瑤族抗癲癇藥物皮膚不良反應患者的HLA-B*1502基因分析及其護理策略研究

成麗英

廣東省連南瑤族自治縣人民醫院，廣東連南 513300

人類白細胞抗原B基因（HLA-B）被認為是最復雜的遺產性多態性系統，隨著醫療技術的不斷發展，有關研究表明引起移植物排斥反應的主要抗原為異體HLA，自身HLA可以激發T細胞分化發育、免疫應答[1]。HLA-B是屬于hLA- I類抗原中的一類，其編碼基因位于人類第6號染色體的區域內，通過糖蛋白的形式，在大多數有核細胞的膜表面表達[2]。HLA在不同民族、不同人種的分布存在差異，我院選取100名廣東瑤族人采用測序技術對人類白細胞抗原B基因進行研究，探究廣東瑤族人群HLA-B基因多態性研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017年6月～2018年8月我院4例服用抗癲癇藥物后出現皮膚不良反應的瑤族癲癇患者，年齡29～80歲，平均（52.2±2.6）歲；男3例，女1例；所有患者均告知相關事項并知情同意，留取其抗凝血2mL，進行HLA-B*1502基因檢測。本研究通過醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 試驗儀器 全血人基因組核酸提取純化采用Lab-Aid 824核酸提取儀及其配套的Lab-Aid 824核酸提取Mini試劑盒，兩者均由廈門致善生物科技股份有限公司提供[4]；NanoDrop 2000 超微量紫外分光光度計由美國Thermo公司提供；“人類白細胞抗原 B 位點 1502 基因檢測試劑盒”由臺灣世基生物醫學股份有限公司提供；CFX-96熒光定量PCR儀由美國Bio-Rad公司提供。

1.2.2 HLA-B*1502基因檢測 采用Lab-Aid 824核酸提取儀進行全血DNA提取，用NanoDrop 2000超微量紫外分光光度計進行DNA濃度及純度分析，確保DNA含量＞10ng/μL，OD260/280在1.8～2.0。所提取的DNA如非當日使用，置于-20℃保存；使用完畢后剩余的DNA保存于-80℃備查。

每一樣本同時進行內部質控及樣本檢測兩個獨立的PCR反應，其配置如下。內部質控： PCR混合液12.5μL +內部控制基因混合液2.5μL +去核酸純水8μL +待測DNA2μL；標本檢測：PCR混合液12.5μL +PG1502混合液2.5μL +去核酸純水8μL+待測DNA2μL。加好的PCR管瞬時離心后轉移至CFX-96熒光定量PCR儀上按以下條件進行擴增：95℃ 10min預變性，然后按95℃ 15秒 →71℃ 60秒35循環進行擴增；熒光通道設置為SYBR，熒光信號收集設置在71℃ 60秒結束時。結果判讀：內部質控管CT值≤27，標本檢測管CT值≤35，且標本檢測管CT值-內部質控管CT值≤7時，判讀為1502陽性；而標本檢測管CT值-內部質控管CT值＞7時，或標本檢測管CT值＞35時，則判讀為1502陰性。

選擇檢測呈現陽性患者采取針對型護理的具體方案包括，由我院選取3～4名有豐富臨床經驗的護士組成醫療小組，對患者的病情狀況進行分析，同時制定優質的護理方案。（1）對于皮疹較重、伴有發熱等癥狀者應臥床休息。關注患者飲食，避免辛辣刺激性食物。密切關注患者的生命體征、皮疹變化、數量、部位等。（2）病室保證清潔，定時通風，對空氣消毒。叮囑患者保持皮膚清潔，每日用溫水輕擦皮膚，禁用肥皂水、酒精等物質。（3）若患者皮膚痛癢，應避免搔抓，進而造成的皮膚感染。若患者皮膚劇癢，可涂5%碳酸氫鈉或爐甘石洗劑等進行緩解。（4）當皮膚結痂后，保證其自行脫落，不要強行撕脫，翹起的痂皮使用消毒剪刀剪去。（5）有系統的組織研究組患者開設有關疾病的健康知識講座，講座開設的時間從在院期間到出院后，對患者進行長時間的宣教，耐心解決患者的相關疑問[9]。

1.3 觀察指標

調查統計562例廣東瑤族志愿者的HLA-B等位基因頻率分布。統計分析廣東瑤族人的HLA-B基因頻率與抗原頻率的分布之間的關系。

1.4 統計學方法

數據應用SPSS20.0進行分析，其中計數資料進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

HLA-B等位基因中基因數以及抗原數最多的為B*1401（P＜0.05），其他基因中的基因頻率與抗原頻率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 HLA-B基因頻率與抗原頻率的分布

3 討論

人類白細胞抗原（HLA）位于第6染色體短臂上，屬于HLA基因復合體的編碼產物。HLA為重要抗原物質，起到構成移植排斥反應的作用，其本質屬于人類組織復合體的表達產物[10]。HLA的研究與器官移植的發展有直接關系，因此人類白細胞抗原又稱移植抗原[11]。

HLA在臨床上的主要作用為器官移植、輸血、疾病的診斷等三個方面，HLA在器官移植中主要對臟器或骨髓移植起作用，為成功進行移植選擇相對應的的供、受者[14-15]。在腎移植中，供受雙方共有的DR錯配抗原數的多少，決定了移植存活率的高低[16]。在疾病診斷方面HLA可以對某些與遺傳因素相關的疾病進行篩選，HLA與免疫病理學具有聯系，對T細胞表面進行抗原鑒定。通過HLA之間的配對，與相互作用的免疫效應細胞之間構成通訊等，擴展HLA在生物學方面的應用，如感染、自身免疫、移植物抗腫瘤等的抗原識別等[17]。本研究中，對檢測呈現陽性患者采取針對型護理，選擇專門的護理人員，對其制定專門的護理方案，研究結果表明，患者的康復狀況得到顯著改善。4例患者中，HLA-B*1502基因檢測結果為陽性的有1例，陰性的為3例。采取針對型的護理措施后，HLAB*1502基因陽性與陰性的患者間，其護理效果比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

對HLA位點的數據進行統計分析時，臨床上多選擇采用血清學方法。HLA編碼系統中的B位點是最復雜，且多態性最多的部分。B位點的高變區以及各等位基因的差異主要體現在幾個堿基的排序之間，且某些等位基因的特別高變區具有自身獨特的堿基序列，因而該部位交叉反應較多[18]。因血清學中B位點通常會出現錯檢、漏檢或定型困難等各類問題，本研究的DNA的來源主要為：從血液中提取出的，此類DNA的特點為含有人類遺傳信息的，化學性質較為穩定。通過利用序列特異性引物聚合酶的鏈反應，對目的帶進行特異性擴增，進而得到位點分型[19]。本研究采用的PCR SSP方法，被稱為照相分型，該方法具有重復性良好、準確性高的優勢。有關研究表明，采用該方法進行實驗以DNA為基礎的11428例HLA-B分型的錯誤率較低且僅為1.9%。HLA為同種異體抗原，具有高度多態性，其化學本質為一類糖蛋白，它的組成為一條被糖基化的α重鏈和一條β輕鏈[20]。本研究中，對比廣東地區HLA-B基因頻率與抗原頻率的分布，研究結果表明，HLA-B等位基因中基因數以及抗原數最多的為B*1401（P＜0.05），其他基因中的基因頻率與抗原頻率比較差異無統計學意義（P＞0.05）。HLA-B *1401的基因分布頻率與抗原頻率分別為0.0106、0.1011，其他基因中的基因頻率與抗原頻率比較差異無統計學意義（P＞0.05）。HLA-B*071的抗原頻率與基因頻率最少分別為0.0001、0.0001。

綜上所述，采用測序技術對用藥出現不良反應的廣東瑤族人群HLA-B基因進行研究，采用針對型護理方案，有效地緩解患者的不良反應，為遺傳學以及相關研究提供資料。