木蘭花堿的熒光性質(zhì)及其在中藥分析中的應(yīng)用研究

曹津津 孫啟瑞 李文紅 宋冉冉 曹倩玉 王可 魏永巨

摘?要?研究了木蘭花堿（Magnoflorine，MAG）的熒光光譜和吸收光譜特征，考察了pH值等環(huán)境因素對熒光和吸光的影響，探討了光譜性質(zhì)與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系。木蘭花堿水溶液的三維熒光圖譜中呈現(xiàn)3個熒光峰，激發(fā)波長λex為230、275和315 nm，發(fā)射波長λem均為420 nm。隨溶液pH值升高，激發(fā)光譜中的熒光峰紅移并出現(xiàn)等熒光點(diǎn)，吸收光譜中的吸收峰紅移并形成等色點(diǎn)，表明木蘭花堿分子中的1個羥基發(fā)生了質(zhì)子電離，用pH值-吸光法測得電離常數(shù)pKa=4.77。以L-色氨酸為參比，測得木蘭花堿水溶液的熒光量子產(chǎn)率Y=0.19。青風(fēng)藤等多種中藥材的三維熒光圖譜中呈現(xiàn)木蘭花堿的特征熒光峰，λex/λem=315 nm/420 nm處的熒光峰不受共存組分的影響，且熒光強(qiáng)度穩(wěn)定，據(jù)此建立了中藥青風(fēng)藤中木蘭花堿的熒光分析新方法。在0.04～1.25 μg/mL范圍內(nèi)，體系熒光強(qiáng)度IF與木蘭花堿濃度c呈線性關(guān)系，回歸方程為：IF=6146.8c+ 24.4（R=0.999， n=11），檢出限0.52 ng/mL。采用本方法測得青風(fēng)藤對照藥材中MAG的含量為0.63%，加標(biāo)回收率為101.2%～102.7%。LC-MS/MS法測定結(jié)果為0.61%，與熒光法基本一致。本方法簡便快速，結(jié)果可靠，有良好的實(shí)際應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞?木蘭花堿; 青風(fēng)藤; ?中藥; ?三維熒光; ?熒光分析

1?引 言

木蘭花堿（又稱木蘭堿，Magnoflorine，MAG，圖1）屬于阿樸菲類生物堿（Aporphine alkaloids）[1]，廣泛存在于防己科、馬兜鈴科等藥用植物中[2～4]，具有抗氧化[3，5]、膜保護(hù)[6]、降血糖[7]和抗遺忘[8]等藥理作用，但目前木蘭花堿尚未被收錄入中國藥典或作為藥品標(biāo)準(zhǔn)。關(guān)于藥用植物和生物樣品中木蘭花堿的分析方法，主要包括色譜法[9，10]、毛細(xì)管電泳法[11，12]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法[13]，迄今尚未見關(guān)于木蘭花堿熒光性質(zhì)及熒光分析方法的研究報(bào)道。

熒光分析法具有靈敏度高、選擇性好、簡便快速、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，在生化分析和化學(xué)藥物分析中應(yīng)用廣泛。但在中藥分析中，由于樣品所含成分的復(fù)雜性以及中藥成分熒光光譜數(shù)據(jù)的缺乏，熒光分析法的應(yīng)用尚不廣泛[14]。目前，中國藥典中收錄的中藥分析方法主要是色譜等方法，熒光法未被用于中藥成分的定量分析。用熒光法測定中藥成分的含量，難點(diǎn)在于如何避免共存組分的干擾。文獻(xiàn)報(bào)道的中藥熒光分析方法可大致分為兩類：一是常規(guī)的熒光分析法，基于被測組分與共存組分在熒光波長和強(qiáng)度上的差異，實(shí)現(xiàn)快速分析[15，16]; 二是采用三維熒光法結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法[17，18]，利用三維熒光光譜信息，借助數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)分離程序，實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品中熒光性質(zhì)相近的藥效成分的計(jì)算分析[19，20]。常規(guī)方法簡便快速，便于應(yīng)用; 三維熒光結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法可以解決某些常規(guī)方法難以解決的問題，擴(kuò)展了熒光法的應(yīng)用范圍。中藥成分種類繁多、數(shù)量龐大，開展中藥成分熒光性質(zhì)的研究是發(fā)展中藥熒光分析法的關(guān)鍵。

本研究組在研究生物堿類化合物的熒光性質(zhì)時，發(fā)現(xiàn)木蘭花堿有強(qiáng)熒光，其三維熒光圖譜有很好的特征性。將木蘭花堿標(biāo)準(zhǔn)品的三維熒光圖譜與本實(shí)驗(yàn)室前期得到的數(shù)百種中藥對照藥材的三維熒光圖譜進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)青風(fēng)藤等多種中藥材的三維熒光圖譜中呈現(xiàn)木蘭花堿的特征熒光峰，由此推測這些中藥材中可能含有木蘭花堿，因此，可望將木蘭花堿的熒光性質(zhì)用于中藥分析。本研究對木蘭花堿和青風(fēng)藤的熒光性質(zhì)進(jìn)行了詳細(xì)考察，建立了青風(fēng)藤中木蘭花堿的熒光分析方法，并利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）對本方法進(jìn)行了驗(yàn)證。

2?實(shí)驗(yàn)部分

2.1?儀器與試劑

F-7000熒光分光光度計(jì)（日本Hitachi公司）; UV-2501PC紫外-可見分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）; LC-TRIPLE QUAD 5500液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國AB SCIEX公司）; Milli-Q型超純水機(jī)（美國Millipore公司）; 828型pH/ISE測試儀（芬蘭Orion公司）; 十萬分之一分析天平（日本Shimadzu公司）。

木蘭花堿（CAS： 2141-9-5，HPLC級，純度>98%，成都瑞芬思生物科技有限公司）溶液：稱取木蘭花堿對照品2.08 mg，用水溶解并定容至25 mL，配制成83.2 μg/mL木蘭花堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，低溫保存，備用，使用時適當(dāng)稀釋; 青風(fēng)藤對照藥材（1251-0301，防己科植物青藤 Sinomenium acutum （ Thunb.） Rehd. et Wils.（Qingfengteng）的干燥藤莖，中國食品藥品檢定研究院）; 甲醇（色譜純，美國Tedia公司），經(jīng)檢驗(yàn)無熒光; 甲酸（色譜純，美國Dikma公司）; 緩沖溶液：將含磷酸、乙酸和硼酸的混合溶液（均為0.20 mol/L）與NaOH溶液（1.0 mol/L）以一定比例混合，用于調(diào)節(jié)pH值; L-色氨酸（L-Tryptophan，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）; 實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水，經(jīng)檢測無熒光。

2.2?實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1?pH值對吸光和熒光的影響?在一系列10 mL容量瓶中，分別加入適量木蘭花堿溶液，以緩沖溶液控制pH值，以水定容，分別掃描各溶液的吸收光譜或熒光光譜，并精確測量pH值，熒光測定時選擇激發(fā)和發(fā)射狹縫（Slit）為5.0 nm，光電倍增管負(fù)高壓（PMT）為700 V。

2.2.2?熒光量子產(chǎn)率的測量?在25 mL容量瓶中分別加入適量L-色氨酸溶液和木蘭花堿溶液（控制溶液濃度，使激發(fā)波長下的吸光度A≤0.05），以水定容。測量吸收光譜和熒光光譜，測量激發(fā)波長處的吸光度和積分熒光強(qiáng)度。以L-色氨酸為參比（280 nm處的熒光量子產(chǎn)率0.14），計(jì)算待測物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率[21]。

2.2.3?青風(fēng)藤樣品提取液的制備?經(jīng)不同比例的甲醇-水提取溶劑的對比實(shí)驗(yàn)，確定提取溶劑中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為60%。稱取青風(fēng)藤對照藥材粉末0.025 g，以提取溶劑溶解并定容至50 mL，超聲振蕩30 min，靜置過夜，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，得濃度為500 μg/mL的提取液。

2.2.4?色譜條件?Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱（50 mm × 4.6 mm， 1.8 μm）; ?流動相： 甲醇-?0.01%甲酸（60∶40， V/V）; ?流速0.3 mL/min; 柱溫40℃; ?進(jìn)樣量4 μL。

2.2.5?質(zhì)譜條件?離子源為電噴霧電離源 （ESI）; 氣簾氣（CUR）： 275 kPa; 離子化電壓5.5 kV; 離子源溫度500℃; 噴霧氣（GAS1）： 345 kPa; 輔助加熱氣（GAS2）： 345 kPa; 正離子全掃描方式; 采用多離子反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式定量分析。木蘭花堿的質(zhì)譜檢測參數(shù)見表1，與文獻(xiàn)[22]中的參數(shù)基本一致。

3?結(jié)果與討論

3.1?木蘭花堿水溶液的三維熒光圖譜

在酸性條件下，木蘭花堿水溶液在發(fā)射波長（λem）420 nm處呈現(xiàn)一組熒光峰，激發(fā)波長（λex）分別為230、 270和300 nm（圖2A）; pH值為近中性時（圖2B），λem基本不變，λex和熒光峰形有所變化，圖2A中300 nm激發(fā)峰紅移至315 nm; pH值升高至堿性時（圖2C），熒光波長基本不變。上述結(jié)果表明，在溶液pH值由酸性到近中性的過程中，木蘭花堿的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，其分子中的羥基可能發(fā)生了質(zhì)子電離[23]。

木蘭花堿三維熒光圖譜（圖2）有較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度和很好的特征性。本實(shí)驗(yàn)室曾研究過數(shù)百種中藥材的三維熒光圖譜[24]，因缺乏中藥成分熒光性質(zhì)基礎(chǔ)資料，其中大多數(shù)難以判斷熒光峰的歸屬。將圖2與這些中藥材的三維熒光圖譜進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)青風(fēng)藤、川烏、黃連、威靈仙、關(guān)黃柏、酸棗仁、淫羊藿等中藥材的三維熒光圖譜中呈現(xiàn)木蘭花堿的熒光峰。因此，木蘭花堿的熒光性質(zhì)可望用于這些中藥材的鑒別與其中木蘭花堿的測定。

3.2?木蘭花堿熒光的影響因素

測定了木蘭花堿在不同pH值條件下的二維熒光光譜（圖3A）。在酸性條件下（pH 1.7～5.9），隨pH值升高，激發(fā)光譜中270 nm處的熒光峰減弱并紅移至275 nm，230 和300 nm處的熒光峰升高并分別紅移至235和315 nm，在252和297 nm出現(xiàn)等熒光點(diǎn); 發(fā)射光譜中420 nm處的熒光峰波長不變，但強(qiáng)度減弱。在近中性及堿性條件下（pH 6.4～14.0），熒光波長和強(qiáng)度均基本不變。熒光強(qiáng)度與pH值之間的關(guān)系如圖3B所示。

根據(jù)不同pH值下木蘭花堿的熒光光譜變化推斷，在pH 1.7～14.0之間，木蘭花堿發(fā)生了羥基質(zhì)子電離。激發(fā)光譜中等熒光點(diǎn)的出現(xiàn)表明，在pH值變化過程中，木蘭花堿存在兩種熒光型體的轉(zhuǎn)化[23]，一種是在酸性條件下的分子型體，另一種是在近中性和堿性條件下的離子型體，兩種型體的熒光激發(fā)波長不同，發(fā)射波長相同，均為420 nm。木蘭花堿分子結(jié)構(gòu)中有2個羥基，但只有1個羥基質(zhì)子電離。從分子結(jié)構(gòu)看，木蘭花堿B環(huán)上季銨N原子帶正電荷，對相鄰A環(huán)的π-電子體系有吸引作用，使得C1位上的羥基較易電離出質(zhì)子。文獻(xiàn)[25]計(jì)算得到C1位OH鍵能（88.7 kcal/mol）低于C11位OH鍵能（90.9 kcal/mol）。因此，推測應(yīng)該是C1位羥基質(zhì)子電離。質(zhì)子電離后產(chǎn)生的氧負(fù)離子與A環(huán)共軛，增大了A環(huán)的電子云密度，導(dǎo)致激發(fā)波長（吸收波長）紅移。另一方面，氧負(fù)離子可能與空間距離較近的D環(huán)C11位羥基形成分子內(nèi)氫鍵[26]，導(dǎo)致C11位羥基質(zhì)子難以電離。

甲醇和水是提取及測定中藥熒光成分時的常用溶劑。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在水-甲醇體系中，隨著甲醇體積分?jǐn)?shù)增大，木蘭花堿的λem逐步藍(lán)移; 在甲醇中λem=375 nm，熒光有所增強(qiáng)。從實(shí)驗(yàn)成本和環(huán)境保護(hù)等方面考慮，應(yīng)選擇在近中性水溶液中測定木蘭花堿的熒光。

有序介質(zhì)常對物質(zhì)的熒光有敏化作用。結(jié)果表明， 0.02 mol/L 十二烷基硫酸鈉（SDS）和溴化十六烷基三甲銨（CTAB）對木蘭花堿水溶液的熒光基本無影響。因此，可直接利用木蘭花堿的內(nèi)源熒光。

在日內(nèi)和日間（1，3和5 d）分別測量9份相同濃度的木蘭花堿水溶液的熒光強(qiáng)度，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.5%和1.2%，表明木蘭花堿的熒光穩(wěn)定。

綜上，木蘭花堿在近中性水溶液中有穩(wěn)定的強(qiáng)熒光，適宜用于分析測定。

3.3?木蘭花堿的吸收光譜與電離常數(shù)

為了驗(yàn)證上述木蘭花堿熒光光譜隨pH值變化的分子機(jī)理，測定了木蘭花堿水溶液在不同pH值下的吸收光譜（理論上，熒光激發(fā)光譜與吸收光譜的圖形相似，隨pH值變化的趨勢相同），結(jié)果見圖4A。在酸性條件下，木蘭花堿在250～380 nm波長范圍內(nèi)有2個吸收峰，吸收波長分別為268和300 nm。隨pH值升高，268 nm處的吸收峰紅移至275 nm，吸光度降低; 同時，300 nm吸收峰紅移至316 nm，吸光度升高，在254 nm和302 nm形成等色點(diǎn); pH>6后，吸收光譜不再隨pH值的升高而變化。各光譜曲線在320 nm處的吸光度A與pH值的關(guān)系呈S形曲線（圖4B）。在240～350 nm范圍，圖4中的吸收光譜與圖3中的熒光激發(fā)光譜形狀相似，變化趨勢相同。

圖4A中出現(xiàn)等色點(diǎn)，表明木蘭花堿在水溶液中存在兩種吸光型體（也是熒光型體）的相互轉(zhuǎn)化，木蘭花堿發(fā)生了質(zhì)子電離，表現(xiàn)為一元弱酸。根據(jù)圖4中的光譜數(shù)據(jù)，可以用pH值-光度法測定木蘭花堿羥基質(zhì)子的電離常數(shù)pKa，計(jì)算公式為：

式中， AHL表示弱酸分子全部以分子型體存在時的吸光度（如圖4B中pH 2.5附近的A值）， AL表示弱酸分子全部以離子型體存在時的吸光度（如圖4B中pH 7.0附近的A值）。將圖4B中位于S形曲線中間部分的 pH-A數(shù)據(jù)代入式（1），計(jì)算pKa，結(jié)果見表2， 平均值為pKa=4.77。

3.4?木蘭花堿的熒光量子產(chǎn)率的測定

按照2.2.2節(jié)方法測得木蘭花堿水溶液（離子型體）的熒光量子產(chǎn)率為0.19，屬于強(qiáng)熒光物質(zhì)。從分子結(jié)構(gòu)（圖1）上看，木蘭花堿具有強(qiáng)熒光物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)特征：具有大的共軛π鍵結(jié)構(gòu)，圖1中A、D兩個苯環(huán)形成聯(lián)苯結(jié)構(gòu)，共軛程度較高; 具有剛性平面結(jié)構(gòu)，C環(huán)與A、D兩環(huán)連接，增加了分子的平面性和剛性，其離子型體的C1位氧負(fù)離子可能與C11位羥基形成分子內(nèi)氫鍵，也使分子的剛性增強(qiáng); 苯環(huán)上的給電子取代基（羥基和甲氧基）具有增強(qiáng)熒光的作用; 從圖1和熒光波長為420 nm可以推斷，木蘭花堿的最低單線電子激發(fā)態(tài)S1為（π，π*）型，此類躍遷幾率高，熒光強(qiáng)度大。

3.5?中藥青風(fēng)藤提取液的三維熒光圖譜

青風(fēng)藤為防己科植物青藤和毛青藤的干燥藤莖，主治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)腫痛等癥[27]。在青風(fēng)藤藥材中已發(fā)現(xiàn)逾60種化合物，主要包括生物堿類、脂類、甾醇類、萜類、菲類和蒽醌類等[28]，其藥效成分主要為嗎啡烷類[29，30]和阿樸菲類[31]生物堿。雖然青風(fēng)藤中的化學(xué)成分種類繁多，但其提取液的熒光光譜比較簡單（圖5）。

圖5與圖2中，位于λem=420 nm的熒光峰的激發(fā)波長和光譜形狀基本一致，且隨pH值的變化基本相同，可判斷為木蘭花堿的熒光峰。在圖5中，短波處（λem=330～340 nm）的熒光峰推測為嗎啡烷類生物堿，此類化合物的分子共軛程度較低，熒光波長較短。在堿性條件下（圖5C），木蘭花堿熒光峰的λem略有紅移，可能是菲類及蒽醌類化合物所致，這些化合物的分子共軛程度較高，熒光波長較長。對比圖5和圖2可知，如選擇在中性水溶液中，激發(fā)波長為315 nm時測定木蘭花堿的熒光，青風(fēng)藤中的其它組分基本不干擾。

3.6?青風(fēng)藤中木蘭花堿的熒光法測定

測定不同濃度的木蘭花堿系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光光譜（圖6），熒光強(qiáng)度IF（λex/λem=315 nm/420 nm）與木蘭花堿在0.04～1.25 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為IF=6146.8c+ 24.4，相關(guān)系數(shù)R=0.999（n=11）。以空白信號3倍的標(biāo)偏差計(jì)算方法的檢出限為0.52 ng/mL。

在青風(fēng)藤樣品提取液中加入不同體積的木蘭花堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。回收率在101.2%～102.7%之間。 配制4份不同濃度的青風(fēng)藤提取液，采用本方法測得木蘭花堿的含量平均值為0.63%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD， n=4）為0.1%。用本方法測定木蘭花堿時，如果樣品提取液中的其它組分在測量波長下也產(chǎn)生熒光，則會對測定產(chǎn)生干擾。利用LC-MS/MS，測得同一青風(fēng)藤樣品中木蘭花堿的含量為0.61%，RSD為2.5%（n=3）。兩種方法測定結(jié)果基本一致。

4?結(jié) 論

木蘭花堿水溶液可產(chǎn)生穩(wěn)定的強(qiáng)熒光，可用于中藥樣品中木蘭花堿的測定。本研究建立的青風(fēng)藤中木蘭花堿的熒光分析新方法具有簡便快速、環(huán)境友好、靈敏度高、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)， 研究結(jié)果為中藥和生化樣品中木蘭花堿的分析測定提供了新思路。

References

1?Nakano T. Pharm. Bull.， 1954， 2（4）： 329-334

2?Sarma D N K， Koul S， Khosa R L. J. Pharm. Sci. Res.， ?2009， ?1（1）： 26-27

3?Li C， Wang M H. Korean J. Plant Resour.， ?2014， ?27（3）： 223-228

4?Morris J S， Facchini P J. J. Biol. Chem.， ?2016， ?291（45）： 23416-23427

5?Hung T M， Lee J P， Min B S， Choi J S， Na M， Zhang X， Ngoc T M， Lee I， Bae K. Biol. Pharm. Bull.， ?2007， 30（6）： 1157-1160

6?Sakumoto H， Yokota Y. J. Nat. Med.， ?2015， 69（3）： 441-448

7?Xue B J， Zhao Y Y， Su J， Miao Q， Miao P P， Chen N， Wang Z J， Zhang Y J， Ma S C. Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet.， ?2017， 42（2）： 281-293

8?Kukula-Koch W， Mroczek T. Anal. Bioanal. Chem.， ?2015， 407（9）： 2581-2589

9?Doslovkokorus Z R， Ivanovic I D， Simic M R， Vajs V E. J. Serb. Chem. Soc.， ?2006， 71（3）： 251-255

10?Avula B， Wang Y H， Rumalla C S， Ali Z， Smillie T J， Khan I A. J. Pharm. Biomed. Anal.， ?2011， 56（5）： 895-903

11?Wang S C， Zhang Z， He L C， Li H. Anal. Lett.， ?2010， 43（9）： 1534-1542

12?Wang L L， Xu H F， Ye H Z， Yu L S， Lin Z Y， Liu X X， Chen G N. Anal. Methods， ?2013， 5（19）： 5267-5271

13?Tian X T， Li Z X， Lin Y F， Chen M C， Pan G Y， Huang C G. Anal. Bioanal. Chem.， ?2014， 406（3）： 841-849

14?SHI Xun-Li， WEI Yong-Ju， ZHANG Ying-Hua， WANG Ya-Min， LIU Cui-Ge. Spectroscopy and Spectral Analysis， 2007， 27（4）： 769-772

史訓(xùn)立， 魏永巨， 張英華， 王亞敏， 劉翠格. 光譜學(xué)與光譜分析， 2007， 27（4）： 769-772

15?Yang F， Liu C G， Wei Y J. Acta Pharm. Sin. B， ?2012， 2（3）： 294-299

16?LI Wen-Hong， SUN Chong-Mei， WEI Yong-Ju. Acta Pharm. Sin.， ?2015， 50（10）： 1324-1329

李文紅， 孫沖梅， 魏永巨. 藥學(xué)學(xué)報(bào)， ?2015， 50（10）： 1324-1329.

17?Wu H L， Nie J F， Yu Y J， Yu R Q. Anal. Chim. Acta， ?2009， 650： 131-142

18?Yu Y J， Wu H L， Nie J F， Zhang S R， Li S F， Zhu S H， Yu R Q. Chemometr. Intell. Lab. Sys.， ?2011， 106： 93-107

19?Bai X M， Liu T， Liu D L， Wei Y J. Spectrochim. Acta A， ?2018， 191： 195-202

20?Liu T， An X N， Liu D L， Wei Y J. Spectrochim. Acta A， ?2019， 208： 172-178

21?WEI Yong-Ju， LI Na， QIN Shen-Jun. Spectroscopy and Spectral Analysis， ?2004， 24（6）： 647-651

魏永巨， 李 娜， 秦身鈞. 光譜學(xué)與光譜分析， ?2004， 24（6）：647-651

22?XIE Tong， CHENG Xue-Fang. Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics， ?2017， 22（9）： 984-991

謝 彤， 程學(xué)芳. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)， ?2017， 22（9）： 984-991

23?Lakowicz J R. Principles of Fluorescence Spectroscopy. Springer US， ?2006： 8

24?WEI Yong-Ju. 3D Fluorescent Fingerprint of Chinese Herbal Medicine. Beijing： Science Press， ?2012： 40， 114， 131， 151， 165， 295， 363

魏永巨. 中藥三維熒光檢驗(yàn)法. 北京： 科學(xué)出版社， ?2012： 40， 114， 131， 151， 165， 295， 363

25?Racková L， Májeková M， Kost'álová D， tefek M. Bioorg. Med. Chem.， ?2004， 12（17）： 4709-4715

26?Ribr B， Lazar D， Gaic' O， Kanyó I. Acta Crystallogr. C， ?1992， 48（5）： 945-947

27?Zhao X X， Peng C， Zhang H， Qin L P. Pharm. Biol.， ?2012， 50（8）： 1053-1061

28?Lv H， Zhao M， Jiang Y， Tu P. J. Chin. Pharm. Sci.， ?2017， 26（6）： 440-446

29?Bao G H， Qin G W， Wang R， Tang X C. J. Nat. Prod.， ?2005， 68（7）： 1128-1130

30?Jin H Z， Wang X L， Wang H B， Wang Y B， Lin L P， Ding J， Qin G W. J. Nat. Prod.， ?2008， 71（1）： 127-129

31?Min Y D， Choi S U， Lee K R. Arch. Pharm. Res.， ?2006， 29（8）： 627-632