續斷切制工藝的優化

李 妍， 王建科?， 王新村， 王元鎂

（1. 貴陽中醫學院， 貴州 貴陽 550025； 2. 貴州同濟堂中藥材種植有限公司， 貴州 貴陽550009）

續斷是傳統常用中藥， 首載于 《神農本草經》， 被列為上品[1］， 為川續斷科植物川續斷Dipsacus asper Wall. ex Henry 的干燥根， 在秋季采挖，除去蘆頭及須根， 清洗后用微火烘至半干， 堆積“發汗” 至內部變綠后再烘干[2］， 它含有三萜皂苷、 木通皂苷、 馬錢子苷、 多糖、 β-谷甾醇等成分， 另外其揮發油主要組成有漪羅艾菊酮、 2， 4，6-三叔丁基苯酚等[1，3-6］。 藥理研究表明， 續斷對骨組織、 生殖系統、 免疫系統、 神經系統等均有一定影響， 具有抗炎、 抗衰老、 修復肝損傷等藥理作用[7-14］。 然而， 目前續斷切制工藝尚無具體的技術參數， 導致飲片質量參差不齊， 影響臨床療效發揮及相關產業發展， 故本研究采用正交試驗優化該藥材切制工藝， 為其進一步研究奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器 UltiMate 3000 型高效液相色譜儀（美國賽默飛世爾科技公司）； TU-1810 型紫外-可見分光光度儀（北京普析通用儀器有限責任公司）；AUW220D 型全自動電子天平[島津儀器（蘇州）有限公司］； 中藥粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥 川續斷皂苷Ⅵ（批號GZDD-0006） 對照品購于貴州迪大生物科技有限責任公司。 續斷采自貴州同濟堂中藥材種植有限公司續斷種植基地（威寧縣二塘鎮梅花村）， 經貴陽中醫學院生藥教研室魏升華教授鑒定為續斷科植物川續斷Dipsacus asper Wall. ex Henry 的干燥根， 將其除去雜質， 洗凈， 潤透， 切薄片， 干燥， 篩去碎屑。 甲醇、 乙醇、 磷酸均為分析純； 甲醇、 乙腈均為色譜純； 水為純凈水，

2 方法與結果

2.1 川續斷皂苷Ⅵ含有量測定

2.1.1 色譜條件 Agilent Eclipse C18色譜柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）； 流動相乙腈-0.20%磷酸（30 ∶ 70）； 檢 測 波 長206 nm； 體 積 流 量1 mL／min； 柱溫30 ℃； 進樣量20 μL。 色譜圖見圖1。

圖1 川續斷皂苷ⅥHPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of asperosaponin Ⅵ

2.1.2 對照品溶液制備 取川續斷皂苷Ⅵ對照品適量， 甲醇稀釋成1.5 mg／mL， 精密量取1 mL 置于10 mL 量瓶中， 流動相稀釋至刻度， 搖勻，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 精密稱取藥材細粉約0.5 g， 置于50 mL 具塞錐形瓶中， 精密加入15 mL 90%甲醇， 密塞， 稱定質量， 回流提取3 次， 每次30 min， 放冷， 90% 甲醇補足減失的質量， 搖勻，濾過， 合并濾液， 精密吸取1 mL， 置于10 mL 量瓶中， 流動相稀釋至刻度， 搖勻， 0.45 μm 微孔濾膜過濾， 即得。

2.1.4 線性關系考察 精密稱取川續斷皂苷Ⅵ對照品15.05 mg， 甲醇稀釋成1.505 mg／mL， 精密吸取0.05、 0.2、 0.8、 1.2、 1.8 mL 于2 mL 量瓶中，甲醇定容， 在“2.1.1” 項色譜條件下進樣20 μL測定。 以進樣量為橫坐標（X）， 峰面積為縱坐標（Y） 進行回歸， 得方程為Y=4.616 6X ＋1.038 3（r=0.999 8）， 在0.075 3～2.709 μg 范圍內線性關系良好。

2.2 續斷總皂苷含有量測定

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取川續斷皂苷Ⅵ對照品適量， 甲醇定容至25 mL， 即得（0.226 mg／mL）。

2.2.2 供試品溶液制備 精密稱取藥材粉末約0.3 g， 加入60 mL 70% 乙醇， 超聲 （500 W、40 kHz） 50 min， 濾過， 濾液置于100 mL 量瓶中，70%乙醇定容至刻度， 搖勻， 即得。

2.2.3 顯色條件 精密吸取供試品0.3 mL 于10 mL比色管中， 沸水浴揮干溶劑， 精密加入甲醇2 mL、 濃硫酸3 mL， 密塞， 搖勻， 95 ℃恒溫水浴中加熱20 min 后， 再放入冰水浴中冷卻5 min， 搖勻， 于528 nm 波長處測定吸光度。

2.2.4 線性關系考察 精密吸取對照品溶液0.3、0.4、 0.5、 0.6、 0.7、 0.8、 0.9 mL 于具塞試管中， 隨行試劑作為空白對照， 按“2.2.3” 項下方法操作， 于528 nm 波長處測定吸光度。 以吸光度為縱坐標（A）， 進樣量為橫坐標（X） 進行回歸，得方程為A = 3.641X-0.022 6 （r = 0.999 6），在0.067 8～0.203 4 mg 范圍內線性關系良好。

2.3 水浸出物測定 參照2015 年版《中國藥典》四部水浸出物項下熱浸法測定。

2.4 醇浸出物測定 參照2015 年版《中國藥典》四部醇浸出物項下熱浸法測定， 以50%乙醇為溶劑。

2.5 切制工藝優化

2.5.1 單因素試驗 以川續斷皂苷Ⅵ、 總皂苷為評價指標， 對軟化用水量（A）、 軟化時間（B）、切制片型（C）、 干燥溫度（D） 進行考察， 發現在軟化用水量2 倍、 軟化時間4 h、 切制片型橫片、干燥溫度80 ℃條件下效果最佳。

2.5.2 正交試驗 在單因素試驗基礎上， 各因素選取3 個水平， 通過L9（34） 正交表安排試驗。 取9 份藥材， 每份1 kg， 按表1 參數設計， 加入不同用量水軟化一定時間后取出， 切制成不同片型， 于不同溫度下干燥， 得到9 份樣品， 粉碎， 過40 目篩， 測定各成分含有量， 再進行綜合評分。 根據所測成分在藥材中的重要性， 設定權重分別為川續斷皂苷Ⅵ40%、 總皂苷30%、 醇浸出物15%、 水浸出物15%， 計算公式為綜合評分=川續斷皂苷Ⅵ隸屬度×40% ＋總皂苷隸屬度×30% ＋醇浸出物隸屬度×15%＋水浸出物隸屬度×15% [隸屬度= （指標值-指標最小值） /（指標最大值-指標最小值） ］， 滿分1.00。 結果見表1， 方差分析見表2。

表1 試驗設計及結果Tab.1 Design and results of tests

表2 方差分析Tab.2 Analysis of variance

由表1 可知， 各因素對綜合評分的影響程度依次為D＞B＞C＞A， 即干燥溫度影響最大， 軟化用水量影響最小， 最優工藝為A2B3C1D2； 由表2 可知，各因素對實驗結果均無顯著性影響（P＞0.05）。 綜合各因素考慮， 最終確定最優工藝為A2B3C2D2，即用4 倍量水軟化藥材， 軟化時間6 h， 切橫片，干燥溫度70 ℃。

2.6 切制工藝比較 取藥材3 份， 每份5 kg， 分別按“1.2” 項下傳統工藝和“2.5.2” 項下優化工藝切制， 測定川續斷皂苷Ⅵ、 續斷總皂苷、 水浸出物、 醇浸出物含有量， 結果見表3 ～4。 由表可知， 優化工藝穩定可行， 測得值高于傳統工藝。

3 討論與結論

本實驗所用續斷采自種植基地， 按照傳統工藝加工， 即將新鮮藥材剪掉須根及蘆頭， 清洗干凈，濾水， 60 ℃干燥箱中減重， 堆積“發汗” 以使藥材內部變綠后再烘干。 切制時， 先用水軟化續斷，發現切制后其外表皮呈灰褐色， 而切面皮部呈墨綠色， 并且在軟化過程中出現下色現象， 是否表明某些成分有損失或變化尚需進一步研究。

表3 傳統工藝下含有量測定結果（n=3）Tab.3 Results of content determination under traditional process （n=3）

表4 優化工藝下含有量測定結果（n=3）Tab.4 Results of content determination under optimized process （n=3）

多指標綜合評價符合中藥多功效的用藥特點，也可體現中醫藥思維的整體觀念。 本研究采用該方法優化續斷切制工藝， 所得最佳條件為取烘干減重50% “發汗” 后于60 ℃下干燥的藥材， 加入4 倍量水軟化6 h， 取出， 稍潤， 橫切3 mm 厚片，70 ℃下烘干， 川續斷皂苷Ⅵ、 續斷總皂苷、 水浸出物、 醇浸出物含有量分別為7.86%、 14.08%、43.71%、 42.93%， 四者均高于傳統工藝， 可知優化工藝穩定可行， 可用于該藥材加工。