血清miR-145表達與乳腺癌患者的相關性分析

卜易瑩 韓東興 劉邦令

摘要：目的? 探討乳腺癌骨轉移患者血清miR-145的表達水平及其臨床意義。方法? 采集上海市建工醫院于2014年8月～2017年8月收治的160例乳腺癌患者的血清樣本，其中乳腺癌骨轉移患者與非骨轉移患者各80例。采用實時熒光定量PCR檢測血清樣本中miR-145的表達水平，并分析其與有無骨轉移，骨轉移程度、骨痛程度的相關關系。結果? 骨轉移患者血清中miR-145的相對表達量低于乳腺癌非骨轉移患者[（1.22±0.24）vs（2.57±0.38） ]，差異有統計學意義（P<0.05）;且miR-145的相對表達量與患者的骨轉移程度（r=-0.873）、骨痛程度（r=-0.685）呈負相關，差異有統計學意義（P<0.05）。結論? 乳腺癌骨轉移患者血清miR-145的表達量明顯降低，且與病情呈負相關，miR-145可作為診斷及病情評估指標。

關鍵詞：miR-145;乳腺癌;骨轉移

中圖分類號：R737.9? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.07.002

文章編號：1006-1959（2019）07-0005-03

Abstract：Objective? To investigate the expression level of serum miR-145 in patients with breast cancer and its clinical significance. Methods? Serum samples of 160 breast cancer patients admitted to Shanghai Construction Engineering Hospital from August 2014 to August 2017 were collected， including 80 patients with breast cancer metastasis and non-bone metastasis. Real-time quantitative PCR was used to detect the expression level of miR-145 in serum samples， and its correlation with bone metastasis， bone metastasis and bone pain was analyzed. Results? The relative expression of miR-145 in patients with bone metastases was lower than that in patients with non-bone metastases [（1.22±0.24） vs （2.57±0.38）]， the difference was statistically significant （P<0.05）; and miR-145 The relative expression was negatively correlated with the degree of bone metastasis （r=-0.873） and the degree of bone pain （r=-0.685）， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion? The expression of serum miR-145 is significantly decreased in patients with bone metastasis from breast cancer， and it is negatively correlated with the condition. miR-145 can be used as a diagnostic and disease assessment index.

Key words：miR-145;Breast cancer;Bone metastasis

乳腺癌（breast cancer）是發生于乳腺上皮組織的惡性腫瘤，是目前全球女性最常見的惡性腫瘤之一，占女性腫瘤總發病率的30%[1，2]。盡管隨著乳腺癌根治術技術的不斷提高及各種靶向性藥物的應用，乳腺癌患者的生存率及生活質量都有了顯著提高，但其復發、轉移仍是影響患者預后的主要因素。其中尤以骨轉移最為常見，其發生率遠高于肺、肝轉移。有研究表明以骨轉移為首發癥狀患者占27%～50%，乳腺癌患者術后復發性患者2年內發生骨轉移的概率高達63.4%[3，4]，骨轉移早期癥狀不典型，診斷困難，發現時多已喪失最佳治療時機，且病情進展迅速，其5年生存率僅有20%[5]。因此，乳腺癌骨轉移的實驗室生化檢查有極大的臨床意義，是近年來的研究熱點。微小RNA（miR）是一類高度保守的由18～22個核苷酸組成的單鏈非編碼RNA。其經由Dicer酶完成miR前體到成熟體的轉化[6，7]。miR通過結合于mRNA的3'末端的非編碼區從而抑制靶mRNA的翻譯發揮調控靶基因表達的作用[8]。差異性表達的mRNA廣泛參與腫瘤的發生、發展，因此特異性表達mRNA也被認為是腫瘤診斷、治療的新靶點。本研究探討了miR-145在乳腺癌骨轉移患者的表達量，以期為乳腺癌骨轉移的診斷及治療靶點的篩查提供新的思路。

1資料與方法

1.1一般資料? 選取2014年8月～2017年8月于上海市建工醫院收治的160例乳腺癌患者，均為女性，按照是否存在骨轉移分為乳腺癌骨轉移組及乳腺癌非骨轉移組，各80例。其中乳腺癌骨轉移組，年齡31～74歲，平均年齡（52.57±6.36）歲，病程9個月～9年6個月，平均病程（5.20±2.61）年;乳腺癌非骨轉移組，年齡32～77歲，平均年齡（57.70±5.25）歲，病程7個月～9年3個月，平均病程（4.28±3.66）年。納入的所有患者原發灶均經過穿刺活檢或病理切片檢查明確為乳腺癌，骨轉移病灶經計算機斷層掃描、核磁共振成像或放射性核素掃描確認至少有1處轉移灶。本研究經醫院倫理委員會審批通過，患者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1標本采集? 所有血清標本均于患者明確診斷后未行手術治療、放化療、內分泌治療之前采集。使用不含抗凝劑的真空采血管采集 兩組患者外周靜脈血5 ml，于4℃下2500 r/min 離心15 min，取上層血清液移至不含RNA酶的凍存管中，置入-80℃冰箱保存。

1.2.2 RNA提取與miR-145實時定量PCR（qPCR）檢測? 血清樣本中總RNA的提取采用Trizol試劑按操作說明書提取，采用Nano-Drop 2000檢測提取RNA的濃度并調節濃度為200 ng/μL，取2 μL按照PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser（Takara）反轉錄試劑盒將mRNA反轉錄為cDNA。每個樣本取2 μg，qPCR采用SYBR法檢測，反應體系按上海生博生物公司mRNA熒光定量試劑盒操作規定進行操作，qPCR擴增反應條件：94℃ 10 min預變性， 94℃ 30 s變性，60℃ 1 min退火，共45個循環。將cDNA于ABI Prism7300型實時定量PCR儀進行qPCR檢測。miR-145上游引物：5'-GTCCAGTTTTCCCAGGAATCCCT-3'，下游引物：5'-GCTGTCAACATACGCTACGTAACG-3'。以U6為miR-145的內參基因，所有反應均設立3個復孔，采用2-Ct計算相對表達量。

1.3觀察指標及評價標準? 比較兩組miR-145相對表達量，分析其與有無骨轉移，骨轉移程度、骨痛程度的相關關系。采用疼痛視覺模擬評分（VAS評分）評價骨痛程度，按疼痛嚴重程度分組，0～3分為輕度組、4～6分為中度組、7～10分為重度組。采用Soloway分級標準評價腫瘤轉移程度及CT、MRI、PET-CT的檢查結果所顯示的骨轉移病灶數量不同，1～6個轉移灶為1級、7～20個轉移灶為2級、>20個轉移灶為3級。所有患者均經過12～36個月隨訪觀察。

1.4統計學分析? 采用SPSS19.0對數據進行統計分析。計量資料以（x±s）表示，采用獨立樣本t檢驗;組間比較采用單因素方差分析，相關性分析采用Spearman分析。以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2結果

2.1 miR-145在乳腺癌骨轉移與非骨轉移患者血清樣本中的差異表達? qPCR結果顯示，miR-145在兩組患者血清樣本中均有表達，乳腺癌骨轉移組患者血清miR-145相對表達量為（1.22±0.24）低于乳腺癌非骨轉移組的（2.57±0.38），差異有統計學意義（t=10.96，P=0.02）。

2.2 miR-145相對表達量與骨轉移患者骨痛程度及骨轉移程度的相關性分析? 經Spearman相關性分析發現，miR-145與骨轉移患者的骨痛程度及骨轉移程度呈負相關，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

3討論

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，在我國每年有近17萬女性罹患乳腺癌。乳腺癌骨轉移是乳腺癌最常見的轉移灶。乳腺癌骨轉移會導致病理性骨折、劇烈骨痛、神經功能障礙嚴重影響生活質量，而其早期癥狀往往不明顯，一旦出現上述癥狀則多為疾病中晚期，臨床治療效果不佳。尋找一種簡單有效、且特異性高的實驗室檢查方法對乳腺癌骨轉移患者的早期篩查有重要的臨床意義。Matamala N等[9]研究表明mRNA不僅僅在組織細胞中，而且在血清中也能穩定存在。血清標本比較容易獲得且近年來qPCR技術的日臻成熟，這就為利用mRNA表達篩查診斷乳腺癌骨轉移提供了比較可靠的技術路線。

Chang Y等[10]研究表明miR-145可通過調控MAP3K1來抑制非小細胞性肺癌的轉化進程。Sheng N等[11]研究顯示miR-145表達可以抑制結腸癌細胞的侵襲與遷移，其在結腸癌細胞中的表達下調。以上研究表明miR-145在惡性腫瘤的進程中可以發揮抑制的作用，這也與本實驗的研究結果一致。本研究結果顯示乳腺癌骨轉移患者血清中miR-145相對表達量低于非骨轉移患者，差異有統計學意義（P<0.05）;且miR-145相對表達量與乳腺癌骨轉移患者的骨轉移程度、骨痛程度呈負相關，miR-145相對表達量越低，患者的骨痛明顯，患者骨轉移程度越高，差異有統計學意義（P<0.05）。提示miR-145可能參與了乳腺癌骨轉移相關的生物學進程，包含miR-145在內的miRNA家族參與多種生物學進程，包括細胞的增殖、定向分化、凋亡等，其調控及表達異常均可導致細胞的病理進程。生物信息學研究發現SOX11可能是miR-145作用的靶基因。SOX家族是在細胞生長中起關鍵調節作用的一組轉錄因子，SOX11在抑癌及促癌中的作用已被廣泛研究[12，13]。但miR-145通過靶向調節SOX11及其下游關于腫瘤骨轉移的具體調節機制仍有待進一步的實驗研究。

綜上所述，miR-145在在乳腺癌骨轉移患者血清中的相對表達量相較于非骨轉移患者顯著下調，且其下調程度與骨痛程度及轉移程度均呈相關性，miR-145可作為乳腺癌骨轉移的潛在診斷與篩查方法。

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收稿日期：2019-2-18;修回日期：2019-2-28

編輯/杜帆