返魂草資源調查及分子鑒別研究

孫仁爽，張立秋，楊洪凱，鄧 琦，薛長松

（通化師范學院·吉林通化·134002）

返魂草為菊科多年生宿根草本植物麻葉千里光和單麻葉千里光的花期干燥全草[1]，是中成藥肺寧沖劑的原料藥。在民間廣泛用于抗病毒性感冒、抗炎及感染性疾患的治療。返魂草具有清熱解毒、舒肝理氣等作用，外用還可用于止血及分娩的鎮痛等[2]。 這兩種植物主要分布于吉林省的長白山區，另外黑龍江、內蒙古及朝鮮、日本、俄羅斯（遠東地區）也有分布[4]。主要生于海拔 700～1100 m的林間濕地、山溝林緣及濕草甸子[5]。另外在長白山區還分布另外一種千里光屬植物-林蔭千里光，與返魂草形態相似，容易被采集混入藥材市場。

為了解返魂草分布及基原情況，本研究對長白山返魂草進行了調查，并采集了三種藥用植物的葉片，進行DNA分析，為返魂草合理應用提出合理建議。

1 調查及研究方法

在近三年時間對長白山返魂草進行調查，并收集返魂草及林蔭千里光葉片裝入硅膠袋中迅速脫水干燥處理，形成待測樣品。

2 DNA處理

將待測樣用植物DNA提取試劑盒提取總DNA；參考羅焜等[6]研究方法，對提取的總DNA進行處理和分析[7，8]。 應用 MEGA6.0 計算分析[9]，構建系統聚類樹。

3 調查結果與分析

3.1 生境調查

長白山區返魂草主要生于海拔700～1100m的林間濕地、山溝林緣及濕草甸子。在實地調查的過程中發現，林蔭千里光與返魂草混生于山溝林緣處。兩種外觀形態相似，易于混淆。

3.2 DNA材料

本研究共收集23份樣品，詳細信息見表1。

表1 實驗樣品信息表

3.3 樣品處理結果

從全部樣品的根提取基因組總DNA，對DNA進行PCR擴增，擴增后PCR產物電泳均顯示較亮條帶，結果見圖1。

圖1 凝膠電泳圖

圖1 表明基因組總DNA提取質量較好，對PCR產物進行雙向測序得到高質量的ITS2條形碼序列。

3.4 物種遺傳距離分析及發育樹構建

根據測序結果對返魂草和林蔭千里光進行分析，結果見表2。

表2 單麻葉千里光、麻葉千里光、林蔭千里光遺傳距離

由表2可知，返魂草、林蔭千里光的種內遺傳距離均為0，單麻葉千里光、麻葉千里光中間遺傳距離為0.1302，而與林蔭千里光種間遺傳距離均為0～0.1735，其種間遺傳距離都大于種內遺傳距離。

基于ITS2序列，構建了系統發育樹見圖2。

圖2 ITS2序列構建返魂草、林蔭千里光NJ樹

結果表明返魂草與林蔭千里光聚為二支，返魂草與林蔭千里光在分子上可以區分。所以采用K2P遺傳距離、NJ法構建系統發育樹可區分返魂草和林蔭千里光。

4 結論與討論

本研究通過對返魂草資源情況調查可知，返還草野生資源逐年減少，在長白山海拔 700～1100m左右或在此類條件下栽培，也可在環境條件相似或相近的地方栽培，對野生資源的保護起到一定的作用。

另比較了藥材返魂草和林蔭千里光的遺傳距離和系統發育樹。返魂草藥材來源的麻葉和單麻葉千里光，雖然在遺傳距離和系統發育上差異不明顯，但在我們多年野外考察經驗上看，這兩種植物從形態上有較大區別，而林蔭千里光與返魂草之間區別在細節上，非專業鑒別不能很好的區分。這說明，經典形態分類鑒別與分子鑒別相結合才能科學合理分類。今后還應進一步加大千里光屬藥用植物資源的樣本量，來更好開發該屬植物。