標準法和改良法測定飼料中喹乙醇的比較研究

杜楊，李彬，朱貴冠

（河南省安陽市畜產品質量安全監測檢驗中心，河南 安陽 455000）

喹乙醇是一種化學合成的生長促進劑，可促進機體蛋白質合成代謝，提高飼料能量利用率，促進生長發育[1]，同時具有較強的抑制或殺滅細菌的作用[2]。在飼料加工工業中常與淀粉或麥麩、磷酸氫鈣、碳酸鈣配制成飼料預混劑。在畜牧和水產養殖行業，為了盲目追求經濟價值[3]，曾被養殖戶廣泛添加于飼料中。有研究發現，大劑量喹乙醇對動物有毒性作用，而且喹乙醇在體內有蓄積性，在動物體內蓄積到一定程度時，會對動物和人產生致畸、致癌、致突變的“三致”作用[4]。農業農村部2638號公告規定：自2018年5月1日起，停止生產喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥的原料藥及各種制劑，相關企業的獸藥產品批準文號同時注銷；自2019年5月1日起，停止經營、使用喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥的原料藥及各種制劑。

目前，我們多采用國家標準方法——高效液相色譜法（GB/T 8381.7-2009）對飼料中的喹乙醇進行測定，但該方法前處理過程中，離心后 的上清液要經濾紙過濾，過濾過程可能對目標檢測物質產生一定的吸附，同時增加檢測成本，延長檢測時間。本試驗對該標準法進行了改良，通過提高離心機轉速并縮短離心時間來替代濾紙過濾這一環節，在保證檢驗結果的準確性和重復性較好的情況下，提高了工作效率，降低了檢測成本。

1 材料

1.1 試劑 甲醇，超純水，鹽酸；提取液：甲醇+水，其比例為5∶95。

1.2 標準儲備液 準確稱取喹乙醇標準品50mg于50mL棕色容量瓶中，加30mL水超聲溶解，冷卻至室溫，定容至刻度，搖勻，即得1 mg/mL濃度的標準儲備液。4℃保存，有效期為1個月。

1.3 標準工作液 精密量取標準儲備液1mL于100 mL容量瓶中，以水定容至刻度?；靹?，制成濃度為10μg/mL的標準工作液。

1.4 空白添加樣品 分別按照10、50、100 mg/kg的比例在空白樣品中添加喹乙醇標準品，混勻。

1.5 儀器與設備 離心機，超聲波清洗器，固相萃取裝置，恒溫振蕩器。

2 測定方法

2.1 標準方法 稱取5 g試樣于具塞錐形瓶中，加入50mL提取液，具塞置入搖床中，室溫下恒溫避光振蕩45min（振蕩速度為110r/min）。提取液在3500r/min下離心10min，上清液經濾紙過濾，濾液作為SPE小柱凈化使用?；罨玫腟PE小柱分別用2mL淋洗液1、淋洗液2和淋洗液3淋洗，然后將小柱吹干。最后用2 mL洗脫液洗脫。洗脫液過0.22μm有機相濾膜，濾液上機測定。

2.2 改良方法 稱取2 g試樣于具塞錐形瓶中，加入20 mL提取液，具塞置入搖床中，室溫下恒溫避光振蕩45min（振蕩速度為110r/min）。提取液在5000r/min下離心6min，上清液作為SPE小柱凈化使用。其余步驟同上。

2.3 液相色譜條件 柱溫25℃，進樣體積10μL，檢測波長260nm，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

3 結果

用標準法和改良方法在空白樣品中分別添加不同濃度（10、50、100 mg/kg）喹乙醇進行回收率實驗，每個添加濃度進行5次重復測定，求相對標準偏差。分別按2.1和2.2步驟進行實驗，結果見表2和表3。從表2和表3可以看出，添加量在10、50、100 mg/kg時，改良方法的回收率在95%～110%之間，重復性好，相對標準偏差均小于1%。

表2 標準方法添加回收實驗結果（n=5）

表3 改良方法添加回收實驗結果（n=5）

4 結果比較

改良方法的回收率為95%～110%，精密度（RSD）＜1%，符合國家標準要求（RSD＜10%）。與國家標準HPLC法相比，改良的方法不采用濾紙過濾，節省約25 min的處理時間。綜合比較認為，改良法具有速度快、成本低、靈敏度高、精密度好等特點，尤其適用于大批量配合、濃縮飼料樣品中的喹乙醇檢測。

本試驗結果表明，檢測配合飼料、濃縮飼料中喹乙醇的含量時，可以通過提高離心機轉速，適當縮短離心時間來替代濾紙過濾這一步驟，在不影響樣品的回收率和重復性的前提下，可以減少實驗步驟，節省實驗時間，增加樣品前處理批次，提高工作效率。

5 效益分析

在檢測限相同的條件下，改良法對樣品前處理的時間可降為70～80 min，國家標準方法對樣品前處理的時間約為100 min。按照一年做400批次樣品算，樣品前處理批次可以擴大1～1.5倍，降低了檢測成本，為加大監管力度和保障畜產品質量安全帶來了極大的社會效益和經濟效益。