誤差帶入的不確定度UmS3，根據天平附帶資料，天平偏載誤差0.05 mg。US2=0.05/=0.028 9 mg。

由于恩諾沙星對照品稱量25.1 mg，則對照品稱量引起的相對標準不確定度Us。

樣品質量稱定的不確定度UmY來源包括天平的示值不確定度UmY1、天平重復性不確定度UmY2及其天平偏載誤差UmY3。

萬分之一天平的示值不確定度UmY1，根據天平附帶資料，天平稱量允許誤差為±0.2 mg。UY1=0.2/=0.115 5 mg。

由天平重復性帶入的不確定度UmY2，根據天平附帶資料，天平稱量重復性0.1 mg。UY2=0.1mg/=0.057 7 mg。

天平偏載誤差帶入的不確定度UmY3，根據天平附帶資料，天平偏載誤差0.3 mg。0.173 2 mg。

由于樣品稱量平均重量250.1 mg，則樣品稱量引起的相對標準不確定度UY。

3.2.2 對照品的定容與稀釋的不確定度

250 mL 容量瓶A 級容量允許誤差為0.15 mL，；容量瓶和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。250 mL容量在20 ℃下校準，實驗室環境溫度為21.5 ℃，水的膨脹體積系數為2.1×10-4，按矩形分布計算，為2.1×10-4×（21.5-20）×250/3= 0.045 5 mL，250 mL容量瓶引入的相對標準不確定度為。

100 mL 容量瓶A 級容量允許誤差為0.10 mL，；容量瓶和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。100 mL 容量在20 ℃下校準，實驗室環境溫度為21.5 ℃，水膨脹體積系數為2.1×10-4，按矩形分布計算，UV4/3=2.1×10-4×（21.5-20）×100=0.018 2 mL，100 mL 容量瓶引入的相對標準不確定度為。

5 mL 移液管容量允許誤差為0.015 mL，UV3=0.015/=0.008 7 mL；移液管和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。5 mL 容量在20 ℃下校準，實驗室環境溫度為21.5℃，水的膨脹體積系數為2.1×10-4，按矩形分布計算，UV4=2.1×10-4×

3.2.3 樣品的定容與稀釋的不確定度

計算同3.2.2，UV樣=0.189%

3.2.4 儀器比色的不確定度

影響比色的主要因素是分光光度計的準確性。儀器的影響采用B 類評定。檢定證書給出的UV-1800 分光光度計的透射比準確度為0.5%，按均勻分布UT。

3.2.5 重復測定

重復測定引入的不確定度UR采用A類評定，重復6次測量，結果如表1所示。用貝塞爾公式計算單次測量的標準偏差S(x)，n=6按照貝塞爾法算出。

4 合成不確定度與擴展不確定度

取k=2，U=2U合=0.92%。

報告按2017 年版《獸藥質量標準》化學卷檢測恩諾沙星可溶性粉含量，其結果為：C=108.24%±0.92%=107.32%～109.16%，k=2。

表1 樣品重復測定結果數據

表2 紫外分光光度法測定恩諾沙星可溶性粉的不確定度分量

5 討 論

本文分析了紫外分光光度法測定恩諾沙星可溶性粉的測定過程中不確定度的各個分量的來源，由分析結果可知，儀器比色，溶解與定容、對照品的稱量和重復性測定對不確定度有較大貢獻，而樣品的稱量對不確定度貢獻較小。由此可見，日常應注意儀器的維護和保養，在測量過程中應選擇精密度高的儀器，使用經校正合格的容量儀器進行稀釋，必要時可適當增加測定次數，進一步降低引入的不確定度。

在評估不確定度中有很多因素需要考慮，要抓住主要分量，避免漏項。以本試驗為例，在進行測量不確定度評估前首先要對測量過程進行分析，然后對不確定度分量逐一進行評估。不確定度評估過程中避免重復評估。如當評估了測量的重復性分量，就不必在評估如稱量、體積、儀器的重復性分量了。一些非輸入量不應將其作為分量進行評估，其對測量結果的影響已經反映在測量重復性中。