豬藍(lán)耳病滅活與弱毒疫苗免疫效力的比較實(shí)驗(yàn)

李文淼

大興區(qū)豬藍(lán)耳病免疫主要使用高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗（JXA1-R株）和豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株）。本實(shí)驗(yàn)選用未免疫過(guò)任何疫苗的斷奶仔豬60頭作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。實(shí)驗(yàn)豬分為3組，每組20頭;按免疫程序依次注射弱毒苗、滅活苗和生理鹽水。實(shí)驗(yàn)豬免疫后每隔半個(gè)月采樣稱重一次，共三個(gè)月。樣品采用間接ELISA的方法診斷和定量檢測(cè)豬繁殖和呼吸綜合征抗體。通結(jié)果如下：與豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗相比，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗可產(chǎn)生較好的免疫抗體滴度，且免疫抗體維持時(shí)間較長(zhǎng)。

一、材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物篩選

大興某種豬場(chǎng)3棟實(shí)驗(yàn)豬舍。

選用豬場(chǎng)自繁自養(yǎng)的長(zhǎng)白斷奶仔豬60頭，公豬17頭，母豬43頭。臨床檢查健康。均未免疫過(guò)豬藍(lán)耳病滅活疫苗，且豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)為陰性。

1.1.2實(shí)驗(yàn)疫苗

兩種疫苗均由實(shí)驗(yàn)豬場(chǎng)提供。

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株），生產(chǎn)廠家：A廠家;規(guī)格：20頭份/瓶

豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株），生產(chǎn)廠家B廠家;規(guī)格：50ml/瓶

1.1.3實(shí)驗(yàn)主要試劑

主要試劑為L(zhǎng)SI豬繁殖和呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒。來(lái)源：北京天之泰生物科技有限公司;規(guī)格：96孔板*5;產(chǎn)地：法國(guó)

1.1.4 實(shí)驗(yàn)用主要設(shè)備：

BioTek ELX800酶標(biāo)儀（產(chǎn)地：美國(guó)）

BioTek EX50洗板機(jī)（產(chǎn)地：美國(guó)）

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組

按照注射藍(lán)耳病疫苗的不同隨機(jī)分為3組，每組20頭;分別在相對(duì)隔離的環(huán)境飼養(yǎng)，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

弱毒疫苗組：公豬5頭，母豬15頭。實(shí)驗(yàn)豬注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，免疫日期為8月7日（根據(jù)免疫程序免疫，斷奶前后首免，首免后4個(gè)月加強(qiáng)免疫一次，每次免疫注射疫苗一頭份）。

滅活疫苗組：公豬5頭，母豬15頭。實(shí)驗(yàn)豬注射豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗，首次免疫日期為8月7日，二次免疫日期為9月5日（根據(jù)免疫程序免疫，斷奶前后首免，首免后4周加強(qiáng)免疫一次，每次免疫注射疫苗2ml）。

對(duì)照組：公豬7頭，母豬13頭。實(shí)驗(yàn)豬注射生理鹽水，每次免疫注射生理鹽水2ml，首次免疫日期為8月7日。

注：實(shí)驗(yàn)豬根據(jù)豬場(chǎng)實(shí)際情況按程序注射除藍(lán)耳病疫苗以外的其他疫苗。

1.2.2采血稱重計(jì)劃

首次免疫后每隔半個(gè)月采血并稱重一次，每次采血60份，每份血液樣品5ml，共檢測(cè)9次，檢測(cè)時(shí)間為三個(gè)月。

1.2.3藍(lán)耳病抗體檢測(cè)

本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)采用間接ELISA的方法檢測(cè)豬繁殖和呼吸綜合征抗體。

二、結(jié)果與分析

2.1免疫后臨床癥狀觀察

免疫后60天，有3頭實(shí)驗(yàn)豬（弱毒疫苗組1頭，滅活疫苗組2頭）再采血后出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、生長(zhǎng)減緩等情況，診斷為頻繁采血所致的應(yīng)激反應(yīng)。大部分實(shí)驗(yàn)豬在注射疫苗后的90天內(nèi)，臨床觀察健康。

2.2對(duì)實(shí)驗(yàn)豬增重的影響

免疫前分別計(jì)算每組20頭實(shí)驗(yàn)豬的平均體重：弱毒疫苗組（30日齡）的平均體重為7.4Kg;滅活疫苗組（30日齡）的平均體重為7.7Kg;對(duì)照組（30日齡）的平均體重為7.5Kg。免疫后每半個(gè)月稱重一次，計(jì)算每組的平均體重和平均日增重.

2.3藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)實(shí)驗(yàn)采樣計(jì)劃，用ELISA試劑盒對(duì)實(shí)驗(yàn)豬進(jìn)行藍(lán)耳病抗體的監(jiān)測(cè)，記錄每次檢測(cè)結(jié)果，免疫后抗體檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)、陽(yáng)性率、均值結(jié)果。

2.3.1抗體檢測(cè)陽(yáng)性頭數(shù)比較結(jié)果

結(jié)果表明：弱毒疫苗組免疫后檢測(cè)抗體陽(yáng)性個(gè)數(shù)隨時(shí)間變化逐漸升高，免疫后60天達(dá)到20頭，并持續(xù)到免疫后90天。滅活疫苗組免疫后45天檢測(cè)抗體陽(yáng)性個(gè)數(shù)到達(dá)峰值11頭，隨后出現(xiàn)下降趨勢(shì)，到免疫后90天為8頭。對(duì)照組持續(xù)為0頭。

2.3.2抗體檢測(cè)陽(yáng)性率比較結(jié)果.

結(jié)果表明：活疫苗首免后30天抗體陽(yáng)性率≥70%，免疫后60天，抗體陽(yáng)性率達(dá)到100%并持續(xù)到免疫后90天;而相同毒株的滅活疫苗首免后30天抗體陽(yáng)性率僅為30%，二免后30天抗體陽(yáng)性率僅為50%，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期，滅活疫苗免疫抗體陽(yáng)性率≤55%，免疫效果遠(yuǎn)低于活疫苗。

2.3.3抗體檢測(cè)陽(yáng)性均值比較結(jié)果

結(jié)果表明：弱毒疫苗組免疫后抗體檢測(cè)均值隨時(shí)間變化逐漸升高，到免疫后90天達(dá)到2.289。滅活疫苗組抗體檢測(cè)均值最高出現(xiàn)在免疫后60天，達(dá)到0.532，到免疫后90天下降到0.491。

弱毒疫苗組與滅活疫苗組及對(duì)照組相比，免疫后各階段的檢測(cè)抗體陽(yáng)性頭數(shù)、陽(yáng)性率和抗體均值都高于滅活疫苗組及對(duì)照組，且差異極顯著。（p<0.01）

滅活疫苗組與對(duì)照組相比，免疫后各階段的檢測(cè)抗體陽(yáng)性頭數(shù)、陽(yáng)性率和抗體均值都高于對(duì)照組，且差異極顯著（p<0.01）。

三、討論

通過(guò)豬藍(lán)耳病滅活與弱毒疫苗免疫效力的比較實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果可見(jiàn)，注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的實(shí)驗(yàn)組免疫后各階段的檢測(cè)抗體陽(yáng)性頭數(shù)、陽(yáng)性率和抗體均值都高于滅活疫苗組。

疫苗毒株經(jīng)充分致弱后，安全性和穩(wěn)定性方面都有所增強(qiáng)，在豬體內(nèi)連續(xù)6代毒力不返強(qiáng)，可安全使用。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中持續(xù)對(duì)實(shí)驗(yàn)豬進(jìn)行臨床癥狀觀察，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗、滅活疫苗和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)豬只未發(fā)生死亡，結(jié)果說(shuō)明高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗、滅活疫苗都有很好的安全性。

綜上所述，一是高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗與滅活疫苗相比，活疫苗有較高的免疫抗體滴度。二是，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗與滅活疫苗相比，活疫苗產(chǎn)生的保護(hù)抗體持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。

（作者單位：102600北京市大興區(qū)動(dòng)物疾病控制中心）