馬錢子膨化炮制工藝優選

朱 舟，伍朝君 ，陳 玲

（1.重慶市中醫院，重慶 400021； 2.四川省樂山職業技術學院，四川 樂山 614000）

馬錢子為馬錢科植物馬錢 Strychnos nuxvomica L.的干燥成熟種子，是有毒中藥，臨床一般用其炮制品[1-2]。我院的醫院制劑黃馬酒治療癌痛起效快，效果明顯。馬錢子為方中主藥，入藥時用砂燙品，為降低馬錢子的毒性而不降低療效，采用膨化法炮制馬錢子。與砂燙法相比，膨化法操作簡便，只需掌握壓力和時間即可，既縮短了加工周期，又避免了砂燙法煙熏、灰塵及揮發氣體對操作人員身體的影響。本研究中采用膨化法炮制馬錢子，并優化炮制工藝。現報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；AE100型電子分析天平（瑞士 Mettler Toledo公司）；膨化設備為自行設計委托加工的鐵質容器，容積3.0 L，包括進料斗、膨化器、壓力調節計、溫度計、接收器等。

試藥：馬錢子(重慶市藥材公司，批號為20160321），經重慶市中醫院藥劑科中藥庫房主管藥師樊小明鑒定為正品；藥品馬錢子砂燙炮制品，由以上生馬錢子按2015年版《中國藥典（一部）》要求，由重慶市中醫院實驗室自行炮制（批號為20160620）；士的寧氮氧化物對照品（純度為97.2%，批號為652154-10-4）、馬錢子堿氮氧化物對照品（純度為 96.3% ，批號為 1421-86-9），均購自德國KarlsruheFRG公司；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸水（我院藥劑科自制）。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：LichrospherC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A） -0.2% 乙酸溶液 -0.2% 三乙胺（B），梯度洗脫(0 min、8%A，15 min、92%A，30 min、79%A，60 min、40%A)；流速：1 mL ／min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。在此色譜條件下，待測成分之間皆可達到基線分離。色譜圖見圖1。

2.1.2 溶液制備

稱取馬錢子堿氮氧化物對照品、士的寧氮氧化物對照品各適量，精密稱定，用甲醇溶解并定容，得質量濃度分別為 107.233 1，110.452 3 μg ／mL 的混合對照品溶液，備用。稱取馬錢子膨化藥材粉末1 g，精密稱定，置150 mL圓底燒瓶中，加 50 mL 氫氧化鈉 -甲醇（3∶20，V／V），水浴保持微沸2 h，濾過，置50 mL容量瓶中，用溶劑定容，即得供試品溶液。

2.1.3 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：分別吸取對照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，進樣，按擬訂色譜條件測定，以進樣量（μg，C）對峰面積（A）進行線性回歸。結果士的寧氮氧化物絕對進樣量在0.12～0.73 μg范圍內與峰面積線性關系良好，回歸方程為 A1＝2 352.542 3 C1-11.993 3，r＝0.999 5（n＝6）；馬錢子堿氮氧化物絕對進樣量在 0.15～0.67 μg范圍內與峰面積線性關系良好，回歸方程為 A2＝2 243.156 7 C2-8.925 3，r＝0.999 7（n ＝6）。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10 μL，連續進樣6次，依法測定。結果峰面積的 RSD士的寧氮氧化物為 0.52% （n＝6），馬錢子堿氮氧化物為 0.66%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：室溫下取供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h時各進樣10 μL，依法測定。結果士的寧氮氧化物、馬錢子堿氮氧化物峰面積的 RSD分別為0.74%，0.80%（n＝5），表明室溫下供試品溶液放置8 h內穩定。

重復性試驗：取同一批膨化藥材樣品，依法制備6份供試品溶液，分別進樣10 μL，依法測定。結果士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物峰面積的 RSD分別為2.50%和 2.70% （n＝ 6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取藥材粉末0.5 g，精密稱定，共9份，加入一定量的混合對照品溶液，依法制備供試品溶液，進樣測定。結果士的寧氮氧化物的平均回收率為98.23% ，RSD 為 1.35% （n＝9）；馬錢子堿氮氧化物的平均回收率為 97.22%，RSD 為 1.12%（n＝9）。

2.1.4 樣品含量測定

取馬錢子膨化品適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣，測定含量。

2.2 單因素考察

根據預試驗結果，以加熱后的壓強和保溫時間為考察因素[3]初步篩選。結果保溫時間設為2 h，則壓強為0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 kg ／cm2時，士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物含量和分別為0.0021，0.0038，0.005 0，0.006 3，0.005 0，0.004 2，0.003 5 mg ／g；膨化壓強設為 1.5 kg／cm2，則保溫時間為 2，4，6，8h 時，2 種氮氧化物含量和分別為 0.0050，0.0062，0.0052，0.0042mg／g。

2.3 正交試驗

因素與水平：根據2.2項下試驗結果，以壓強為因素A、保溫時間為因素B設計試驗因素水平表（表1），并根據因素水平條件選用 L9（34）正交試驗表安排試驗，平行操作2次。將馬錢子裝入膨化機內，以適當火力加熱，以40 r／min的速率勻速轉動膨化器，待升溫至所需壓力，保溫一定時間后，將馬錢子膨化（瞬間釋壓至常壓）置接收器內冷卻，粉碎，過40目篩，備用。

表1 因素水平表

正交試驗結果與分析：按上述 L9（34）正交試驗表進行試驗，結果見表2和表3。可見，保溫時間的影響程度大于壓強；方差分析結果表明，保溫時間對二者的含量有非常顯著的影響，而壓力對其也有顯著影響。極差分析與方差分析結果相一致。綜合分析，最佳膨化條件為A2B2，即膨化壓強為 2.0 kg ／cm2，膨化保溫時間為 4 min。

表2 L9(34)正交試驗結果(n＝9)

表3 方差分析結果

2.4 最佳工藝驗證

取生馬錢子3份，按上述最佳工藝膨化炮制，冷卻，粉碎，過40目篩。各取1 g膨化粉末制成供試品溶液，依法分別測定士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物含量，并與生品及砂炒品進行比較[4]，馬錢子砂炒品按2015年版《中國藥典（一部）》方法砂炒，取凈馬錢子，砂炒至鼓起，去毛。結果見表4。可見，士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物的含量均處于較高水平，且較之生品及砂炒品均有較大增加，說明該工藝穩定可行。

表4 馬錢子炮制后士的寧氮氧化物及馬錢子堿氮氧化物含量比較（mg）

3 討論

中藥提取工藝的相對落后，已嚴重影響了中藥質量及臨床療效。中藥材膨化技術的原理是將中藥材置膨化機中，隨著溫度、壓強的升高，中藥材內部的水分子呈過熱狀態，當達到一定高壓后瞬間變成常壓，中藥材內部過熱狀態的水分子同時汽化而發生爆炸，巨大的膨化壓力改變了中藥材的外部形態和內部結構，使其膨脹疏松，形成海綿狀空心網狀結構，使淀粉粒糊化，細胞壁破裂，細胞群散離，草酸鈣結晶破碎為小方晶和砂晶，導管斷裂變短[5]。馬錢子膨化后質地松脆，硬度顯著降低，利于有效成分的浸出，經試驗驗證，膨化法比傳統砂炒法更有利于士的寧氮氧化物和馬錢子堿氮氧化物的轉化。由藥效學試驗結果可知，膨化馬錢子加水煮沸的濃縮液與傳統炮制品2次水煎液鎮痛作用相同[6-7]。可見，膨化技術可顯著提高煎出效能和浸提速率。

根據氣體熱力學的查理定律可知，在質量和體積一定時，壓強與溫度呈正相關，當在某一壓力時氣體的溫度會維持在相應水平不變。本試驗中膨化機機艙密閉，氣體質量和體積不能改變，故機艙內溫度由壓強決定，故設計正交試驗時為簡便實用起見，僅考慮易控制的壓力與時間。2015年版《中國藥典（一部）》規定，馬錢子采用砂炒法炮制，因藥材經高溫處理后質地疏松，利于煎出有效成分，且有減毒作用[8]。但砂炒不易把握火候[9-10]，往往因為以砂為媒介導致受熱不均，出現一部分藥材已發生炭化，而另一部分藥材卻炮制不徹底的現象。膨化炮制法與砂炒法相比較，操作更簡便，只需掌握壓力和時間即可，既縮短了加工周期，又避免了砂炒法煙熏、灰塵及揮發氣體對操作人員身體的影響。該工藝不僅降低了馬錢子的毒性，而且提高了有效成分的浸提效率，更有利于調劑制劑。