NF-κB p65對OX-LDL處理的內皮祖細胞增殖活性的影響及機制研究*

劉潔，羅展雄，陳祖平

（柳州市人民醫院 心血管內科，廣西 柳州 545004）

心血管系統疾病是威脅人類生命健康的主要原因之一，其中血管內皮細胞損傷是動脈粥樣硬化發生的基礎。內皮祖細胞是血管內皮細胞的前體細胞，參與內皮組織損傷修復，其在骨髓、脾臟等多種器官中存在，內皮祖細胞可以遷移到外周血并聚集到損傷血管周圍促進損傷修復[1]。核轉錄因子核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的重要亞單位之一NF-κB p65，參與炎癥、細胞凋亡、細胞生長、氧化應激等過程，在腫瘤、心血管等疾病中扮演重要角色[2]。最近研究顯示，內皮祖細胞損傷與NF-кB p65 過度表達有關，在高糖、氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,OX-LDL）等誘導的內皮祖細胞損傷中過度激活[3]。本實驗以人外周血內皮祖細胞為實驗對象，通過microRNA 干擾技術下調內皮祖細胞中NF-κB p65 的表達，探討其在OX-LDL 誘導的內皮祖細胞損傷中的作用，為明確動脈粥樣硬化發生機制奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

健康人外周血來自柳州市人民醫院。SYBR premix Ex Taq 和Prime Script RT reagent kit 購自大連TaKaRa 公司，引物由生工生物（上海）股份有限公司合成，ECL 發光試劑盒、NF-кB p65 抗體均購自上海碧云天生物技術研究所，丙二醛（Malonaldehyde,MDA）含量檢測試劑盒、總超氧化物歧化酶（superoxide orgotein dismutase,SOD）活力檢測試劑盒均購自北京Solarbio 公司，活化的Caspase-3 抗體、活化的Caspase-9 抗體均購自美國Abcam 公司，OX-LDL 購自美國Sigma 公司。

1.2 內皮祖細胞分離培養

取健康人外周血，按照密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，按照5×105個/cm2接種細胞種植到纖維連接蛋白包被好的24 孔細胞培養板中，每個孔中加入1 ml M199 細胞……