高效液相色譜法同時測定食品中的3種抗氧化劑

岑琴　趙卉　胡夢坤

摘要：為提高食品中抗氧化劑BHA，BHT，TBHQ的檢測效率，利用固相萃取-超高效液相色譜進行檢測試驗。結果表明：3種抗氧化劑在1.6～160 mg/L范圍內線性關系良好，相關系數均大于0.99，方法檢出限分別為10，10，4 mg/kg；添加水平為10倍檢出限，回收率為96.0 %～101.4 %，相對標準偏差為0.9 %～3.9 %。

關鍵詞：超高效液相色譜；檢測方法；檢出限；抗氧化劑

中圖分類號：TS207.3 文獻標識碼：A 文章編號：1674-1161（2019）02-0049-03

叔丁基對羥基茴香醚（BHA）和2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）是食品加工行業較常使用的抗氧化劑，將其添加于油脂和含脂肪高食品中，可穩定食品中的營養成分和脂溶性維生素。特丁基對苯二酚（TBHQ）是一種新型脂溶性抗氧化劑，低毒，用量少，抗氧化能力大于BHA和BHT，在延遲食品中油脂氧化變質方面應用廣泛。采用固相萃取凈化結合超高效液相色譜法同時測定食品中的BHA，BHT和TBHQ，簡化樣品前處理方法，提高結果準確性和靈敏度，旨為為日常檢測及檢驗方法驗證提供適用方法。

1 材料與方法

1.1 試劑

叔丁基對羥基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）、特丁基對苯二酚（TBHQ）混合標準溶液

（1 000 mg/L），由美國O2Si生產；甲醇（色譜純）由美國fisher公司生產；乙腈（色譜純）由美國fisher公司生產；正己烷（分析純）由國藥試劑有限公司生產；甲酸（分析純）由天津試劑廠生產；色譜用水為符合《GB/T 6682-2008》規定的一級水。

1.2 儀器與設備

Waters H-Class超高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器）：美國 waters公司；色譜柱Waters BEH RP18 （2.1 mm ×50 mm，1.7 μm）；電子天平：北京賽多利斯儀器系統有限公司；超純水制備系統：美國Milli-Q公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液配制 移取適量體積的混合標準溶液，稀釋成濃度為20，50，100，200，400 mg/L的標準工作液。

1.3.2 樣品前處理 準確稱取1.0 g（精確至0.01 g）試樣于離心管中，加入5 mL乙腈飽和的正己烷溶液，渦旋1 min充分混勻，浸泡10 min。加入5 mL飽和氯化鈉溶液，用5 mL正己烷飽和的乙腈溶液渦旋2 min，3 000 r/min離心5 min，收集乙腈層于試管中。重復提取2次，收集3次提取液，加入0.1 %甲酸溶液調節pH為4，待凈化。

1.3.3 凈化 在C18固相萃取柱中裝入2 g無水硫酸鈉，用5 mL甲醇活化萃取柱，再以5 mL乙腈平衡，棄去流出液。將所有提取液傾入柱中，棄去流出液，再以5 mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脫。收集所有洗脫液，旋蒸至干，加2 mL乙腈定容，過0.22 μm有機濾膜，待測。

1.3.4 色譜條件 流動相的選擇：選擇0.5 %甲酸水溶液及甲醇溶液為流動相，配合梯度洗脫。流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣量：0.4 μL。

對3種抗氧化劑在190～400 nm之間進行全波長掃描，確定檢測波長為280 nm。為實現3種抗氧化劑完全分離，采用梯度洗脫方式，具體條件見表1。

在以上色譜條件下進樣0.4 μL，以色譜峰面積外標法定量，色譜如圖1所示。

1.3.5 方法回收率及精密度 為考察方法的可靠性，對3種合成著色劑進行加標回收率測定。將加標量定為檢出限（10，4 mg/kg）及10倍檢出限（100，40 mg/kg），按照1.3.2提取方法提取6份，計算回收率及精密度。

2 結果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

噪聲高3倍（S/N=3）相對應的濃度為檢出限。線性方程、相關系數、線性范圍及檢出限見表2。

從表2可以看出，3種抗氧化劑在線性范圍內的線性關系良好。

2.2 方法回收率及精密度

通過加標回收率試驗，對方法進行回收率和精密度測定，結果見表3。

由表3可知：抗氧化劑的平均回收率為96.0%～101.4%，相對標準偏差為0.9%～3.9%（n=6），滿足《GB/T27404-2008實驗室質量控制規范 食品理化檢測》對精密度和準確度的要求。

3 結論與討論

建立固相萃取凈化結合超高效液相色譜-二極管陣列檢測器同時測定食品中3種抗氧化劑（BHA、BHT、TBHQ）的分析方法。樣品用正己烷溶解后用乙腈提取，經C18固相萃取小柱凈化后，以0.5 %甲酸水溶液-甲醇為流動相，采用Waters ACQUITY UPLC BEH RP18色譜柱實現待測物分離，以二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。前處理簡單，回收率高，精密度好，檢測速度快，適用于食品中此3種抗氧化劑的檢測。

建立的UPLC法具有以下特點：1） 分析速度快。分離3種抗氧劑僅需4.2 min，而國家標準《GB5009.32-2016食品安全國家標準 食品中9種抗氧化劑的測定》中第一法高效液相色譜法測定需30 min，其他方法需時大于15 min。2） 抗氧化劑分離效果好。由于采用小顆粒填充的短柱，因此具有較高的柱效和較低擴散體積。

參考文獻

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