慢性乙型肝炎后肝硬化患者血清中HBV-DNA 病毒載量表達(dá)水平與肝纖維化肝纖四項(xiàng)關(guān)系的研究

魯惠

慢性乙型肝炎（chronic Hepatitis B）是嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康的重大傳染性疾病[1]。HBV的持續(xù)感染即HBV-DNA病毒載量的持續(xù)增高引起的病理?yè)p傷是導(dǎo)致肝硬化最主要原因。而肝纖四項(xiàng)即透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP）、Ⅳ型膠原（CⅣ）已被認(rèn)為是理想的診斷慢性肝病、衡量肝病患者炎癥活動(dòng)度以及纖維化嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[2，3]。因此，我們根據(jù)上述特點(diǎn)，研究鄂爾多斯地區(qū)慢性乙型肝炎后肝硬化患者血清中HBVDNA病毒載量表達(dá)水平與肝纖維化主要指標(biāo)肝纖四項(xiàng)的關(guān)系，為臨床診斷及治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象收集2013～2015年在鄂爾多斯市中心醫(yī)院住院的、確診為慢性乙型肝炎患者75例為研究對(duì)象。年齡46～65歲，平均（59.3±2.5）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：①HBsAg陽(yáng)性超過(guò)6個(gè)月以上，乙肝病毒標(biāo)志物HBsAg、HBeAg、HBcAb 陽(yáng)性，HBsAb、HBeAb 陰性，HBV-DNA定量測(cè)定陽(yáng)性。②研究對(duì)象既往半年內(nèi)未接受過(guò)任何抗病毒、腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑及降酶藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：HAV、HCV、HDV、HEV 感染以及藥物性肝炎、酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、肝癌等疾病[4]。按照HBV-DNA 病毒載量的高低分為兩組，其中≥105copies/ml 為高病毒載量組，＜105copies/ml為低病毒載量組。

1.2 試劑和儀器AutoLumo A2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀及其相關(guān)肝纖四項(xiàng)檢測(cè)配套試劑盒（HA、LN、PⅢNP、CⅣ）和標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于鄭州安圖股份有限公司（儀器編號(hào)為7011001553）；質(zhì)控品購(gòu)于美國(guó)伯樂(lè)公司；臺(tái)式離心機(jī)購(gòu)于美國(guó)貝克曼公司。HBVDNA 病毒載量檢測(cè)儀器購(gòu)自羅氏公司的LightCycler480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，試劑由湖南圣湘生物有限公司提供。

1.3 標(biāo)本采集及要求均于入院后立即按照無(wú)菌要求空腹抽取靜脈血，并將血置于黃色蓋子含有分離膠的真空采血容器中，采血后立即與抗凝劑混勻，在試管外壁貼上單據(jù)號(hào)等信息或檢驗(yàn)聯(lián)號(hào)后，放置室溫立即送檢，以5 000r/min，離心5min后取患者血清進(jìn)行肝纖四項(xiàng)及HBV-DNA病毒載量的檢測(cè)。

1.4 肝纖四項(xiàng)檢測(cè)采用AutoLumo A2000 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀分析系統(tǒng)，嚴(yán)格按照微粒子化學(xué)發(fā)光分析法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，檢測(cè)血清中HA、LN、PⅢNP、CⅣ表達(dá)水平。

1.5 HBV-DNA 病毒載量檢測(cè)采用湖南圣湘生物有限公司提供的HBV-DNA提取試劑盒及羅氏公司生產(chǎn)的LightCycler480 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 15.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，差異性比較采用t檢驗(yàn)，并進(jìn)行相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 纖維化主要指標(biāo)肝纖四項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果兩組患者肝纖四項(xiàng)結(jié)果均高于正常參考值上限（P＜0.05）。高病毒載量組明顯高于低病毒載量組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 肝纖四項(xiàng)與HBV-DNA 病毒載量相關(guān)性分析HBV-DNA病毒載量水平與血清肝纖維化主要指標(biāo)肝纖四項(xiàng)之間存在明顯相關(guān)性，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但不存在明顯直線趨勢(shì)的相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)表2。

表1 纖維化主要指標(biāo)肝纖四項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果（±s）

表1 纖維化主要指標(biāo)肝纖四項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果（±s）

肝纖四項(xiàng)（ng/ml）HA LN PⅢNP CⅣ高病毒載量組（n=37）207±60.1 272±66.5 147±38.4 260±47.5低病毒載量組（n=38）160±24.2 192±41.9 63±22.2 155±50.1正常值（ng/ml）0～120 0～130 0～15 0～95

表2 肝纖四項(xiàng)與HBV-DNA病毒載量相關(guān)性

3 討論

肝纖維化是各種急慢性肝炎的病理發(fā)展過(guò)程，部分患者還可能發(fā)展為肝硬化，甚至癌變。但是在肝硬化之前，有一個(gè)較長(zhǎng)的可逆轉(zhuǎn)的肝纖維化過(guò)程。如何及早發(fā)現(xiàn)肝纖維化，并進(jìn)行干預(yù)，從而延緩病情進(jìn)展，對(duì)各種肝炎患者的治療具有指導(dǎo)作用[5]。肝纖維化的診斷主要有肝活檢樣本的組織學(xué)檢查、影像學(xué)檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)。目前評(píng)價(jià)肝纖維化程度及其活動(dòng)度的指標(biāo)，最可靠的仍是肝活檢樣本的組織學(xué)檢查，被稱(chēng)為診斷肝纖維化的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但血清學(xué)檢測(cè)可以對(duì)肝組織纖維化不同階段做出相對(duì)準(zhǔn)確而且早期的診斷，反映肝臟纖維化的發(fā)展變化情況，也可大致反映抗纖維化治療的臨床效果。

Ⅳ型膠原（CⅣ）是最早反映肝纖維化程度的指標(biāo)；層粘連蛋白（LN）主要反映炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度及肝纖維化程度的指標(biāo)；透明質(zhì)酸（HA）主要反映肝細(xì)胞生成的纖維量及受損情況；Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP）是反映肝內(nèi)Ⅲ型膠原的合成水平的指標(biāo)，PⅢNP水平越高，肝纖維化程度越強(qiáng)[6]。因此，肝纖四項(xiàng)可從不同角度反映患者肝細(xì)胞炎癥活動(dòng)、損害程度及肝纖維化程度[7]。基于此，本研究應(yīng)用微粒子化學(xué)發(fā)光分析法對(duì)75例乙型肝炎患者進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)兩組患者所有肝纖四項(xiàng)結(jié)果均明顯高于正常參考值上線，而且高病毒載量組明顯高于低病毒載量組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示肝纖維化持續(xù)存在，而且高病毒載量的患者更易導(dǎo)致肝硬化。

同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)HBV-DNA 病毒載量水平與血清肝纖維化主要指標(biāo)肝纖四項(xiàng)之間存在明顯相關(guān)性，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但不存在明顯直線趨勢(shì)的相關(guān)關(guān)系。因此，提示抗感染的治療，降低體內(nèi)病毒的含量，有助于延緩肝纖維化的進(jìn)展甚至逆轉(zhuǎn)肝纖維化情況[8]。