脂溢性角化病病變組織NF-κB P65表達的變化及與炎癥的相關性

王 成，杜 鎮，馮世軍，王翠芹，王艷心，李保強△

（1.承德醫學院附屬醫院，河北承德 067000；2.滄州市中心醫院）

脂溢性角化病（seborrheic keratosis，SK）又稱老年疣、老年斑、基底細胞乳頭瘤，是因角質形成細胞成熟遲緩所致，具體發病機制至今不明，是一種多見于老年人的良性腫瘤，但也存在惡變的可能。NF-κB為核轉錄調節因子，有研究表明，NF-κB可通過持續活化促進腫瘤細胞增殖、減少其凋亡，NF-κB還可通過上調血管內皮生長因子促進血管新生，以及通過誘導基質金屬蛋白酶的表達提高腫瘤細胞的浸潤和轉移能力，因此，NF-κB與腫瘤的發生、發展等多個環節有關[1]。NF-κB P65作為NF-κB家族的一員，在腫瘤的發生發展過程中也發揮著重要作用，目前在多種腫瘤的研究中逐漸增多。炎癥誘發腫瘤是當今醫學前沿的重要問題，炎癥與NF-κB P65在腫瘤的研究中越來越受到重視。為此，本研究觀察了NF-κB P65及炎癥在脂溢性角化病中的變化情況，探討了二者在脂溢性角化病發生發展中的可能作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2012年-2014年本院皮膚科就診的77例脂溢性角化病患者手術切除的病變組織，其中頭面部17例、軀干42例、四肢18例，男性47例、女性30例，患者平均年齡（54.83±14.00）歲，均經病理檢查確診。以距離病變邊緣0.5cm手術切除的組織作為病變周圍組織，共77例。另選取正常皮膚組織10例，男性4例、女性6例，平均年齡（48.00±12.61）歲，為手術切除的色素痣周圍正常皮膚。所取組織均在中性甲醛中固定后常規石蠟包埋，連續切片，切片厚度5μm，用于免疫組織化學染色和HE染色。HE鏡下觀察發現77例脂溢性角化病病變組織中62例真皮內合并單一核細胞浸潤（炎癥），病變周圍組織中有13例合并炎癥。

1.2 主要試劑與設備 兔抗人NF-κB P65（M270），購自美國Bioworlde公司；即用型快捷型免疫組織化學Max VisionTM試劑盒、DAB顯色試劑盒，購于福州邁新生物技術開發有限公司。S325石蠟切片機，英國Shandon Finesse公司；Wd750ASL23微波爐，廣東格蘭仕集團公司；BX40F4顯微鏡，日本Olympus公司。

免疫組化染色結果根據Fromowitz[2]的綜合計分法進行統計，在高倍鏡下（10×40）觀察：①陽性染色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色3分；②陽性細胞百分比：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。兩項結果相加為最終結果：＜2分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+）、4～5分為中度陽性（++）、6～7分為強陽性（+++），以（+）及以上統計為陽性結果。

1.3 免疫組織化學染色及結果判斷 采用Max VisionTM免疫組織化學染色法檢測脂溢性角化病病變組織、病變周圍組織及正常皮膚NF-κB P65的表達情況。切片常規脫蠟、水化、烘片，自來水沖洗，3% H2O2室溫孵育，微波爐抗原熱修復，血清封閉，一抗4℃過夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復染。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性結果的組織切片作為陽性對照。

1.4 統計分析 數據分析采用SPSS 19.0統計軟件，率的比較采用四格表法卡方檢驗，相關性分析采用Spearman法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

77例脂溢性角化病病變組織NF-κB P65的陽性表達率為88.31%，明顯高于病變周圍組織（陽性率為14.29%）及正常皮膚組織（陽性率為0），差異有統計學意義（P＜0.05）。77例脂溢性角化病患者病變組織中伴有炎癥的百分率（80.52%）明顯高于病變周圍組織（16.88%）及正常皮膚組織（0），差異有統計學意義（P＜0.05）。Spearman相關分析顯示，脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65的表達與炎癥呈正相關關系（r=0.769，P＜0.05）。見圖1-4及附表：

附表 脂溢性角化病病變組織、病變周圍組織及正常皮膚組織NF-κB P65的陽性表達情況及伴炎癥情況

圖1 脂溢性角化病病變組織NF-κB P65的陽性表達

圖2 脂溢性角化病病變周圍組織NF-κB P65的陽性表達（×400）

圖3 正常組織NF-κB P65的陰性表達（×400）

3 討論

脂溢性角化病好發于40歲以上的人群，白種人更常見，美國人的發病率高達20%[3-4]，但具體發病機制不明。據報道[5]，脂溢性角化病與遺傳、免疫缺陷、病毒感染、紫外線照射等有關。脂溢性角化病雖然是皮膚腫瘤中常見的良性腫瘤，但近年來也有惡變的報道[6-7]。

NF-κB是一種核轉錄調節因子，可與相關基因啟動子或增強子特異性結合，轉錄調控相關靶基因，進而控制細胞的增殖、分化和凋亡等過程。NF-κB轉錄因子家族包括Rel（c-Re1）、RelA(p65)、RelB、NF-κB1(p50/p105)和NF-κB2(p52/p100)五個成員[8]，可以同源或異源二聚體的非活性形式存在于幾乎所有細胞的胞質中，其活性最強的形式通常是P50/P65兩個亞基組成的異源二聚體[9]。在某些情況下，如紫外線刺激，P65亞基可直接誘導PKCδ的表達激活JNK通路，在表皮細胞中JNK可以促進細胞增殖，而細胞增殖又對NF-κB具有激活作用，活化的NF-κB通過上調多種凋亡抑制蛋白如c-IAP1、c-IAP2等的表達，使腫瘤細胞免受凋亡[10]。還有研究表明，NF-κB還可通過抑制細胞自噬發揮抗凋亡作用[11]。目前，NF-κB P65在腫瘤中的研究逐漸受到重視，一些腫瘤，如卵巢癌、皮膚鱗狀細胞癌、彌漫大B細胞淋巴瘤、子宮內膜樣癌、結腸癌組織中NF-κB P65的表達異常增高[9、12-15]。因此，檢測NF-κB P65在脂溢性角化病中的表達情況，有助于為該病的發生、發展提供參考。

圖4 脂溢性角化病真皮淺層單一核細胞浸潤（炎癥，×100）

本研究結果顯示，脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65的陽性率為88.31%，明顯高于病變周圍組織及正常組織。脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65高表達提示，NF-κB P65可能在脂溢性角化病的發生、發展過程發揮重要作用。腫瘤的發生有多種機制參與，研究者們一直在探討炎癥與腫瘤之間的關系。KARIN等[16]的研究提示腫瘤的發生與炎癥有關，許多炎癥因子如TNF、IL-6等可激活NF-κB通路，進而促進腫瘤的發生與發展。為此，本研究亦同時觀察了脂溢性角化病病變組織并發炎癥的情況，結果顯示脂溢性角化病病變組織伴炎癥的百分率（80.52%）明顯高于病變周圍組織和正常皮膚組織，且在脂溢性角化病病變組織中NF-κB P65的陽性表達與炎癥呈正相關關系。

綜上所述，雖然脂溢性角化病的具體發病機制仍不明確，但在該病的發病過程中NF-κB P65和炎癥可能具有協同作用，二者相互促進，共同參與了脂溢性角化病的發病過程。