實時定量PCR檢測胰島素及高糖對巨噬細胞ACAT-1表達的影響分析

夏露 藍秀萬（通訊作者）

（廣西醫科大學基礎醫學院 廣西 南寧 530000）

據調查可知，近年來我國的糖尿病患者急劇增加，研究發現，糖尿病的發病機制和人體內的胰島素缺陷有一定的關系，人體內的胰島素缺失會使得血液中的葡萄糖濃度遠遠高于機體的耐受點，從而使得患者出現蛋白質和脂肪的代謝紊亂，而且還會使得患者的心血管、腎、眼睛以及神經系統等受到不同程度的損傷[1]。糖尿病患者往往具有較高的胰島素血癥和較高的血糖，胰島素血癥會影響巨噬細胞ACAT-1，為了探索胰島素和高糖對巨噬細胞ACAT-1的影響，結果如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

實驗中的胰島素、高糖都采購于sigma公司，實時定量PCR試劑盒選購的是來自芬蘭的公司，DNA試劑盒來自Vgene，逆轉錄聚合酶鏈反應試劑盒來自日本，其余的都來自中國。

1.2 方法

胰島素和高糖共同作用于巨噬細胞ACAT-1分別為0小時、6小時、12小時、24小時及48小時。第一步進行細胞培養；第二步進行DNA樣品制作；第三步進行設立以及合成引物；第四步進行制備標準品以及陽性對照品；第五步就是進行實時定量PCR檢測。

1.3 統計學方法

2.結果

2.1 在不同時間段里胰島素和高糖共同作用于巨噬細胞ACAT～1的表達量比較

胰島素和高糖共同作用于巨噬細胞ACAT-1不同的時間，12小時后的表達量要顯著高于0、6、24及48小時的表達量（P＜0.05），有統計學意義；而48小時的表達量和0小時的表達量相比，無顯著差異（P＞0.05），見表。

表 在不同時間段巨噬細胞ACAT-1的表達量比較（±s）

表 在不同時間段巨噬細胞ACAT-1的表達量比較（±s）

不同時間段（h）表達量0 39.75±2.46 6 121.78±3.89 12384.53±11.86 24111.75±9.85 4840.76±2.88 P＜0.05

3.討論

ACAT對人體膽固醇的形成、運輸、吸收以及儲存都有非常重要的關系，是人體不可缺少的一種酶[2]。ACAT可以分成ACAT-1和ACAT-2，巨噬細胞主要是ACAT。糖尿病患者往往具有高胰島素血癥，高胰島素血癥會影響ACAT-1這種酶的活性，從而使得膽固醇酯變化為泡沫，進一步促進動脈粥樣硬化[3]。

實時定量PCR檢測是臨床上提出的一種新型的檢測方式，主要特征就是在PCR檢測中加入了熒光因子，然后利用熒光信號監測產物的數量，最后定量分析根據標準曲線得出的模板，從而提高了檢測的準確度[4]。實驗中所有的操作過程中都應在密封的封閉管中進行，由于操作環境有所限制，就避免了很多的交叉感染，整個操作過程干凈整潔，不破壞原有的結果，進一步提高了檢測結果的準確度。而且實時定量PCR檢測和以往的PCR檢測操作更加簡單方便，靈敏度更高，重復性更好，檢測迅速，更加衛生[5]。因此，在臨床上實時定量PCR檢測已經逐漸取代以往的PCR檢測。

這次實驗就討論了胰島素和高糖共同作用于巨噬細胞ACAT-1時，不同時間段的表達量，結果可知，胰島素和高糖共同作用于巨噬細胞ACAT-1不同的時間，12小時后的表達量要明顯高于0、6、24及48小時的表達量（P＜0.05）；而48小時的表達量和0小時的表達量相比，無顯著差異（P＞0.05）。這說明胰島素和高糖共同作用于巨噬細胞ACAT～1時在剛開始的表達量最低，然后逐漸上升，在12小時達到巔峰，之后又逐漸下降，在48小時的表達量已經下降到同0小時的表達量。

綜上所述，胰島素和高糖共同作用于巨噬細胞ACAT-1將在12小時達到高峰，然后再逐漸下降，在48小時下降到0小時的水平。