細(xì)胞色素P450與基質(zhì)金屬蛋白酶-26在宮頸癌中的表達(dá)

齊彩霞

（山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所，山西大同037009）

宮頸癌（cervical cancer）占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的半數(shù)以上,嚴(yán)重威脅著婦女的健康與生命。病理學(xué)上宮頸癌的形成要經(jīng)歷宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）階段，此階段如果病情得不到控制，癌細(xì)胞進(jìn)而發(fā)生侵潤、轉(zhuǎn)移，使得病情很快進(jìn)展為晚期。因此真正能夠從基因水平上來了解腫瘤的形成與發(fā)展，才能有效的降低宮頸癌的發(fā)病率。

國內(nèi)外已有的研究結(jié)果顯示細(xì)胞色素(cytochrome)P450（CYP1A1）的基因與腫瘤的形成密切相關(guān)[1]。它是主要存在于人體肝臟內(nèi)的一類能夠代謝環(huán)境中有毒物質(zhì)的酶類。環(huán)境中的化學(xué)致癌物進(jìn)入人體細(xì)胞后，經(jīng)CYP1A1的氧化形成親電子化合物，與細(xì)胞中的大分子物質(zhì)（如DNA、蛋白質(zhì)等）形成復(fù)合物，導(dǎo)致癌基因與抑癌基因發(fā)生突變，形成腫瘤。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，進(jìn)一步引起腫瘤的侵潤與轉(zhuǎn)移，從而增加了患者的死亡率。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)的方法分別檢測(cè)CYP1A1與MMP-26在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌中的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討二者與宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

隨機(jī)選取大同市第三人民醫(yī)院2015-2016存檔的經(jīng)病理證實(shí)的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組織46例(其中病理分級(jí)CINⅠ級(jí)12例，CINⅡ級(jí)15例，CINⅢ級(jí)19例)、病理診斷明確的宮頸癌組織29例（術(shù)前均未進(jìn)行化療及放療）、以及因子宮肌瘤行子宮全切術(shù)的正常宮頸組織35例石蠟標(biāo)本作為對(duì)照組。

1.2 主要試劑

CYP1A1、MMP-26抗體購自香港Abcam公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗、免疫組化試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P染色法分別檢測(cè)CYP1A1與MMP-26在組織中的表達(dá)情況。所有石蠟標(biāo)本連續(xù)切為厚度4 μm的薄片；二甲苯脫蠟，100%、95%、75%乙醇水化；PBS沖洗；按免疫組化試劑盒操作流程進(jìn)行染色；然后DAB顯色；蘇木素復(fù)染；干燥透明后，中性樹膠封片。

1.4 陽性結(jié)果判定

CYP1A1、MMP-26陽性表達(dá)均位于細(xì)胞漿，如果胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒就定義為陽性。計(jì)數(shù)出現(xiàn)陽性表達(dá)的標(biāo)本數(shù)量得出陽性率；同時(shí)利用圖像分析系統(tǒng)對(duì)陽性細(xì)胞進(jìn)行灰度值的檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，利用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行各組間陽性率的比較，利用q檢驗(yàn)進(jìn)行各組間灰度值的比較。

2 結(jié)果

2.1 CYP1A1與MMP-26在宮頸癌組織中的表達(dá)

見圖1～2。

圖1 CYP1A1在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)結(jié)果（×400）

圖2 MMP-26在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)結(jié)果（×400）

2.2 CYP1A1與MMP-26在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)

見圖3～4。

圖3 CYP1A1在宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅢ級(jí)）中的陽性表達(dá)結(jié)果（×400）

圖4 MMP-26在宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅢ級(jí)）中的陽性表達(dá)結(jié)果（×400）

2.3 CYP1A1與MMP-26在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌組織中陽性率的表達(dá)情況

見表1。

表1 CYP1A1、MMP-26在3組標(biāo)本中陽性率的表達(dá)

2.4 CYP1A1與MMP-26在不同病理分級(jí)的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)

見表2。

表2 CYP1A1、MMP-26在不同級(jí)別CIN中陽性率的表達(dá)

2.5 CYP1A1與MMP-26在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌中陽性表達(dá)灰度值的檢測(cè)

見表3。

表3 CYP1A1與MMP-26在三組標(biāo)本中陽性表達(dá)的灰度值

2.6 CYP1A1與MMP-26在不同病理分級(jí)的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中陽性表達(dá)灰度值的檢測(cè)

見表4。

表4 CYP1A1與MMP-26在不同病理級(jí)別CIN中陽性表達(dá)的灰度值

3 討論

近幾年來宮頸癌的發(fā)病率越來越高，而且發(fā)病年齡日趨年輕化[2]。其主要原因除了與病毒感染、性生活過早或紊亂、早婚、早產(chǎn)、多產(chǎn)等因素有關(guān)，還與環(huán)境因素有很密切的關(guān)系。多環(huán)芳香烴（PAH）是引起環(huán)境污染的主要化學(xué)成分之一，它進(jìn)入人體以后主要經(jīng)過細(xì)胞色素P450（CYP1A1）的代謝進(jìn)而形成致癌物，導(dǎo)致腫瘤形成。有關(guān)化學(xué)致癌物方面的研究顯示，環(huán)境中的一些有毒化合物可以誘導(dǎo)CYP1A1的表達(dá)，CYP1A1表達(dá)增強(qiáng)與腫瘤的發(fā)生具有相關(guān)性[3]。腫瘤形成以后就具備了向正常組織侵潤和轉(zhuǎn)移的能力，但這種能力的前提條件是腫瘤細(xì)胞必須能夠破壞正常細(xì)胞的基底膜。眾多的實(shí)驗(yàn)研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）類的新成員MMP-26，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白成分，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向正常組織的侵潤與轉(zhuǎn)移[4]。

本實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用免疫組化的方法同時(shí)檢測(cè)CYP1A1與MMP-6在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）、及宮頸癌中的表達(dá)情況。二者在3組標(biāo)本中均有陽性表達(dá)，CIN組與宮頸癌組的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組，宮頸癌組與CIN組比較也有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)我們檢測(cè)了不同病理級(jí)別CIN中兩種蛋白的表達(dá)。CINⅢ中的陽性表達(dá)明顯高于CINⅡ級(jí)、CINⅠ級(jí)，而CINⅡ級(jí)與CINⅠ級(jí)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CINⅠ級(jí)與CINⅡ級(jí)由于病變較局限，細(xì)胞異型性小，CYP1A1與MMP-26表達(dá)較低，此時(shí)病變多能逆轉(zhuǎn)。CINⅢ中二者表達(dá)明顯增強(qiáng)，組織細(xì)胞異型性大，核分裂像多，原位癌形成。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在原位癌形成時(shí)期CYP1A1與MMP-26表達(dá)明顯上調(diào),提示二者有可能參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。Mohammed等研究證實(shí)，利用干擾技術(shù)能夠抑制CYP1A1表達(dá)，進(jìn)而減弱細(xì)胞生存能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[5]，改善預(yù)后。因此在宮頸癌的臨床預(yù)防與治療方面，可以預(yù)先進(jìn)行CYP1A1及MMP-26的相關(guān)檢測(cè)，可將宮頸癌控制在預(yù)防階段[6]。