興義市不同居群美花石斛的多糖含量比較研究

(貴州中醫藥大學藥學院，貴陽 550025)

美花石斛(D.loddigesiiRolfe)，屬蘭科石斛屬植物，藥材名稱為環草石斛，以莖用，為貴州地道藥材。早在《神農本草經》中就有記載，是被《中華人民共和國藥典》(2000版)收載的石斛屬原植物之一[1-2]。具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳、延年益壽等功效，用于熱病傷津、食少干嘔、病后虛弱、陰傷目暗、食欲不振、遺精、腰膝酸軟無力等癥[3]。貴州興義是我國著名的石斛主產地之一，其境內豐富的石斛資源備受關注。其中美花石斛是分布最多、民間使用最廣、加工小黃草質量最好的石斛品種，其開發利用前景良好[3]。

石斛多糖是評價石斛特別是用于開發保健類食品的藥食同源石斛品種品質評價的重要參考指標，盡管貴州省興義野生美花石斛居群眾多，但對其不同居群的品質評價的研究未見報道。深入調查貴州省興義市不同野生美花石斛的分布特點，對其品質展開客觀評價，對于美花石斛道地資源的開發和利用，篩選培育優質新品種，加快貴州省興義市美花石斛產業規?；l展，促進貴州省區域經濟發展有著重要的意義。基于此，本研究對興義市10個不同野生居群的美花石斛多糖含量進行了測定，以期為不同居群美花石斛的質量評價提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

課題組于2013—2015年，野外實地調查了興義市境內10個居群，分別是三江口、泥凼、巴結、萬峰林、則戎、雄武、坡崗、豐都、岔江、清水河，各居群具體信息見表1，經花期鑒定為美花石斛(DendrobiumloddigesiiRolfe)。

表1 興義市美花石斛天然居群來源

序號居群名稱居群大小海拔/m緯度經度M1興義萬峰林12118725°0′26″N104°55′23″EM2興義巴結1579324°51′54″N105°01′33″EM3興義豐都9115325°03′14″N104°56′48″EM4興義三江口1177624°46′24″N104°36′14″EM5興義清水河7132225°14′38″N104°50′06″EM6興義岔江5134125°03′43″N104°40′25″EM7興義坡崗6126525°05′21″N105°04′47″EM8興義雄武22142924°56′33″N104°41′02″EM9興義則戎3112224°58′59″N104°56′28″EM10興義泥凼6117624°49′32″N104°51′34″E

1.2 主要儀器與試劑

UV-5900型紫外可見分光光度計(上海元析儀器有限公司)，電熱鼓風干燥箱(重慶四達儀器公司)，電子天平(上海舜宇恒平科學儀器公司)，數顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司)，HS-10260 D超聲波清洗器。葡萄糖標準品(購自成都瑞芬思生物科技有限公司，批號：S-023-1503)，濃硫酸、苯酚、無水乙醇均為分析純(國藥集團化學試劑有限公司)。

1.3 方 法

美花石斛對照品的制備、供試品的制備、苯酚硫酸法測定石斛多糖含量，參照文獻白音等[4]、李亞芳等[5]、王建等[6]的方法，并作適當改進。

2 結果與分析

2.1 葡萄糖的濃度與吸光度的線性關系考察

以吸光度值為縱坐標(y)，對照品溶液濃度為橫坐標(x)進行線性回歸，得回歸方程y=15.86x+0.002，(r=0.999 5)。表明葡萄糖濃度在12.0～42.0μg·mL-1范圍內與其吸光度呈良好的線性關系。

2.2 精密度實驗

精取葡萄糖對照品溶液，連續測定6次，RSD為0.9%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.3 穩定性實驗

取同一樣品顯色后分別在0，10，20，30，60，120 min測定其吸光度，同一樣品顯色后120 min內測定吸收度的RSD為0.7%(n=6)，表明供試品在120 min內穩定。

2.4 重現性實驗

取同一美花石斛藥材粉末6份，每份0.1 g，測定多糖含量，結果6份同一樣品粉末的多糖含量RSD為1.4%(n=6)，該方法的重現性較好。

2.5 加樣回收率測定實驗

取美花石斛藥材粉末6份，每份0.05 g，加入定量的石斛總多糖，制備溶液并顯色，測定吸光度，計算回收率，測定結果見表2，多糖含量測定的平均回收率為99.50%，RSD為1.4%(n=6)，表明該方法準確度高。

表2 回收率結果

編號稱樣量/g含量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.05029.869.6419.3498.3420.05009.829.6419.2297.5130.05029.869.6419.53100.3199.501.440.05019.849.6419.4099.1750.05009.829.6419.53100.7360.05029.869.6419.59100.93

2.6 樣品測定

對收集到的10批不同居群的美花石斛藥材進行多糖含量測定，結果見表3，其中M 4(三江口居群)具有最高的石斛多糖含量，而M 3(豐都居群)的石斛多糖含量最低，不同居群的石斛多糖含量差異顯著。

表3 多糖含量測定結果

樣品編號平均含量/%RSD/%M429.30a1.2M124.48b1.4M223.30c0.7M923.04c1.9M821.62d0.7M520.82e1.1M716.23f0.8M1015.81fg1.4M615.38g0.5M314.29h1.8

注：表中小寫字母表示0.05水平顯著差異(n=3)。

3 討 論

多糖是藥用植物主要活性成分之一，是石斛質量評價的重要參考指標。目前對石斛的質量評價主要集中在不同產地上[7-9]，而對于興義境內豐富的美花石斛居群的質量評價卻未見報道。本次測定結果顯示，興義不同居群美花石斛的多糖含量差距較大，多糖含量最高的是興義三江口居群，達29.30%，最低的是興義豐都居群，為14.29%，多糖含量差距達到15.01%。李滿飛等[10]利用比色法測定了25種石斛的多糖含量，來自羅甸的美花石斛多糖含量達30.48%；黃民權等[11]利用硫酸蒽酮法測定了3種石斛的多糖含量，其中美花石斛的多糖含量為12.9%。白音等[4]對來自三省五產地的野生美花石斛的多糖含量測定結果表明，貴州興義的美花石斛多糖含量最高，達22.62%。本次對興義市不同居群美花石斛的測定結果為14.29%～29.30%，與前人的研究結果有一定的一致性。表明苯酚硫酸法較為準確可靠，且操作簡單，重現性好，可用于美花石斛的多糖含量的測定。

一般認為，石斛多糖含量的高低和石斛種質資源本身的遺傳特性、生長的地理環境、采收季節、生長年限及多糖的提取工藝有較大的關聯[9]。在本次實驗中,采樣時間集中在每年的10—12月，石斛的莖段取自兩年生[12]，提取檢測方法一致，最大限度地消除了條件不一致對石斛多糖含量檢測高低的影響。含量最高的三江口居群生長于懸崖石壁間，大河之上，石面濕潤，附生有苔蘚，陽光照射為半陰半陽。而含量較低的豐都居群生長于楓香樹上中段，樹皮附生有苔蘚。同時，發現采集的三江口居群的石斛莖干是紅色，而其它

居群多為綠色，這是否表明石斛多糖含量的高低與其莖干中花青素的含量有密切關系，這些都有待于進一步研究驗證。

綜上所述，美花石斛在不同地區的不同生活環境中，多糖含量存在明顯差異，其中興義三江口區域和萬峰林區域是美花石斛最適宜生長區域，該區域的美花石斛具有較好的品質，建議其為規?；N植的首選種源。