2個非血緣關系家系的3例CPHD的PROP1基因缺失研究

張曉妍

關鍵詞：垂體激素缺乏癥;PROP1;生長激素;促甲狀腺激素;催乳素

中圖分類號：R730? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：B? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.07.063

文章編號：1006-1959（2019）07-0191-02

垂體激素缺乏癥（combined pituitary hormone deficiency，CPHD）在臨床主要是由于外傷、嚴重缺氧、手術期間損傷以及慢性疾病所造成的垂體活性抑制性疾病[1]。從生物學角度分析[2]，人體的垂體組織是由口腔頂部外胚層發育而來，一般在患者的胚胎發育第9天，形成垂體基板，同時隨著口腔外胚層的內陷，逐步形成垂體囊原基，同時，在胚胎發育第12天，囊原基閉合從口腔外胚層進行分離，通過各種轉錄因子和信號通道在患者的垂體背部形成梯度分布，最終分化為多個細胞體系[3]。在近年來的研究中發現[4]，垂體特異性轉錄因子祖先蛋白（Prophet of Pit-1，PROP1）缺陷是該疾病在人群中最為常見的病因之一，且在家族遺傳性垂體激素缺乏癥患者的檢出率最高。PROP1基因在胚胎發育的不同時期通過對細胞出現的時間和空間進行調控，最終促使其分化為垂體激素分泌細胞[5]。而人類的PROP1基因主要是由3個外顯子以及2個內顯子組成，由上述外顯子和內顯子共同組成人體的垂體分泌細胞結構域，當人提的該結構域發生突變或者缺陷時，則會導致機體生長激素（GH）、促甲狀腺激素（TSH）以及催乳素（PRL）的分泌異常或缺乏，以上生長發育的重要激素的缺乏在不同的生長發育階段表現為嚴重的年齡差異，80%的患者可表現為生長發育遲緩[6]，青春期腎上腺皮質功能表現為進行性加重。本研究將通過2個非血緣關系家系的3例CPHD的PROP1基因缺失研究，為臨床提供科學依據。

1 臨床資料

研究對象為3例腎上腺激素缺乏患者，女性患者2例，男性患者1例，其中2例女性患者的就診年齡分別為15歲、16歲，男性患者就診年齡為22歲。為研究方便，將以上患者按照年齡大小依次編號為A、B、C，其中，A、B患者為單卵雙生，于3歲發現身材矮小，生長速度緩慢，其生長速度平均為1～2 cm/年，剖腹產生產，生產過程中未見宮內窘迫以及嚴重缺氧，父母存在近親結婚史，父母身高及智力正常，A、B 2例患者經血液檢查，均存在血清甲狀腺激素、促甲狀腺激素、性激素以及促腎上腺皮質激素分泌降低等現象，經骨齡測定，2例患者的骨齡均為3.5歲，C患者為男性，于7歲發現生長發育遲緩，生長發育遲緩，年平均生長速度為2～3 cm，患者足月生產，生產過程中均無窒息、窘迫等疾病史，父母近親結婚，性功能發育遲緩，男性體征不明顯，患者經血液檢查，患者的甲狀腺功能異常，生長激素正常，性激素分泌降低，且患者的骨齡測定顯示，患者的骨齡測定為10歲。3例患者經生長激素治療后，身高均升高2～3 cm，提示垂體激素、生長激素分泌異常。空腹抽取3例患者的血液5 ml，加入抗凝劑后，對患者樣品進行細胞裂解液處理，混勻，離心（3600 r/min，15 min），取下層液體加入緩沖液混勻，56 ℃水浴10 min，混勻，使用500 ml異丙醇混勻，再次離心，棄去上清液，加入500 ml乙醇溶液混勻后繼續離心，棄去上清液，干燥提取DNA，加入200 μl緩沖溶液TB，65℃加熱1 h，充分溶解DNA備檢。使用實時熒光定量PCR儀器，使用引物為5'-ACCTACACACACATTGAGAGACAG-'3進行DNA擴增[7]，同時，通過使用geneloc對患者的基因進行PROP1基因探查。使用瓊脂糖凝膠進行電泳實驗，以正常人體的靶基因作為對照，正常人體的提取DNA進行引物為5'-ACCTACACACACATTGAGAGACAG-'3，對正常人以及患者的PROP1基因的側翼進行擴增分析，擴增方法分別從5'以及3'的上游和下游進行，擴增結束以患者的相鄰序列出現“-”到“+”轉變為止。在正常人體中均發現GDB：314805STS、F4、F5、F1、F2、F3、RH102778STS、HR1、HR2、SQ1、SQ2、SQ3、SQ4、SQ5、SQ6、 SQ7、 HUMC5597STS、Q6ZTH3EXON1、SHGC-147122STS等基因片段，而在本研究患者中僅出現F5基因片段，而在SHGC-147122STS和Q6ZTH3EXON1基因片段中，PROP1基因外顯子1出現明顯擴增，患者出現基因缺失片段就在該位置，進而對SHGC-147122STS和Q6ZTH3EXON1之間的基因片段進行再次擴增，發現正常人體和3例患者的SQ2、SQ3、SQ5、SQ6、SQ7基因片段大小一致。患者的SQ1、SQ4基因片段與正常人體出現明顯的差異。3例患者的電泳結果顯示均未出現SQ1基因片段的目標條帶。A、C患者電泳結果顯示出現拷貝量較小的SQ4基因片段，而B患者電泳結果顯示未出現SQ4基因片段。根據整體的基因擴增實驗，以PROP1基因以及PROP1基因的側翼進行檢測，患者的缺失基因大小為53kb。

2討論

研究顯示，轉錄因子PROP1基因以及PROP1基因的側翼的缺失是CPHD最為常見的病因之一[9]。國外有學者對該疾病的研究中指出[10]，在對患者的集中監測中發現，患者的PROP1基因以及PROP1基因的側翼的缺失占總體患者的18.3%[11]，其中對垂體激素分泌異常家族史患者的的檢測中，PROP1基因以及PROP1基因的側翼的缺陷占比達到47.1%[12]，針對散發患者的研究中指出，PROP1基因以及PROP1基因的側翼的缺陷約站整體患者的13.2%[13]，提示垂體激素分泌異常的患者具有一定的家族遺傳傾向。