循環腫瘤細胞檢測在乳腺癌患者中的應用價值

季福慶 張明坤 李夢斐

(西安市第三醫院甲乳外科，陜西 西安 710018)

乳腺癌為女性群體中發病率較高的一種惡性腫瘤，屬于全身性疾病，其腫瘤發展早期便可出現遠處播散轉移情況，而復發轉移為致使該疾病患者死亡的重要原因[1]。有文獻[2]指出，機體外周血中循環腫瘤細胞(CTCs)與該疾病的轉移以及復發具有相關性，而分析與檢測CTCs對該疾病患者早期微轉移、治療方案選擇、預后評估等方面均具有重要價值?；诖?，本文旨在探討CTCs與患者免疫組織化學指標、臨床特征、不同分子類型的關聯，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2016年4月至2018年3月在我院治療的78例乳腺癌患者的臨床資料組成觀察組，同時，將同期于我院接受健康體檢的30例健康志愿者的資料組成對照組，入選者均為女性。觀察組年齡24～75歲，平均(49.81±3.27)歲；絕經前46例，絕經后32例。對照組年齡25～75歲，平均(50.07±3.29)歲；絕經前17例，絕經后13例。觀察組納入標準：通過術后病理證實或乳腺腫塊空芯針穿刺活檢病理檢查證實為浸潤性乳腺癌者；影像學資料以及臨床資料完整者；將上腹部與胸部CT檢查顯示無肝、肺轉移。排除標準：合并其它惡性腫瘤病史者；凝血功能障礙者；先天性心臟病者；肝腎功能衰竭者；近期接受內分泌外相關治療者；表達障礙或精神疾病者。兩組一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 (1)采集兩組7.5 mL肘靜脈血，加入肝素進行抗凝操作，冷卻10 min，加入5 mL磷酸緩沖鹽溶液(PBS)稀釋，再將3 mL淋巴細胞分離液(FICOLL配制)加入，離心，將血漿去除，加入PBS液2 mL，混勻并離心，將上清液去除，將BD公司(美國)提供的波形蛋白抗體、CD45、細胞角蛋白抗體以上皮細胞黏附分子抗體加入，各0.5 μL，混勻，避光，時長約30 min，而后離心進行檢測。經流失細胞分析術分析，通過側向反散射對前向散射作二維散射點，而后設R1門，選取R1門細胞，以向反散射對CD45-PE作為二維散射點，并選取CD45(-)細胞，以側向反散射對細胞角蛋白作二維散射點，并選取細胞角蛋白(+)細胞，設置為R2門。而后取R2門細胞，以波形蛋白對上皮細胞黏附分子作二維散射點，取波形蛋白(+)與上皮細胞黏附分子(+)作為R3門，生成散點圖，分析數據。將波形蛋白(+)、上皮細胞黏附分子(+)、CD45(-)、細胞角蛋白(+)定義為陽性，將CTCs≥5/7.5 mL視作外周血為轉移陽性。(2)通過免疫組織化學法測定孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)、P53、人表皮生長因子受體-2(HER-2)、Ki-67表達。當原發腫瘤細胞核染色不低于1%時，認為PR或ER視作陽性；HER-2(3+)視作陽性，HER-2(+或0)視作陰性，而HER-2(2+)應進行熒光原位雜交。

1.3統計學方法 采用SPSS18.0軟件進行數據處理，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1兩組CTCs陽性表達情況 觀察組中檢出CTCs陽性30例，陽性率為38.46%(30/78)，對照組未發現CTCs陽性表達，兩組比較差異有統計學意義(χ2=15.976，P=0.000)。

2.2不同特征患者CTCs陽性表達情況 不同年齡及不同病理類型乳腺癌患者間CTCs陽性表達對比無明顯差異(P>0.05)；不同TNM分期乳腺癌患者中CTCs陽性表達對比，差異有統計學意義(P<0.05)；轉移性乳腺癌患者(M1期)CTCs陽性表達顯著高于非轉移性乳腺癌患者(M0期)，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同特征患者CTCs陽性表達對比[n(%)]

2.3不同分子類型、免疫組織化學指標患者的CTCs陽性表達情況 不同PR、ER、P53、HER-2以及Ki-67表達的乳腺癌患者的CTCs陽性表達對比無明顯差異(P>0.05)；并且不同分子分型的乳腺癌患者的CTCs陽性表達對比也無差異(P>0.05)。見表2。

表2 不同分子類型、免疫組織化學指標患者的CTCs陽性表達對比[n(%)]

續表 表2

3 討 論

與傳統影像學檢查以及組織學檢查比較，CTCs檢測具有較高的敏感性以及可重復性，可作為臨床實時液體活檢檢測的重要標志物，利于及早提供有效的評估信息[3]。CTCs在檢測過程中，基本包括細胞的檢測以及富集，其中，檢測方法包括細胞檢測、核酸檢測技術、流式細胞術以及免疫細胞化學法；富集方法則包括密度梯度離心法、黏附分離法以及免疫磁珠分離法等[4]。本文結果顯示，乳腺癌患者CTCs陽性率為38.46%，明顯高于健康體檢者。

有文獻[5]指出，30.00%左右的早期乳腺癌患者術后很可能于輔助治療中受益，而在晚期轉移乳腺癌患者的外周血中可檢測到CTCs，認為其在臨床分期方面具有一定指導意義，利于臨床TNM分期。本文結果顯示， M1期CTCs陽性表達顯著高于M0期，且不同TNM分期乳腺癌患者中CTCs陽性表達均存在差異性，與上述研究結果相符。雌激素以及孕激素的表達為該疾病重要的預后因素，同時也是預測激素治療效果的有效指標[6]。P53基因為判斷患者預后的重要指標之一；Ki-67屬于核抗原，與增殖細胞相關，其功能同有絲分裂存在密切關聯，而Ki-67標記為處于人體增殖周期中的一種細胞，其標記陽性率越高，提示組織分化越差，腫瘤生長越快，其對化療也愈加敏感，故預后較差[7]。除此之外，乳腺癌內分泌治療主要根據PR與ER表達水平，靶向治療則多依據HER-2表達水平，乳腺癌分子亞型將影響患者的預后以及生存情況[8]。有研究表明，CTCs陽性率與分子分型、HER-2、PR、ER、病理分級以及腫瘤大小均無明顯相關性，但也有研究認為CTCs計數與分子分型、遠處轉移以及腫瘤分期有關，但與HER-2、PR、ER、Ki-67無相關性[9-10]。而本文結果顯示，不同PR、ER、P53、HER-2以及Ki-67表達患者以及不同分子分型患者間CTCs陽性表達均無明顯差異。

綜上所述，CTCs與乳腺癌患者腫瘤細胞轉移以及TNM分期存在關聯，利于指導臨床對該疾病進行診斷，并可依據檢測結果評估治療效果與預后。