原子吸收分光光度法間接測(cè)定甘氨酸的研究

王傳嶺，于 敏，張雅倩

(嘉應(yīng)學(xué)院 醫(yī)學(xué)院,廣東 梅州 514000)

甘氨酸又名氨基乙酸，是結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的氨基酸，他是人體半必需氨基酸，是人體抗氧化劑谷胱甘肽的組成氨基酸，可用于醫(yī)藥、食品添加劑，但是，當(dāng)人體攝入量過多時(shí)，會(huì)破壞人體對(duì)氨基酸的吸收平衡，影響健康[1]。甘氨酸的測(cè)定方法有離子色譜法[2]、氣相色譜法[3]、液相色譜法[4]、毛細(xì)管電泳法[5]等。

采用原子吸收分光光度法間接測(cè)定氨基酸曾有報(bào)道，如孫智敏等[6]利用磷酸銅懸浮液與氨基酸反應(yīng)，形成銅配合物，測(cè)定谷氨酸的含量，胡寶祥[7]等利用硫化鋅懸浮液與氨基酸反應(yīng)，形成鋅配合物，測(cè)定色氨酸含量，等等，本文采用氫氧化銅懸浮液與甘氨酸反應(yīng)，間接測(cè)定甘氨酸含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

A3原子吸收分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，MIMG-CHE24MV超純水機(jī)(法國(guó)Merck Millipore公司)；

甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取分析純甘氨酸0.100 g，溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容，得到濃度為1 mg/mL的甘氨酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液。氫氧化鈉、鹽酸、氫氧化銅等試劑均為分析純。

1.2 儀器工作條件

波長(zhǎng)：324.7 nm；光譜寬帶：0.4 nm；工作燈電流：3.0 mA；負(fù)高壓:300.0 V；燃燒器高度5mm。

1.3 方法原理

利用甘氨酸在一定條件下可以與氫氧化銅解離的銅離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，定量的形成配合物，將溶液中多余的氫氧化銅沉淀分離后，測(cè)定上層清液中的總銅含量，即可間接測(cè)定甘氨酸的含量。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

移取一定量的甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入一定量氫氧化銅懸浮液，混合均勻后，室溫下振蕩反應(yīng)10min，然后離心分離，吸取上層清液，在原子吸收分光光度計(jì)上，噴入空氣-乙炔火焰，在324.7nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 氫氧化銅用量選擇

氫氧化銅的用量對(duì)吸光度有一定的影響，結(jié)果如圖1所示，可以看出，隨著氫氧化銅的用量增加，參與絡(luò)合反應(yīng)的銅離子也增加，甘氨酸能與氫氧化銅解離的銅離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，故銅離子的吸光度呈上升趨勢(shì)。氫氧化銅的用量超過10 mg時(shí)，測(cè)得銅離子的吸光度基本不變，原因可能是當(dāng)氫氧化銅的用量超過10 mg時(shí)，此時(shí)的絡(luò)合反應(yīng)已經(jīng)到達(dá)飽和狀態(tài)，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇氫氧化銅的用量為10 mg。

圖1 氫氧化銅用量與吸光度的關(guān)系

2.2 工作曲線選擇

恒定氫氧化銅的用量，其它條件不變，隨著甘氨酸溶液濃度的增加，甘氨酸能夠絡(luò)合更多的銅離子，因此測(cè)得銅的吸光度也隨之增加。當(dāng)甘氨酸溶液濃度為0～10 μg/mL時(shí)，甘氨酸與氫氧化銅有線性關(guān)系，但斜率太低，甘氨酸溶液濃度在10～100 μg/mL和100 ～600μg/mL的范圍內(nèi)，有明顯的線性關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)的選擇甘氨酸的濃度為10～100 μg/mL進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)，在該濃度范圍內(nèi)，線性回歸方程為：A=0.0067C+0.0391，其中，A為吸光度，C為甘氨酸的濃度μg/mL， 相關(guān)系數(shù)R2=0.988，結(jié)果見圖2。

圖2 甘氨酸濃度與吸光度關(guān)系

2.3 pH值的影響

用HCl和NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液的pH值，在不同pH值測(cè)定甘氨酸濃度與吸光度的關(guān)系，結(jié)果如圖3、表1所示。在酸性條件下，線性關(guān)系均低于0.6，原因在于氫氧化銅會(huì)與酸發(fā)生中和反應(yīng)，溶解度增大，導(dǎo)致線性關(guān)系不明顯；在堿性條件下，隨著pH值升高，線性關(guān)系越來越差，且吸光度越來越小，這可能是因?yàn)樵趬A性條件下，絡(luò)合-沉淀平衡向著沉淀反應(yīng)方向進(jìn)行，因此甘氨酸合銅離子濃度降低，吸光度減小，綜合比較， pH值=7時(shí)，更加有利于間接測(cè)定甘氨酸含量。

圖3 pH值對(duì)吸光度的影響

表1 不同pH值下甘氨酸與氫氧化銅反應(yīng)的線性情況

表1(續(xù))

2.4 共存離子的影響

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

移取10mL 100μg/mL的甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)8次，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%，精密度良好。

2.6 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

配制不同濃度的甘氨酸溶液為測(cè)試樣品，分別向其中加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，計(jì)算回收率，回收率在90.7%～107.4%之間。

3 結(jié)論

本文利用氫氧化銅與甘氨酸之間的絡(luò)合反應(yīng)，采用原子吸收分光光度法間接測(cè)定甘氨酸的含量，測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便，實(shí)驗(yàn)條件下，線性關(guān)系良好，精密度高，可以用于甘氨酸含量的測(cè)定。