酶聯免疫吸附試驗法與化學發光免疫分析法檢測乙型肝炎病毒血清學標志物的準確率

張萬平

廈門市海滄區婦幼保健院 （福建廈門 361000）

乙型病毒性肝炎是臨床常見的肝臟疾病，主要由乙型肝炎病毒引起，病變部位以肝臟為主，患者臨床表現為肝區疼痛、食欲下降、乏力等，部分患者伴有黃疸、肝功能損害等，如果不能早發現、早治療，則會發展為肝硬化，甚至肝癌。乙型病毒性肝炎具有傳染性，以血液傳播為主要感染途徑，一旦出現感染，若不能及時清除病毒，則會降低患者的免疫功能，進而引發全身性感染，誘發多種疾病，嚴重威脅患者的生命安全。目前，乙型病毒性肝炎已經成為世界公共衛生問題，在我國1～59歲人群中乙型肝炎表面抗原 （HBsAg）陽性率高達7．18%［1］。雖然經過多年的發展和乙型肝炎疫苗在新生一代人口的普及，但我國人們的乙型肝炎病毒攜帶率依舊居高不下［2］。血清學標志物檢測是臨床乙型肝炎病毒檢測的重要手段，主要的檢測方法包括酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法與化學發光免疫分析 （CLIA）法。CLIA法被認為是更高效的檢測乙型肝炎病毒血清學標志物的方法［3］。本研究旨在比較ELISA法與CLIA法檢測乙型肝炎病毒血清學標志物的準確率，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年7月至2018年7月于我院就診的72例乙型肝炎病毒感染患者，其中男40例，女32例；年齡24～54歲，平均 （38．7±1．9）歲；文化程度，初中及以下34例，高中20例，高中以上18例。患者均知情同意本研究，且已簽署知情同意書。納入標準： （1）符合 《乙型肝炎診斷標準 （WS299-2008）解讀》［4］中的乙型肝炎診斷標準；（2）患者出現不同程度的惡心、肝臟腫大、腹水等癥狀。排除標準：（1）合并嚴重臟器疾病或精神疾病患者；（2）妊娠或哺乳期女性。

1.2 檢測方法

采集患者清晨、空腹狀態下的肘靜脈血3～5 ml，采用離心機進行離心處理，3 000 r／min，時間10～15 min，分離上清血液，并將其置于-20℃的冰箱中保存。應用全自動化學發光免疫分析儀 （長沙騰健醫療器械有限公司生產，型號ChemLiteTM 1200）、酶標免疫檢測儀 （北京普朗研發生產，型號DNM-9602G）對患者進行ELISA法、CLIA法檢測，檢測試劑為配套試劑，嚴格按照試劑盒上的說明書，根據操作流程，對血清學標志物相關指標進行檢測，并進行詳細記錄。

1.3 臨床評價

比較兩種檢測方法的準確率，以及兩種檢測方法檢測HBsAg、乙型肝炎表面抗體 （抗-HBs）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體 （抗-HBe）、乙型肝炎核心抗體（抗-HBc）的陽性率。

1.4 統計學處理

采用SPSS24．0統計軟件進行數據分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法的準確率比較

72例患者，經CLIA法檢測確診乙型肝炎病毒感染69例，準確率為95．83%；經ELISA法檢測確診乙型肝炎病毒感染61例，準確率為84．72%；CLIA法檢測準確率高于ELISA法，差異有統計學意義 （χ2=5．064，P＜0．05）。

2.2 兩種檢測方法檢測血清標志物的陽性率比較

CLIA法檢測HBsAg、HBeAg的陽性率均高于ELISA法檢測，差異均有統計學意義 （P＜0．05）；兩種檢測方法檢測抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc的陽性率比較，差異均無統計學意義 （P＞0．05）。見表1。

表1 72例經兩種檢測方法檢測血清標志物的陽性率比較 ［例 （%）］

3 討論

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一種具有感染性的肝臟疾病。隨著人們生活方式的不斷改變，乙型病毒性肝炎患者的數量越來越多，發病率呈現顯著的上升趨勢，對患者的生活、健康安全均造成極大的影響。基于此，對乙型病毒性肝炎患者采取早期診斷，并予以有效控制，對患者預后具有十分重要的意義。傳統診斷乙型病毒性肝炎患者的方法效果并不理想，延誤了患者的臨床治療。提高乙型病毒性肝炎患者的臨床診斷準確率，便于制定合理的治療方案，以控制患者病情，減輕患者痛苦。

近年來，ELISA法、CLIA法在臨床乙型病毒性肝炎的診斷中得到廣泛應用，并取得顯著的效果。ELISA法是指將抗原、抗體的特異反應連接酶、待測物，通過底物、酶兩者發生反應，從而達到檢測的目的。ELISA法的原理可以分為兩種：（1）抗原 （或抗體）與某種酶連接，形成酶標抗原 （或抗體），且該形成物不但具有免疫活性，還同時存在酶活性；（2）抗原 （或抗體）結合到某固相載體表面，且保存免疫活性。ELISA法雖然操作簡單，成本較低，但由于手工加樣、孵育時間、洗板等因素影響容易導致非特異性反應的發生，易造成結果不穩定。當標本中的待檢物質濃度過高時會因鉤狀效應出現假陰性結果而造成漏檢；并且ELISA法是使用酶顯色進行檢測，通過顏色深淺來判斷實驗結果，在抗原 （抗體）與酶結合物濃度低時，吸光度值太小，易出現假陰性情況，且由于檢測方法的局限而造成HBsAg假陰性的漏檢情況也常有出現［5］。

CLIA法是新型的免疫測定方法，是電化學發光、免疫測定共同結合的產物，其作用原理是利用電化學作用在電極表面引起的特異性化學反應，進行免疫測定。通過應用電化學發光劑對抗體進行標記，以顆粒分離技術、抗原抗體反應為基本原理，根據在電極上電化學發光劑的光強度大小，對抗原 （或抗體）進行定量、定性等分析。CLIA法具有檢測時間短、靈敏度高、應用范圍廣等優勢，且檢查的準確率高，因此，備 受 臨 床 醫 師 的 認 可［6-7］。HBsAg、抗 -HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc血清標志物是臨床診斷乙型病毒性肝炎的重要物質。本研究中，CLIA法檢測準確率高于ELISA法，差異有統計學意義 （P＜0．05）。CLIA法檢測HB-sAg、HBeAg的陽性率高于ELISA法檢測，差異均有統計學意義 （P＜0．05）；兩種檢測方法檢測抗 -HBs、抗 -HBe、抗-HBc的陽性率比較，差異均無統計學意義 （P＞0．05）。說明與ELISA法比較，應用CLIA法對乙型病毒性肝炎進行診斷更具價值。

綜上所述，乙型肝炎病毒血清學標志物應用CLIA法檢測的準確率高于ELISA法。