探討影響金銀花組織再生率的因素

許蘭杰 余永亮 譚政委 楊紅旗 董薇 梁慧珍術 蘆海靈 李春明

摘要：概括了影響金銀花組織再生率的因素，主要從外植體、基因型、培養基種類3個方面進行分析討論，綜合了當前金銀花研究現狀，為開展金銀花組織培養提供技術參考。

關鍵詞：金銀花;組織培養;外植體;基因型

金銀花（Lonicera japonica Thund.）又名忍冬，是忍冬科忍冬屬多年生常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞樹種和綠化材料，也是臨床常用中草藥，具有清熱解毒、涼散風熱之功效。宋代以前只用莖和葉，明代則莖、葉、花同等人藥，但是不同部位其化學成分不同，功效不同。

1外植體

1.1外植體

金銀花不同組織部位均可以作為外植體用于組織培養，主要有帶芽莖段、頂芽、葉片。李利改等以金銀花葉片作為外植體誘導愈傷組織，基礎誘導培養基為B5+IAA 1.0mg/L+6-BA 2.2mg/L+KT 2.0mg/L+LH 2000。劉偉等和任敏以金銀花帶芽莖段為外植體成功誘導出腋芽，二者區別培養基中激素不同（MS+BA 0.1and0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L）。趙賢慧陶和陳明霞等以金銀花的頂芽為外植體，最適培養基均為：MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1～0.2 mg/L。王文靜等以紅金銀花頂芽、當年生幼莖和葉片為外植體，發現外植體類型對紅金銀花組織培養的污染率及愈傷組織的誘導率均有影響;頂芽啟動愈傷組織時間短、生長速度快、成活率最高，為最佳外植體。

1.2滅菌方法

針對金銀花種苗的特殊性，不同研究者總結了一套金銀花外植體滅菌的最佳方法。趙賢慧等對紅金銀花外植體采用75%的乙醇30s+0.2%升汞5min處理，可以達到理想的滅菌效果。任敏采用75%的乙醇45s+0.15%升汞滅菌8min可以對帶腋芽莖段滅菌。文明玲等采用75%乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外燈照射30min+75%乙醇30s+0.1%升汞8min、75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外燈照射30min+75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外燈照射60min+75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min等5種方法處理金銀花外植體，結果表明紫外燈照射30min+75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min方法可以顯著降低外植體污染率，并提高萌發率。總之，研究者采用的基本藥品均為75%乙醇和升汞，區別在于優化了75%乙醇處理時間和升汞濃度。

2基因型

大量研究表明，基因型對組織培養和植株再生影響較大。目前已經在水稻、玉米、小麥和番茄等作物上開展了相關研究，而金銀花組織培養針對于一種金銀花品種的快繁，未研究同一組培條件下不同基因型金銀花的組織再生率差異。于惠敏等研究了11個番茄基因型品種的組織培養和植株再生能力，發現不同基因型的植株再生能力存在著明顯差異。孫建昌等㈣研究了4個水稻品種的組織培養特性，表明不同外植體的組織培養特性差異較大。趙賢慧以紅金銀花的頂芽為外植體，經過初代培養、繼代培養和生根培養獲得了理想的生根苗。任敏以河南封丘金銀花品種帶腋芽莖段為外植體，可以獲得無菌苗。

3培養基種類

金銀花用于外植體誘導愈傷組織的基礎培養基有MS和B5，以MS應用較多，差異主要在于激素的濃度。趙賢慧發現培養基類型對愈傷組織誘導率有一定的影響，但是小于不同濃度NAA對愈傷組織誘導率的影響。過低或過高濃度的生長調節劑都不利于愈傷組織的生長。植物組織培養常用的生長調節劑有NAA、6-BA、KT。王文靜等發現對紅金銀花頂芽誘導率最高的植物生長調節劑組合為KT 1.5mg/L+6-BA1.5mg/L+a-NAA 0.5mgJL。王慧俐和江小紅對灰氈毛忍冬莖段誘導培養，最佳激素為6-BA 1.5mg/L+NAA0.1mg/L，萌發率為100%。覃擁靈以宜州當地主要金銀花品種皺葉忍冬的莖段為外植體，誘導培養基為MS+6-BA 0.5mg/L+IBA O.05mg/L。單廣福等發現花蕾下部為外植體，誘導培養基為MS+NAA 2.0mg/L+6-BA0.01mg/L+2，4-D 0.5mg/L時誘導率可達100%。

4展望

金銀花外植體主要有葉、莖尖、莖等，依據不同的誘導培養基配方，不同外植體的誘導率均達到100%;對金銀花愈傷組織誘導率影響較大的因素主要是激素配比。目前，尚未有進行不同金銀花基因型對愈傷組織誘導率的比較試驗。本文為金銀花組織培養工作提供一定的參考。