自制D-二聚體質控品的臨床應用

徐 洋，孫偉峰

（南京醫科大學附屬無錫人民醫院醫學檢驗科，江蘇南京 214023）

D-二聚體是來源于纖維蛋白溶解酶水解交聯纖維蛋白的降解產物，目前在各臨床實驗室已被廣泛應用，在靜脈血栓栓塞性疾病的排除診斷、彌散性血管內凝血（DIC）診斷及溶栓藥物臨床診治中的動態連續監測和效果評價方面，有較高的應用價值。雖然D-二聚體檢測在臨床上的應用快速增長，但是涉及方法學、質量控制、標準化及臨床應用中的很多相關問題值得深入探討。我院檢驗科同時檢測自制質控品與普通標本，對自制質控品的應用效果進行了評價，考察了其重復性、穩定性等質控性能，以驗證我院檢驗室自制D-二聚體質控品的差異性和穩定性，為臨床使用提供保障。

1 資料與方法

選取本科室門急診、住院患者D-二聚體檢測的剩余標本131份，根據D-二聚體檢測結果分為混合血漿高值區組（500～1050μg/L）60份和低值區組（200～500μg/L）71份兩組，分別制備兩組混合血漿。自制質控品制備完成后，將評測結果與廠家配套試劑質控品標準進行比較。

1.1 儀器和試劑 美國IL公司ACL TOP 700全自動血凝儀，D-二聚體檢測配套試劑由該公司提供。

1.2 方法 本研究中131份患者血漿D-二聚體檢測值介于200～1050μg/L（該儀器最佳試劑線性反應范圍），凝血正常，乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒均為陰性，且無溶血、脂血、黃疸。

1.2.1 自制質控品處理分裝：將混合血漿充分混勻后分裝至無菌凍存管，每支0.4ml，共制備高、低值區兩組質控品。各分裝140支左右，封蓋后直立于-20℃冰箱中冷凍貯存。待測定時取出冷凍血漿，置37℃水浴中輕輕搖動使其快速融化。

1.2.2 自制質控品的測評方法[1]： ⑴批內變異測定：在日常測定患者D-二聚體水平時，隨患者標本對20支自制D-二聚體定量質控品進行批內一次性變異測定，統計這20支自制D-二聚體定量質控品的平均值()、標準差（s）及變異系數(CV)。⑵批間變異測定及批間穩定性考核：一月內每日取出1支自制質控品，融化后與待測標本平行檢測，月末統計計算批間變異及質控品的平均值()、標準差（s）及變異系數(CV)。考核連續4個月檢測結果的穩定性，對每個月的月平均值()、月標準差（s）及累積的平均值()、標準差（s）進行統計學分析。

1.3 統計分析 采用SPSS 19.0統計軟件，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 批內變異 20支兩種不同濃度的D-二聚體自制質控品，低值血漿批內CV為3.38%，高值血漿批內CV為3.70%，提示重復性較好。見表1：

表1 20支兩種不同濃度的D-二聚體自制質控品批內CV測定結果（μg/L)

2.2 批間變異及批間穩定性連續統計4個月的每日D-二聚體檢測結果，兩種自制D-二聚體質控品每個月的批間CV值均＜5.00%，表明質控品批間變異較小。單因素方差分析結果顯示，不同月份之間比較、任一月份與累計均值比較差異均無明顯差異（P＞0.05）。見表2：

表2 兩種不同濃度D-二聚體質控品批間變異及穩定性分析（±s ，μg/L）

表2 兩種不同濃度D-二聚體質控品批間變異及穩定性分析（±s ，μg/L）

時間 低值區 高值區檢測結果 CV(%) 檢測結果 CV(%)1月（31天） 307.65±12.95 4.21 741.42±28.72 3.87 2月（28天） 307.57±15.11 4.91 744.93±30.14 4.05 3月（31天） 310.45±15.15 4.88 746.65±29.60 3.96 4月（30天） 308.07±15.01 4.87 740.77±29.21 3.94累積（120天） 308.46±14.43 4.68 743.43±29.14 3.92

2.3 與廠家提供配套的質控血漿數據作對比 美國IL公司340μg/L的質控品CV為7.70%，729μg/L的質控品CV為4.50%；本科室自制的質控品，308.46μg/L的自制質控品CV為4.68%，743.43μg/L的自制質控品CV為3.92%，低于廠家的質控品CV值，符合廠家配套的高、低質控物的精密度。

3 討論

目前，不同廠家生產的試劑中抗D-二聚體單克隆抗體存在特異性差異，原因是針對的纖維蛋白降解碎段上的位點各不相同，降解碎段的大小亦不均一[2]；此外，血凝儀免疫比濁法測定會受到乳膠顆粒特征的影響，顆粒大小不等會嚴重影響其聚集時的吸光特性，且每個廠家采用的參考測量程序和校準品溯源性的不同。因此，不同廠家的試劑測定同份血漿的D-二聚體結果也不具備可比性，無法進行連續質量控制。

目前，D-二聚體尚沒有國際約定的參考測量程序和校準品，另外市場采購的質控物的價格昂貴，質控物每瓶復溶大多只有1ml的量，限制了其在常規實驗室的推廣使用[3]。國內有關自制D-二聚體質控品的主要制備方法是從新鮮血漿制備纖維蛋白，經過尿激酶的降解作用使纖維蛋白降解成D-二聚體，然后再加上不同基質，制備成模擬血漿[4]。但上述方法操作流程繁瑣，且基質成分，如聚乙二醇衍生物等對乳膠顆粒增強免疫比濁等檢測方法有干擾作用。也有報道，醫院檢驗室將病人D-二聚體檢測后剩余的標本按濃度調配處理后分裝凍存，用于日間測定，由于混合血漿與送檢臨床標本性質較為一致，可以排除基質效應的干擾，性質相對穩定，能滿足室內質控的需要[3]。

我院為大型綜合性三甲醫院，日常D-二聚體檢測工作量大，容易收集所需要的剩余血漿，結合本院的實際工作情況，故選擇將病人D-二聚體檢測后剩余的標本用于日間測定，作為D-二聚體質控品的制備方法，并對D-二聚體的定量檢測進行質量監測，以期為開展該項目檢測室內質控提供規范化模式。本研究結果顯示，本室自制混合血漿的批內變異、批間變異及累積總變異均小于5%，且具有良好的穩定性；同時，本室自制混合血漿的檢測結果與廠家提供配套的質控血漿數據作對比，自制的混合血漿能達到廠家配套高、低質控物的精密度要求，說明本室自制的質控品能滿足日常檢測室內質控的需要。

綜上所述，將自制D-二聚體混合血漿應用于室內質控，可降低醫療成本，幫助檢驗科室實現持續的質量改進，且自制D-二聚體質控品的檢測結果穩定性好、精密度符合相關質控的規定和要求。但同時也必須意識到，雖然D-二聚體的檢測方法很多，但在沒有統一標準品的情況下，各不同分析系統測定結果之間存在顯著差異。對于新的不同定量分析系統，需要用新系統對制備的質控物重新定值后才能用于質量控制，即使應用于室間質評，也應根據檢測體系的不同嚴格分組。