大豆種子醇溶蛋白提取及SDS-PAGE體系優化

(齊齊哈爾大學生命科學與農林學院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

醇溶蛋白是存在于植物種子中的一種儲藏蛋白，目前對于小麥、玉米、高粱等植物醇溶蛋白的提取及應用研究都有較多的報道[1-3]，但對豆類種子醇溶蛋白的相關研究較少。本實驗采用2種不同的提取體系對大豆種子醇溶蛋白進行提取，并進行了SDS-PAGE體系的建立，旨在對豆類作物醇溶蛋白的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗材料為墾農16大豆種子，市購。

1.2 實驗方法

采用2個混合提取體系提取大豆種子醇溶蛋白，每一體系均采用正交試驗，設計三水平四因素試驗(見表1)，提取大豆醇溶蛋白。提取后采用考馬斯亮藍G 250法[4]測定體系中醇溶蛋白濃度。

提取體系Ⅰ：A.55 mL乙二醇+15 mL正丙醇；B.65 mL乙二醇+15 mL正丙醇；C. 75 mL乙二醇+15 mL正丙醇，各加蒸餾水至100 mL；

提取體系Ⅱ：A.55 mL乙二醇+25 mL正丙醇、B.55 mL乙二醇+35 mL丙醇、C.55 mL乙二醇+45 mL正丙醇，各加蒸餾水至100 mL。

電泳實驗為SDS-PAGE體系[4]，濃縮膠濃度為4%，分離膠濃度為10%，上樣量為19μL。

表1 L9表

試管號固液比(g/mL)溫度(℃)時間(h)提取液濃度(%)11(1∶10)1(30)1(1)1(A)21(1∶10)2(40)2(2)2(B)31(1∶10)3(20)3(3)3(C)42(1∶15)1(30)2(2)3(C)52(1∶15)2(40)3(3)1(A)62(1∶15)3(20)1(1)2(B)73(1∶20)1(30)3(3)2(B)83(1∶20)2(40)1(1)3(C)93(1∶20)3(20)2(2)1(A)

2 結果與分析

2.1 大豆醇溶蛋白提取分析

圖1是提取體系Ⅰ提取大豆種子醇溶蛋白實驗結果，通過各因素對大豆種子醇溶蛋白提取的極差計算可知，4種因素對于提取的影響是不同的，其中對于提取有較大影響的因素是提取時間，影響較小的因素是提取溫度，固液比和提取液濃度對提取的影響相差無幾。圖2是提取體系Ⅱ各因素對大豆種子醇溶蛋白提取的極差計算，與提取體系Ⅰ相同，4個因素中同樣表現出提取時間對醇溶蛋白提取有較大影響，而溫度對于提取的影響較小。……