不同方法檢測(cè)布魯氏菌抗體的對(duì)比評(píng)價(jià)

李玉鑫

【摘要】 目的 研究不同方法檢測(cè)布魯氏菌抗體的效果。方法 選取C地區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖戶與散養(yǎng)農(nóng)戶提供的1500份牛、羊血清作為研究對(duì)象， 通過(guò)虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA） 與試管凝集試驗(yàn)（SAT）三種檢測(cè)方法檢測(cè)布魯氏菌抗體， 比較三種檢測(cè)方法的檢測(cè)效果。結(jié)果 在1500份牛、羊血清樣品中， RBPT方法檢測(cè)陽(yáng)性9份， 陽(yáng)性檢出率為0.60%， ELISA方法檢測(cè)陽(yáng)性7份， 陽(yáng)性檢出率為0.47%， SAT方法的檢測(cè)陽(yáng)性8份， 陽(yáng)性檢出率為0.53%。SAT方法檢測(cè)陽(yáng)性8份， 有1份是RBPT檢測(cè)出的陽(yáng)性血清樣品。ELISA方法檢測(cè)陽(yáng)性7份， 有2份是RBPT檢測(cè)出的陽(yáng)性血清樣品。ELISA、SAT檢測(cè)結(jié)果的符合率為87.50%， RBPT、ELISA檢測(cè)結(jié)果的符合率為77.78%， RBPT、SAT檢測(cè)結(jié)果的符合率為88.89%。結(jié)論 ELISA與SAT檢測(cè)方法的敏感性較高， 所以在實(shí)踐中應(yīng)選用RBPT方法初步篩查布魯氏菌抗體， 并利用ELISA與SAT檢測(cè)方法確診， 進(jìn)而為牛羊布魯氏菌抗體防控奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】 布魯氏菌抗體;檢測(cè)方法;對(duì)比評(píng)價(jià)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.07.114

布魯氏菌病是人畜共患傳染疾病， 主要的誘發(fā)原因就是布魯氏菌， 臨床特點(diǎn)以公畜睪丸炎、母畜流產(chǎn)、生殖器官與胎膜發(fā)炎為主要表現(xiàn)[1]。此疾病的發(fā)生與傳播會(huì)嚴(yán)重危害畜牧行業(yè)的生產(chǎn)與人類身體健康。在布魯氏菌病體內(nèi)與體外診斷方面， 已經(jīng)研發(fā)出多種診斷方式， 而最常使用的就是RBPT、ELISA、SAT等[2]。為深入探討不同方法檢測(cè)布魯氏菌抗體的效果， 以下采用RBPT、ELISA、SAT三種檢測(cè)方法對(duì)布魯氏菌抗體進(jìn)行檢測(cè)， 以期進(jìn)一步推進(jìn)相關(guān)工作的開(kāi)展。

1 材料與方法

1. 1 材料 ①試驗(yàn)使用試劑。布魯氏菌SAT抗原、RBPT抗原與陽(yáng)性血清， 同時(shí)準(zhǔn)備ELISA抗體檢測(cè)試劑盒。②血清來(lái)源：2015年10月～2017年10月C地區(qū)規(guī)模養(yǎng)殖戶與散養(yǎng)農(nóng)戶提供的牛、羊血清1500份。

1. 2 方法 對(duì)1500份牛、羊血清實(shí)施SAT與RBPT檢測(cè)， 并開(kāi)展ELISA檢測(cè)， 根據(jù)試劑盒說(shuō)明書中的具體要求實(shí)施。

1. 3 觀察指標(biāo) 對(duì)比分析RBPT、ELISA、SAT三種不同方法檢測(cè)布魯氏菌抗體的效果。

2 結(jié)果

2. 1 布魯氏菌陽(yáng)性檢出率 在1500份牛、羊血清樣品中， RBPT方法檢測(cè)陽(yáng)性9份， 陽(yáng)性檢出率為0.60%， ELISA方法檢測(cè)陽(yáng)性7份， 陽(yáng)性檢出率為0.47%， SAT方法的檢測(cè)陽(yáng)性8份，?陽(yáng)性檢出率為0.53%。

2. 2 不同檢測(cè)方法符合率 在1500份牛、羊血清樣品中， RBPT方法檢測(cè)陽(yáng)性9份。SAT方法檢測(cè)陽(yáng)性8份， 有1份是RBPT檢測(cè)出的陽(yáng)性血清樣品。ELISA方法檢測(cè)陽(yáng)性7份， 有2份是RBPT檢測(cè)出的陽(yáng)性血清樣品。ELISA、SAT檢測(cè)結(jié)果的符合率為87.50%， RBPT、ELISA檢測(cè)結(jié)果的符合率為77.78%， RBPT、SAT檢測(cè)結(jié)果的符合率為88.89%。

3 討論

布魯氏菌病主要是因布魯氏桿菌誘發(fā)， 屬于人畜共患傳染性疾病， 也是二類傳染病[3]。在畜牧養(yǎng)殖中， 牛、羊都是易感染布魯氏菌病的動(dòng)物。如果牛羊群中感染并傳播布魯氏菌疾病， 將帶來(lái)不可估量的經(jīng)濟(jì)損失， 且公共衛(wèi)生問(wèn)題也將逐漸突顯出來(lái)[4]。為此， 牛、羊布魯氏菌病也成為各級(jí)別獸醫(yī)結(jié)構(gòu)必須檢驗(yàn)項(xiàng)目?jī)?nèi)容。在實(shí)際檢測(cè)的過(guò)程中， 應(yīng)選用諸多方法互相配合， 以保證診斷結(jié)果的有效性與準(zhǔn)確性。現(xiàn)階段， 國(guó)內(nèi)布魯氏菌病最常使用的檢疫技術(shù)就是血清學(xué)的診斷， 所以有必要針對(duì)各種檢測(cè)方法應(yīng)用于布魯氏菌抗體檢測(cè)中的效果展開(kāi)系統(tǒng)化研究與分析， 有效規(guī)避假陽(yáng)性與假陰性結(jié)果的發(fā)生， 提高檢測(cè)準(zhǔn)確性[5]。

目前階段， 國(guó)內(nèi)大多數(shù)地區(qū)都將RBPT作為初篩的首選方法， 而SAT則發(fā)揮配套輔助作用， 對(duì)牛羊布魯氏菌病進(jìn)行監(jiān)測(cè)與監(jiān)控。長(zhǎng)期以來(lái)， SAT始終都是診斷布魯氏菌病的常規(guī)性血清學(xué)手段， 若對(duì)此方法單獨(dú)使用， 很容易出現(xiàn)假陽(yáng)性亦或是假陰性的情況， 且并非全部感染動(dòng)物的抗體水平都具有診斷的意義， 誤診與漏診的幾率偏高。在以上試驗(yàn)研究中， 針對(duì)1500份牛、羊血清布魯氏菌病的非免疫抗體實(shí)施必要的檢測(cè)， 特別是RBPT、ELISA、SAT檢測(cè)方式中， 具有較高敏感性的檢測(cè)方法就是ELISA， 且SAT檢測(cè)的敏感程度也超過(guò)RBPT。針對(duì)血清學(xué)試驗(yàn)而言， 就是針對(duì)血清亦或是乳中所含有的布魯氏菌抗體進(jìn)行有效的檢測(cè)。而在布魯氏菌病的血清學(xué)診斷中， 最常見(jiàn)的就是平板凝集試驗(yàn)， 一般將其應(yīng)用在初步篩查布魯氏菌病的普查過(guò)程中。但需要注意的是， 這種檢測(cè)方法很容易發(fā)生非特異性的凝集情況， 所以盡量不在基層獸醫(yī)檢測(cè)工作中應(yīng)用這種檢測(cè)方法[6]?，F(xiàn)階段， RBPT已經(jīng)逐漸發(fā)展成布魯氏菌病普查的主要方式， 且實(shí)際的檢出幾率和平板凝集試驗(yàn)大致相同， 但是要比SAT陽(yáng)性檢出幾率低。通常情況下， RBPT是不能有效替代平板凝集試驗(yàn)和SAT的， 而是要合理選用綜合診斷的方式， 并在布魯氏菌病的早期診斷當(dāng)中加以運(yùn)用。而SAT則始終被應(yīng)用于布魯氏菌病診斷中， 被當(dāng)做常規(guī)性的血清學(xué)方式， 且國(guó)內(nèi)家畜布魯氏菌病的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)就是以SAT為基礎(chǔ)所形成的復(fù)核診斷方式。若對(duì)SAT進(jìn)行單獨(dú)使用， 還會(huì)發(fā)生假陰性反應(yīng)亦或是假陽(yáng)性的反應(yīng)[7]。除此之外， 并非全部被感染的動(dòng)物抗體水平都具備診斷意義， 所以直接增加了誤診以及漏診的幾率。對(duì)于ELISA的檢測(cè)方法而言， 也是近年來(lái)最常使用的血清學(xué)檢測(cè)方式， 具有較高的敏感性以及特異性， 也是國(guó)際貿(mào)易領(lǐng)域的指定試驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)， ELISA與SAT相比， 其敏感性要更高， 高出10～1000倍左右， 所以也是診斷布魯氏菌病的重要方式。在具體操作方面， RBPT的操作相對(duì)便捷， 且使用時(shí)間不長(zhǎng)。而SAT獲取結(jié)果的時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)， 且需要實(shí)驗(yàn)工作人員用肉眼觀察并對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定， 所以主觀性十分顯著。另外， 對(duì)于ELISA的檢測(cè)方法而言， 可以對(duì)布魯氏菌病進(jìn)行有效地監(jiān)測(cè)， 實(shí)際操作也相對(duì)便捷， 具有較高的敏感性， 能夠獲得準(zhǔn)確性較高的結(jié)果， 具有一定的可行性。為此， 在具體檢測(cè)時(shí)有必要將RBPT、ELISA與SAT三種不同的檢測(cè)方法相互結(jié)合， 以保證優(yōu)劣互補(bǔ)， 提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。優(yōu)先選擇使用RBPT開(kāi)展篩選工作， 針對(duì)疑似陽(yáng)性的樣品使用ELISA與SAT檢測(cè)方法進(jìn)行復(fù)檢， 最終準(zhǔn)確地確診， 實(shí)現(xiàn)防控并進(jìn)化布魯氏菌病的目標(biāo)。只有這樣， 才能夠確保準(zhǔn)確診斷布魯氏菌病， 及早發(fā)現(xiàn)并結(jié)合實(shí)際情況科學(xué)合理地采取防治措施， 以免牛羊養(yǎng)殖遭受嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失， 制約養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)步， 不斷提高牛羊生長(zhǎng)質(zhì)量， 促進(jìn)牛羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

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[收稿日期：2018-09-29]