消痤膠囊提取工藝優選

楊振萍，薛 紅 ，呼延杰，白 妮，劉喜強

（陜西省延安市中醫醫院，陜西 延安 716000）

消痤飲為我院皮膚科協定處方，具有清熱、解毒、涼 血、宣肺化痰及散結功效，臨床用于治療青年痤瘡及脂溢性皮炎、糠秕孢子性毛囊炎等癥。為方便攜帶和服用，本院制劑室擬將此協定處方制備為膠囊劑。本試驗中采用正交試驗法，考察水提工藝中的加水量、煎煮次數及煎煮時間對消痤膠囊水提物指標性成分綠原酸含量及干浸膏得率的影響，以確定最佳提取工藝。現報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；液體真空濃縮煎藥機、十功能自動兩煎煎藥機（北京東華原醫療設備有限責任公司）。

試藥：綠原酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110753-200413，供含量測定用）；消痤飲（延安市中醫醫院協定處方）；甲醇、乙腈均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

將消痤膠囊制劑處方水提物室溫靜置過夜（12 h以上），濾過，取上清液，減壓濃縮，壓力0.7 kPa，溫度45℃。觀察分離筒，待分離筒液面無變化時取出濃縮膽，稱定質量，連續多次，直到質量恒定，浸膏粉即為樣品。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-Pack VP-ODS柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -5% 醋酸溶液（10 ∶90，V／V）；流速：0.8 mL ／min；檢測波長：328 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

取綠原酸對照品5 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至50 mL，搖勻，即得對照品溶液(100 μg ／mL)。取樣品約 1 g，精密稱定，置 30 mL錐形瓶中，加入50%甲醇 30 mL，超聲處理 10 min，濾過，用50%甲醇補足30 mL，搖勻，即得供試品溶液。取按上述工藝條件制備不含金銀花的干浸膏粉，取約1 g，精密稱定，置30 mL錐形瓶中，加50%甲醇30 mL，超聲處理10 min，濾過，用50%甲醇補足30 mL，搖勻，即得空白樣品溶液。

2.2.3 方法學考察

系統適用性試驗及空白干擾試驗：精密吸取2.2.2項下對照品溶液、供試品溶液、對照品+供試品溶液、空白樣品溶液各10 μL，分別進樣，記錄色譜圖，詳見圖1。結果表明，樣品中的其他組分對綠原酸的測定無干擾。

線性關系考察：取對照品溶液，制成質量濃度為140.00，70.00，35.00，17.50，8.75 μg ／mL 的系列對照品溶液，分別進樣，以峰面積為縱坐標（Y）、進樣量為橫坐標（X，μg）進行線性回歸，得回歸方程 Y＝10.911X-7.5417，R2＝0.999 9（n ＝5）。結果表明，綠原酸進樣量在8.75～140.00 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取高、中、低質量濃度對照品溶液，分別進樣，記錄峰面積，同一樣品1 d內重復進樣6次，同樣3個質量濃度的對照品溶液連續測定6 d，計算含量。結果日內、日間精密度的 RSD分別為1.17%，0.14%，0.70% 和 1.15% ，0.48% ，1.25% （n ＝ 6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：室溫下取同一供試品溶液，24 h內連續進樣6次，記錄峰面積。結果的 RSD為0.15%（n＝6），表明供試品溶液室溫下在24 h內穩定。

重復性試驗：取樣品適量，依法制備供試品溶液，連續進樣6次，記錄峰面積。結果的 RSD為0.12%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品 0.6 mL，加35 μg／mL 的綠原酸對照品 0.3 mL，依法制備供試品溶液混合進樣10 μL，進樣6次。結果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗結果（n＝6）

2.3 正交試驗

正交試驗設計、結果及分析見表2至表4。通過分析，水提工藝最佳組合為A2B1C2或A1B3C3，即加8倍量水，煎煮2次，每次1 h；或加10倍量水，煎煮1次，每次2 h。3種因素的影響強度雖無顯著差異，但煎煮次數影響明顯大于其他2種因素。以總浸膏得率為考察指標的最佳組合為A3B1C3，考慮到水提物組方質地較輕，且組方中指標性成分綠原酸受熱時間過長會被破壞，故采用A2B1C2方案作為消痤膠囊處方的水提工藝。

表2 因素水平表

表3 正交試驗結果

表4 綠原酸得率方差分析結果

2.4 驗證試驗

按制劑處方比例放大100倍，稱取3份藥材，按照試驗篩選的最佳工藝，即加8倍水量，提取2次，每次1 h，進行驗證。結果3批中試樣品中綠原酸含量分別為 1.64，1.68，1.63 mg ／g(生藥)，干浸膏粉得率分別為12.99% ，13.34% ，12.41% 。可見，優選的最佳提取工藝合理，具有較好的穩定性。

3 討論

消痤膠囊制備處方來源于醫院皮膚科使用近20年的協定處方，由犀角地黃湯合枇杷清肺飲加減，通過解毒散結清宣肺熱，清熱涼血清胃熱而起到治療作用，方中君藥金銀花有清熱解毒、散結消癰功效[1-4]。金銀花具有抑菌和抗炎作用，對金黃色葡萄球菌有一定抑制作用，若和連翹合用，抗菌范圍還可互補[5]。本試驗中以金銀花有效成分綠原酸含量和干浸膏粉得率為考察指標[6-11]，確定消痤膠囊水提物最佳工藝，方法簡單，經試驗及小批量生產，產品穩定性好，質量可控，可為制劑生產提供一定參考。