藍靛果忍冬E8離體快繁無菌體系建立分析

王瑞琦 李金英 趙春莉 劉子平 潘珠峰

摘要：本文以吉林農業大學小漿果基地引進的藍靛果忍冬優良品種E8為研究對象，從外植體的消毒、基本培養基、不同激素等方面進行了離體組織培養研究，旨在探求最適合藍靛果忍冬組培苗離體快繁的條件，從而篩選出最利于藍靛果忍冬組培苗擴大繁殖的培養基配方，從而實現大量優質種苗快速繁殖，為保存種質資源和規模化生產奠定基礎。

關鍵詞：藍靛果忍冬E8;組織培養;離體快繁體系

基金項目：吉林省大學生創新創業訓練計劃項目——藍靛果忍冬種質資源離體快繁研究;吉林省教育廳資助項目——長白山野生藍靛果忍冬資源優良品種選育及配套栽培技術研究（合同編號：JJKH20180667KJ）

中圖分類號： S663 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼： ?A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號： ? 10.14025/j.cnki.jlny.2019.06.013

藍靛果忍冬（Loniceraedulis）又名羊奶子、黑瞎子果、山茄子等，其營養豐富，不僅可用來鮮食、加工，還可提取色素，是一種珍稀的漿果資源[1，2]。另外，其嫩枝可入藥，清熱解毒，果實富含藥用保健成分，具有極高的藥用價值。因其利用價值頗高，故有“第三代水果”之稱，應用前景較好。但對藍靛果忍冬的探究多集中在營養保健及栽培等方面上[3，4]。而關于藍靛果忍冬離體快繁方面的報道較少，而該植物實生繁殖較困難，扦插繁殖亦受外界因素影響較大，所以利用植物組織培養技術進行離體快繁是有效的繁育種苗途徑。本試驗對藍靛果忍冬E8進行了植物組織培養研究，最終建立了無菌快速繁殖體系。

1材料與方法

1.1初代無菌苗的獲得

將吉林農業大學果樹基地引進的藍靛果忍冬優良品種E8半木質化的枝條先進行表面清洗除塵除菌處理，然后將其置于超凈工作臺上，用0.1%的升汞溶液進行不同時間的消毒，最后無菌水沖洗至少3次以上。再用無菌濾紙吸去表面水分，在無菌紙上將外植體剪截的長度范圍是1.5～2cm，接種于事先配制好的，pH值為5.8的MS培養基中（BA2.0mg/L、IBA0.1mg/L，蔗糖和瓊脂分別為30g/L和8g/L）。試驗設10個處理，每瓶內含1個外植體，1個月前后調查統計培養物生長狀況，例如污染、死亡和成活等方面。

1.2 增殖繼代培養

本試驗設10瓶為一個處理，外植體每瓶接入3個，1個月前后統計污染、增殖及成活。篩選適宜的基本培養基種類試驗中，Murashig and Skoog Medium（MS）、1/2Murashig and Skoog Medium（1/2 MS）、GamborgB5 Medium（B5）、CHU （N6） Medium（N6），激素為2.0mg/L-16-芐氨基腺嘌呤（6-BA）和0.1 mg/L吲哚丁酸（IBA）;不同生長素對組培苗增殖的探討中，MS中加入2.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤，與不同濃度（0.05、0.1、0.2mg/L）的吲哚丁酸、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）形成處理組合;在含有6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L及0.2mg/L吲哚丁酸的MS中，添加不同濃度水平（0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L）的赤霉素（GA3）。

1.3生根培養

每個處理接種10瓶，每瓶接種1～2個無根組培苗，30d左右觀察記錄組培苗生根率及根生長情況等指標。基本培養基篩選種類設為1/2MS、MS、B5、N6，添加IBA0.6mg/L。不同激素篩選種類設為NAA、IAA和IBA，濃度設為0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L。

1.4培養條件

培養室環境的溫度為（25±1）℃，光照的時間為12h/d，光照強度2000 Lx左右。

2 結果與分析

2.1 E8初代無菌苗的獲得

外植體消毒時間長短對無菌苗的獲得影響差異較大。時間過短（4～6min），外植體污染率較高。培養過程中發現：消毒時間與污染率呈負相關，但與死亡率呈正相關。因此，時間要長短適宜才能成功獲得初代培養物。帶頂芽嫩梢消毒8min、無頂芽莖段10min較好。

2.2 E8組培苗的增殖

研究發現，B5和N6不適于組培苗的增殖，而在1/2MS培養基中的總體狀況稍好，而組培苗在MS培養基中增殖和生長狀況最優。

不同激素對組培苗增殖的影響存在差異。NAA利于愈傷組織形成，而對組培苗的進一步分化增殖極為不利。從增殖倍數與長勢兩方面綜合考慮，IAA的適宜濃度是0.1mg/L。IBA對增殖起到的促進作用相對較明顯。

在分析GA3對組培苗增殖影響的結果時顯示，當GA3的濃度為0.40mg/L時，其增殖倍數較高，芽苗總體長勢較優。因此，E8組培苗適宜的增殖配方為MS培養基中添加適宜濃度的赤霉素（0.4mg/L）、6-BA（2.0mg/L）和IBA（0.2mg/L）。

2.3 E8組培苗瓶內生根

在1/2MS培養基中的組培苗生根效果最好，在MS和B5培養基中生根效果欠佳，而在N6中表現最差。組培苗在含有不同濃度NAA中的總體表現是苗基部形成愈傷組織，不利于生根培養，吲哚乙酸對各種質的組培苗生根誘導起到了一定積極影響，但生根率相對低些，IBA濃度為1.0mg/L時，生根率可達100%，因此，生根誘導培養的適宜條件為1/2MS培養基+1.0mg/L IBA。

3結論

本研究經過近一年的試驗，成功建立了藍靛果忍冬E8的離體快速繁殖體系，該試驗結果可為藍靛果忍冬優良品種工廠化快速繁育優質種苗提供科學參考。

參考文獻

[1]劉麗華，姜興明.長白山區藍靛果經濟林的營造技術[J].國土綠化，2014（07）：39.

[2]田新華，吳捷，張建瑛，等.藍靛果忍冬組織培養研究[J].林業科技，2012，37（06）：7-9.

[3]周麗萍，王化，李夢莎，等.藍靛果保健功能研究進展[J].國土與自然資源研究，2016（05）：92-95.

[4]王柏林.藍靛果豐產栽培技術[J].農村實用科技信息，2014（11）：7.

作者簡介：王瑞琦，本科生在讀，研究方向：果樹栽培。

通訊作者：李金英，博士，講師，研究方向：植物組織培養及資源。