金橘不同提取物對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)功能的影響

黃華花，陳景海，徐晶晶，王圣江，林亞珠

（1.廈門醫(yī)學(xué)院 福建省中藥精加工與健康產(chǎn)品開發(fā)重點(diǎn)研究室，福建 廈門 361023；2.廈門市婦幼保健院 中藥房，福建 廈門 361003）

金橘又名金桔、山橘、金棗、金柑、金彈等，是蕓香科植物，常以果實(shí)入藥。其性溫，味辛、甘，具理氣解郁、消食化痰、醒酒之功效，主胸悶郁結(jié)、脘腹痞脹、食滯納呆、咳嗽痰多、傷酒口渴[1]。金橘藥食同源，除鮮食外，還加工成蜜餞、罐頭、糕點(diǎn)、果汁、飲料等[2]，并已開發(fā)成具有保健功能的咸金棗、金栆丹，具有健脾胃、助消化、去痰下氣、理氣醒酒等功效，在東南亞一帶久負(fù)盛名[3]。為了闡明金橘對(duì)胃腸道的影響情況，探討其作用機(jī)制，為其深度開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)考察了金橘水提、醇提液對(duì)正常狀態(tài)、阿托品所致的抑制模型和新斯的明所致的亢進(jìn)模型小鼠胃排空和小腸推進(jìn)功能的影響[4-7]。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Nanogenius超微量光譜分析儀（上海美譜達(dá)）；TDL-60B臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭）；KQ5200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）；BSA822-CW電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；CP124C電子天平[奧豪斯儀器（上海）公司]。

1.2 藥品與試劑

金橘購(gòu)自福建省三明市尤溪縣管前鎮(zhèn)，由廈門醫(yī)學(xué)院鮑紅娟副教授鑒定為Fortunella margarita(Lour.) Swingle；枸櫞酸莫沙必利片（江蘇豪森藥業(yè)，批號(hào)171205）；硫酸阿托品注射液（天津金耀藥業(yè)，批號(hào)1802061）；甲硫酸新斯的明注射液（上海信誼金朱藥業(yè)，批號(hào)1710503）；明膠，乙醇（國(guó)藥集團(tuán)），氫氧化鈉（西隴科學(xué)），酚紅（天津光復(fù)精細(xì)化工研究所），均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件

SPF級(jí)KM小鼠，雌雄各半，18～22 g，合格證號(hào)SCXK（京）2014-0004，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，飼養(yǎng)于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK（閩）2013-0006。

2 方法

2.1 藥物配制

2.1.1 金橘水提液的制備 取金橘50 g，粉碎，加蒸餾水500 ml，煎煮2 h，濾過，濾渣再加蒸餾水250 ml，煎煮1 h，濾過，合并濾液，濃縮至100 ml，得每1 ml相當(dāng)于0.5 g金橘的藥液，作為儲(chǔ)備液。給藥前稀釋成最終濃度分別為0.03，0.06，0.12 g/ml的藥液。

2.1.2 金橘醇提液的制備 取金橘50 g，粉碎，加75 %乙醇500 ml，回流提取2次，每次1 h，濾過，合并濾液，回收乙醇至浸膏狀，加水配制成每1 ml相當(dāng)于0.5 g金橘的藥液，作為儲(chǔ)備液。給藥前稀釋成最終濃度分別為0.03，0.06，0.12 g/ml的藥液。

2.2 對(duì)正常狀態(tài)小鼠胃排空、小腸推進(jìn)的影響

取小鼠96只，雌雄各半，隨機(jī)分為8組，分別為空白組、莫沙必利2.14 mg/kg組、金橘水提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3個(gè)劑量組、金橘醇提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3個(gè)劑量組。各給藥組灌胃給予相應(yīng)的藥物溶液20 ml/kg，每日1次，連續(xù)3日，空白對(duì)照組給予等容積的蒸餾水。第3日給藥前禁食12 h，給藥后2 h，灌服酚紅溶液0.25 ml/只。20 min后處死。同時(shí)取出胃和小腸，測(cè)量小腸內(nèi)酚紅所達(dá)距離和小腸全長(zhǎng)；將胃剪開，置于30 ml 0.5 mol/L 氫氧化鈉溶液中，洗下內(nèi)容物，取5 ml離心（3000 r/min，10 min），取上清，560 nm處測(cè)吸光度（A）。按下式計(jì)算胃酚紅排空率（gastric emptying rate，GER）和小腸推進(jìn)率（small intestinal propulsiverate，SIPR）。

式中A0為0.25 ml 0.04 %酚紅溶液加入30 ml 0.5 mol/L氫氧化鈉溶液中所測(cè)得的吸光度。

2.3 對(duì)阿托品所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)抑制的影響

取小鼠108只，雌雄各半，隨機(jī)分為9組，分別為空白組、阿托品0.1 mg/kg模型組、莫沙必利2.14 mg/kg組、金橘水提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3個(gè)劑量組、金橘醇提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3個(gè)劑量組。各給藥組灌胃給予相應(yīng)的藥物溶液，20 ml/kg，每日1次，連續(xù)3日，空白對(duì)照組給予等容積的蒸餾水。第3日給藥前禁食12 h，給藥后1.75 h除空白組外，各組皮下注射阿托品0.1 mg/kg，15 min后灌服酚紅溶液，20 min后處死。按2.2項(xiàng)方法分別測(cè)量，計(jì)算GER和SIPR。

2.4 對(duì)新斯的明所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響

取小鼠96只，雌雄各半，隨機(jī)分為8組，分別為空白組、新斯的明0.1 mg/kg模型組、金橘水提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3個(gè)劑量組、金橘醇提液0.625，1.25，2.5 g/kg 3個(gè)劑量組。各給藥組灌胃給予相應(yīng)的藥物溶液20 ml/kg，每日1次，連續(xù)3日，空白對(duì)照組給予等容積的蒸餾水。第3日給藥前禁食12 h，給藥后1.75 h除空白組外，各組皮下注射新斯的明0.1 mg/kg，15 min后灌服酚紅溶液，20 min后處死。按2.2項(xiàng)方法分別測(cè)量，計(jì)算GER和SIPR。

2.5 統(tǒng)計(jì)分析方法

數(shù)據(jù)以表示。采用SPSS 16.0進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），并做方差齊性檢驗(yàn)。方差齊時(shí)兩兩比較采用最小顯著性差異（LSD）法，不齊時(shí)采用秩和檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)正常狀態(tài)小鼠胃排空、小腸推進(jìn)的影響

結(jié)果見表1。由表1可見，與空白組比較，金橘水提液、醇提液各劑量組的胃酚紅排空率沒有明顯變化，金橘水提液2.5 g/kg和醇提液1.25，2.5 g/kg劑量下小鼠的小腸推進(jìn)率明顯提高（P＜0.05或P＜0.01），表明金橘水提、醇提液對(duì)正常狀態(tài)小鼠胃排空功能無明顯影響，但能加快正常狀態(tài)小鼠的小腸推進(jìn)。相同劑量下水提液和醇提液對(duì)正常小鼠胃酚紅排空率和小腸推進(jìn)率影響的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 金橘提取物對(duì)正常狀態(tài)小鼠胃排空、小腸推進(jìn)的影響（，n=12）

表1 金橘提取物對(duì)正常狀態(tài)小鼠胃排空、小腸推進(jìn)的影響（，n=12）

注：**P＜0.01，*P＜0.05 vs 空白組

組別 劑量/g·kg-1 GER/% SIPR/%空白組 - 61.37±9.03 49.42±6.49莫沙必利 2.14×10-3 73.52±7.18** 63.23±8.35**金橘水提液0.625 62.47±7.45 52.24±6.20 1.25 61.80±8.71 54.72±10.40 2.5 63.49±11.15 57.58±7.69*金橘醇提液0.625 59.14±8.98 52.36±5.23 1.25 63.81±6.45 57.53±9.83*2.5 62.81±10.86 61.04±5.64**

3.2 對(duì)阿托品所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)抑制的影響

結(jié)果見表2。由表2可見，與模型組比較，金橘水提液和醇提液1.25，2.5 g/kg劑量下小鼠的胃酚紅排空率明顯提高（P＜0.05或P＜0.01），金橘水提液2.5 g/kg和醇提液1.25，2.5 g/kg劑量下小鼠的小腸推進(jìn)率明顯提高（P＜0.01），表明金橘水提、醇提液均可對(duì)抗阿托品所致小鼠胃排空的抑制和小腸推進(jìn)的抑制。相同劑量（1.25 g/kg）下水提液和醇提液對(duì)阿托品所致小鼠胃酚紅排空率的影響及相同劑量下水提液和醇提液對(duì)阿托品所致小鼠小腸推進(jìn)率的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 金橘提取物對(duì)阿托品所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)抑制的影響（，n=12）

表2 金橘提取物對(duì)阿托品所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)抑制的影響（，n=12）

注：*P＜0.05，**P＜0.01 vs 模型組；?P＜0.05 vs 金橘水提液1.25 g/kg劑量組；?P＜0.05 vs 金橘水提液2.5 g/kg劑量組

組別 劑量/g·kg-1 GER/% SIPR/%空白組 - 63.14±10.45**50.96±7.88**阿托品 1×10-4 46.96±7.67 38.41±7.91阿托品+莫沙必利 2.14×10-365.33±8.38** 51.52±6.62**阿托品+金橘水提液0.625 51.40±11.12 39.86±9.06 1.25 55.81±11.70* 43.00±9.76 2.5 62.28±7.64** 47.91±6.02**阿托品+金橘醇提液0.625 53.26±12.60 40.32±10.02 1.25 64.33±12.61**? 49.98±10.70**?2.5 68.57±8.24** 55.23±7.98**?

3.3 對(duì)新斯的明所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響

結(jié)果見表3。與模型組比較，金橘醇提液2.5 g/kg劑量下小鼠的胃酚紅排空率明顯降低（P＜0.05），金橘水提液2.5 g/kg和醇提液1.25，2.5 g/kg劑量下小鼠的小腸推進(jìn)率明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），表明金橘醇提液可拮抗新斯的明所致的小鼠胃排空加快，水提和醇提液均可拮抗新斯的明所致的小鼠小腸推進(jìn)加快。相同劑量下水提液和醇提液對(duì)新斯的明所致小鼠胃酚紅排空率和小腸推進(jìn)率的影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 金橘提取物對(duì)新斯的明所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響（，n=12）

表3 金橘提取物對(duì)新斯的明所致小鼠胃排空、小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響（，n=12）

注：*P＜0.05，**P＜0.01 vs 模型組

組別 劑量/g·kg-1 GER/% SIPR/%空白組 - 54.18±8.95** 49.06±9.67**新斯的明 1×10-4 74.44±11.61 75.06±12.27新斯的明+金橘水提液0.625 70.87±11.79 71.76±12.60 1.25 67.59±8.31 63.05±13.43*2.5 65.61±10.79* 61.99±12.01**0.625 70.92±11.86 70.01±12.49 1.25 69.39±9.47 65.97±11.24 2.5 66.61±10.11 64.20±13.68*新斯的明+金橘醇提液

4 討論

理氣藥對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能有調(diào)節(jié)作用[8]，表現(xiàn)為興奮、抑制或興奮和抑制雙向作用。胃腸運(yùn)動(dòng)受神經(jīng)系統(tǒng)和體液因素的調(diào)控，與胃腸神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)、胃腸激素很多，各遞質(zhì)與其受體結(jié)合而發(fā)揮不同的生理功能，因此本實(shí)驗(yàn)以莫沙必利為陽(yáng)性藥物，研究金橘水提、醇提液分別對(duì)正常狀態(tài)、阿托品負(fù)荷模型和新斯的明負(fù)荷模型小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響。

本實(shí)驗(yàn)以胃酚紅排空率和小腸推進(jìn)率為指標(biāo)，研究金橘水提、醇提液對(duì)3種不同狀態(tài)下小鼠胃腸道運(yùn)動(dòng)的影響。結(jié)果顯示，金橘水提、醇提液均對(duì)正常狀態(tài)小鼠胃排空功能無明顯影響，但均能加快正常狀態(tài)小鼠小腸推進(jìn)功能；二者均可顯著拮抗阿托品所致的抑制作用；二者均對(duì)新斯的明所致亢進(jìn)有拮抗作用。相同劑量下對(duì)阿托品所致小鼠胃酚紅排空率和小腸推進(jìn)率的影響，醇提液的效果優(yōu)于水提液。結(jié)果顯示金橘提取物對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)具有雙向調(diào)節(jié)作用，這種作用可能與膽堿能系統(tǒng)有關(guān)，而與腎上腺素能系統(tǒng)和其他胃腸激素有無關(guān)系還有待于進(jìn)一步的研究。