氣相色譜-質譜聯用分析八仙湯及其組方藥材揮發性成分

蔣燕霞，林榜建，徐瑞超，肖禮娥，唐富麗，董自亮

（太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶 408099）

八仙湯出自《圣濟總錄》卷六十五，由桑白皮，桔梗，麻黃，茯苓，柴胡，陳皮，苦杏仁、馬兜鈴8味藥材組成，主治久患氣嗽，發即奔喘，坐臥不安，喉中氣欲絕。目前對于八仙湯中單味藥的成分和藥理活性研究較多，而對于整方的研究特別是物質基礎和配伍效應研究則無相關報道。

為探討八仙湯組方藥材中揮發性成分在組方中的作用，尋找八仙湯作用的物質基礎，本研究采用氣相色譜-質譜聯用技術（GC-MS）對八仙湯中揮發性成分進行分析研究，并模擬相同條件對各單味藥材進行分析比較，以為八仙湯的物質基礎與配伍機理研究奠定基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 7890A-5975C氣相色譜-質譜聯用儀，包括Agilent GC-MSD工作站，HP型毛細管柱（250μm×30 m，0.25 μm）（美國Agilent Technologies公司）； KQ2200E型超聲清洗器（昆山超聲儀器公司）；BP211D 型電子分析天平（梅特勒-托利多）；ALPHAi-4LSC冷凍干燥機（德國Christ）。

1.2 材料

藥材購于重慶桐君閣大藥房，經成都中醫藥大學王光志教授鑒定為正品。其中麻黃為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinicaStapf的干燥根和根莖，苦杏仁為薔薇科植物山杏Prunus armemacaL.var.ansu Maxim.的干燥成熟種子，陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulataBlanco的干燥成熟果皮，桑白皮為桑科植物桑Morus albaL.的干燥根皮，茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.) Wolf的干燥菌核，其他藥味均符合《中國藥典》2015年版一部項下要求。所用試劑均為分析純，水為三重水。

2 方法

2.1 GC-MS分析

參考文獻[1-4]，并進行了改進，確定了以下分析條件。

色譜條件：色譜柱為HP 型毛細管柱（250μm×30 m，0.25 μm）；進樣口溫度200 ℃；柱溫為程序升溫：初始溫度60 ℃，以4 ℃/min的速率升溫至150 ℃，保持3 min，再以25 ℃/min的速率升溫至200 ℃，保持10 min；分流比40:1；進樣量1μl；載氣為氦氣（純度＞ 99.99 %），流速為1.0 ml/min。分析時間：42 min。

質譜條件：電子轟擊（EI）離子源，電離電壓70 eV，離子源溫度220 ℃，加速電壓200 eV；掃描質量m/z35～550。

2.2 揮發油的提取

取總處方飲片180 g，置圓底燒瓶中，加入10倍量水，浸泡30 min，采用水蒸氣蒸餾法提取8 h，得到揮發油，無水Na2SO4干燥，封裝，備用，得油率為0.10 %（v/w）。同法制得麻黃、苦杏仁、陳皮、桑白皮單味藥材揮發油。

3 結果

圖1 八仙湯揮發油總離子流圖譜

圖2 麻黃揮發油總離子流圖譜

圖3 苦杏仁揮發油總離子流圖譜

圖4 陳皮揮發油總離子流圖譜

圖5 桑白皮揮發油總離子流圖譜

按上述分析條件，對各揮發油進行GC-MS分析，總離子流圖見圖1～5，以峰面積歸一化法計算各揮發油中各組分的相對含量，采用化學工作站對各質譜圖的色譜峰進行NIST標準譜庫檢索，選擇匹配度最高的化學結構作為最佳鑒定結果，從而確定各揮發性成分的結構，結果見表1。

表1 八仙湯與麻黃、苦杏仁、陳皮、桑白皮揮發油的化學成分

注：“-”未檢測到

經分析，初步指認了70種化合物，經面積歸一化計算占總揮發油的96.66 %，其中主要含有：苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、α-松油醇，在八仙湯中分別占揮發油含量的43.03 %，28.35 %，2.82 %，2.25 %，其他還有烯類、烷類等物質。八仙湯揮發油中歸屬于麻黃揮發油的化學成分有26個，如苯甲醛、D-檸檬烯、四甲基吡嗪等，歸屬于苦杏仁揮發油的化學成分有20個，如苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、麝香草酚等，歸屬于陳皮揮發油的化學成分有25個，如(1R)-2,6,6-三甲基[3.1.1]庚-2-烯、β-月桂烯、D-檸檬烯、γ-松油烯等，歸屬于桑白皮揮發油的化學成分有3個，如苯甲醛、D-檸檬烯、十八甲基環壬硅氧烷等。

Hexana、4-亞甲基-1-（1 -甲基乙基）環己烯、氧化檸檬烯等在八仙湯揮發油中發現而在單味藥材中未檢測到；而單味藥材揮發性成分化學信號只有部分在八仙湯揮發油中檢測到，且在量上亦有一定的變化。由此可見，富含揮發性成分藥材在組方的煎湯過程中可能存在著一系列成分間的相互作用與轉化，其轉化過程及轉化產物及含不同類型揮發性成分水煎煮和蒸餾過程中在媒介中分配系數的不同、油/水兩相間飽和曲線與動態平衡的關系等改變可能導致復方揮發油成分的組成與量的變化，從而影響復方整體治療功效。

4 討論

本實驗采用GC-MS首次對八仙湯及其單味藥材中揮發油類成分進行了鑒定和分析，初步指認了苯甲醛、D-檸檬烯、γ-松油烯、α-松油醇等70種成分，占揮發油總量的96.66 %。而八仙湯中其他未歸屬的揮發油，可能來自方中其他藥材，也有可能是藥材之間的相互配伍產生的新的揮發油成分，有待于進一步考察。主要成分苯甲醛、D-檸檬烯等具有較強的抑菌及抗癌作用，初步揭示了揮發油類的藥效作用物質，為揭示其效應物質基礎和配伍機理奠定基礎，也為后期的制劑研究提供基礎。