頂空氣相色譜法測定硫酸莨菪堿原料藥中有機溶劑殘留量

劉冬梅 ，郭成林 ，官倩倩 ，宋 軍 ，楊慈海

（1.湖北省荊門市食品藥品質量檢驗所，湖北 荊門 448124； 2.湖北百科亨迪藥業有限公司，湖北 荊門 448000）

莨菪堿為副交感神經抑制劑[1-2]，藥理作用類似阿托品，但水溶性不佳，為滿足制劑需求，將莨菪堿制成硫酸鹽后增加了溶解性但不改變藥理作用。硫酸莨菪堿具有止痛解痙功能，對坐骨神經痛有較好療效，有時也用于治療癲癇、暈船等。由于其生產過程中用到乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯4種有機溶劑，根據2015年版《中國藥典（四部）》通則0861殘留溶劑測定法[3]的規定，二氯甲烷為二類溶劑，限度為0.06%，乙醇、丙酮、乙酸乙酯均屬三類溶劑，限度均為0.50%。本研究中參考2015年版《中國藥典(四部)》[3]64-65和相關文獻[4-11]，采用頂空氣相色譜法測定硫酸莨菪堿中4種有機溶劑的殘留量，可為藥品生產過程的質量控制提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TRACE1300型氣相色譜儀，TRIPLUS300型自動頂空進樣器（美國Thermo Electron公司）；BP211D型電子分析天平（德國Sartorius公司）。

1.2 試藥

硫酸莨菪堿（湖北百科亨迪藥業有限公司，批號分別為 318-180406，318-170505，318-170502）；二甲基亞砜為色譜純，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 氣相色譜條件

色譜柱：DB-624氣相色譜柱（30 m×0.53 mm ×3.0 μm）；檢測器：火焰離子化檢測器，程序升溫（35 ℃保持10min，以35℃ ／min的速率升溫至180℃，保持6min；以40℃ ／min的速率升溫至200℃，保持10 min）；檢測器溫度：250 ℃；進樣器溫度：160 ℃；柱流速： 1.0mL／min；空氣流速：400 mL ／min；氫氣流速：40 mL ／min；氮氣流速：30 mL ／min；分流比：10 ∶1；頂空瓶平衡溫度：100 ℃，平衡時間 30 min；頂空瓶體積：20 mL；樣品體積：5 mL。頂空定量環體積：1 mL，加熱箱溫度：100℃，定量環溫度：110 ℃，傳輸線溫度：200 ℃；進樣時間：0.5 min，循環時間：33 min，樣品瓶平衡時間：30 min，壓力平衡時間：0.5 min。

2.2 溶液制備

稱取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯各適量，精密稱定，分置裝有二甲基亞砜的10 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，作為Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ號母液，各取適量，置同一100 mL容量瓶中，制成乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯質量濃度分別為 0.998 0，0.996 6，0.532 8，0.991 8 mg／mL的混合溶液。精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，搖勻；再精密量取10 mL，置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，作為混合對照品溶液。取Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ號母液各適量，分別置4個容量瓶中，加二甲基亞砜稀釋，制成乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯質量濃度分別為 99.80，99.88，52.80，98.52 μg ／mL 的定位溶液。取樣品約0.2 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加二甲基亞砜5 mL使溶解，作為供試品溶液。以二甲基亞砜作為空白溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.2項下對照品溶液、供試品溶液、定位溶液、空白溶液各適量，按2.1項下條件進樣測定，記錄色譜圖(見圖1)。結果空白溶液在與對照品溶液色譜圖中相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

線性關系考察：精密量取2.2項下混合對照品溶液0.5，5.0，10.0 mL，各置 50 mL 容量瓶中，加二甲基亞砜定容，量取2 mL，各置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，即得1～3號線性溶液；精密量取2.2項下混合對照品溶液 2，5，10 mL，各置 50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，即得4～6號線性溶液。精密量取1～6號線性溶液各5 mL，置頂空瓶中，按2.1項下條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸。結果見表1。

檢測限測定：分別精密量取2.2項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，并按2.1項下氣相色譜條件進樣測定，以信噪比(S／N)3∶1計算檢測限。結果見表1。

精密度試驗：取2.2項下混合對照品溶液適量，按2.1項下條件連續進樣6次，記錄峰面積。結果乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯峰面積的 RSD分別為1.1%，1.6% ，0.9% ，0.8%（n ＝ 6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效氣相色譜圖

表1 回歸方程、線性范圍與檢測限

表2 加樣回收試驗結果（n＝6）

加樣回收試驗：取已知含量樣品（批號為318-180406）0.2 g，共 6 份，分別加入低、中、高質量濃度的混合對照品溶液，依法制備供試品溶液，按2.1項下條件進樣，記錄峰面積，并計算回收率，結果見表2。

2.4 樣品中有機溶劑殘留量測定

取3批樣品各適量，分別按2.2項下方法制備供試品溶液，再按2.1項下條件進樣測定，平行測定3次，記錄峰面積，并計算含量。結果批號為 318-180406，318-170505，318-170502的樣品中乙醇含量分別為0.025% ，0.014% ，0.018% ，丙酮含量分別為 0.068% ，0.092%，0.053%，其他 2種成分未檢出。

3 討論

3.1 進樣方式選擇

硫酸莨菪堿生產過程中用到的乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯，根據2015年版《中國藥典(四部)》通則和人用藥品注冊技術規定國際協調會議(ICH)規則，應作為控制溶劑[3]105-109。二氯甲烷為二類控制溶劑，采用頂空進樣法測定可避免樣品溶液對色譜柱的污染及樣品基質的干擾，也無需對樣品進行前處理，進樣量大，可提高有機溶劑殘留量的檢測力度。

3.2 溶劑選擇

硫酸莨菪堿在二甲基亞砜中易溶，選擇二甲基亞砜有利于殘留溶劑的檢出。開始使用分析純二甲基亞砜，結果乙醇、丙酮有干擾峰存在；后又選擇了色譜純二甲基亞砜，結果消除了干擾峰。

3.3 分析條件選擇

采用程序升溫，開始以25℃ ／min的速率直接升溫到 200 ℃，保持 10 min，柱流速 2.5 mL ／min，結果乙醇和丙酮峰重疊，分離度達不到要求；后改為以35℃ ／min的速率升溫至180℃，保持6 min，再以40℃ ／min的速率升溫至 200 ℃，保持 10 min，柱流速 1.0 mL ／min，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯均能達到良好分離，重復性好，測定結果準確。

綜上所述，該方法操作簡便，專屬性、精密度好，可用于硫酸莨菪堿原料藥中有機溶劑殘留量的控制。參考文獻：

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