費休氏容量滴定法測定注射用重組人干擾素α2a中水含量的測量不確定度評定

馮雪，李野，劉沛衡，耿雪瑩，趙麗佳，劉華，柳春紅，楊紅育

（長春生物制品研究所有限責任公司，吉林長春 130012）

測量不確定度是與測量結果關聯的一個參數，用于表征合理賦予被測量值的分散性。評定檢驗結果可信度，可比性和可接受性的重要指標。隨著國際貿易及科學技術的發展，國內外實驗室對測量不確定度的評定日益重視[1]。

水分是注射用重組人干擾素α2a的一項重要指標，對藥品的質量有很大影響。本實驗采用《中國藥典》2015版[2]水分測定法第一法中容量滴定法測定。結合實驗室實際情況，參照《測量不確定度評定與表示》（JJF1059.1-2012）規范[3]，對測量過程中的不確定度進行評定。

1 實驗部分

1.1 主要儀器

V30水分測定儀（METTLER TOLEDO）、Stromboli加熱爐樣品轉換器（METTLER TOLEDO）、XS205型電子天平（METTLER TOLEDO）。

1.2 試劑

無水甲醇（國藥集團化學試劑有限公司）、1mg/mL費休氏試液（Merck）、固體標準水（Merck）。

1.3 實驗樣品

注射用重組人干擾素α2a，長春生物制品研究所有限責任公司生產。

1.4 實驗方法

1.4.1 操作條件[4]

加熱爐樣品轉換器加熱溫度：150℃±2℃；加熱爐樣品轉換器加熱時間：10min；費休氏試液滴定度：1mg/mL。

1.4.2 費休氏試液滴定度的標定

啟動儀器，將水分測定儀調至平衡狀態，用10μL微量進樣器量取經稱量的10μL純化水（精確至0.01mg）加入到滴定杯中，將質量輸入到水分儀中，標定出費休氏試液的滴定度。

1.4.3 檢驗滴定度標定的準確性

將水分測定儀及卡氏干燥爐調至樣品測定狀態，用電子天平稱量固體標準水0.1g（精確至0.01mg），將樣品密封后置于卡氏干燥爐上，在水分儀中輸入樣品質量，測定出固體標準水的水含量。將測定結果利用統計學方法與標示量進行比較分析。

1.4.4 樣品測定

將水分測定儀及卡氏干燥爐調至樣品測定狀態，用電子天平稱量樣品適量（精確至0.01mg）將樣品密封后置于卡氏干燥爐上，在水分儀中輸入樣品質量，測定出樣品的水含量。

2 不確定度來源分析[5-6]

從測定過程分析，測量不確定度來源主要有以下幾個方面：（1）標定費休氏試劑滴定度引入的不確定度；（2）樣品稱量及測定重復性引入的不確定度；（3）示值修約引入的不確定度。依據JJF1059.1-2012規范[3]，分析不確定度性質可知，重復性測量引起的不確定度采用A類不確定度評定，其余采用B類不確定度評定。具體來源見圖1。

圖1 不確定度來源

3 結果與討論

3.1 滴定度標定準確性的檢驗

在相同條件下，對費休氏試液的滴定度進行標定，連續標定3次，取3次標定的平均值，即為本次費休氏試液的滴定度，結果見表1。

表1 滴定度標定結果

表2 固體標準水的水含量測定結果

檢驗假設H0：μ=1%，H1：μ≠1%

由樣本觀測值算得 x（標準水）=0.996%，S2（標準水）=0.00000005，

由t分布表可得，t0.025（9）=2.262，|t|=0.57＜t0.025（9），故接受H0，即表明測定的固體標準水的水含量與標示量無顯著差異，即滴定度的標定結果可用于樣品的測定。

3.2 不確定度評定

3.2.1 標定費休氏試劑滴定度引入的不確定度

本次實驗使用10μL純化水標定滴定度，不確定度主要為重復性測定及純化水稱量引入的不確定度。實驗使用分度值d=0.01mg的電子天平稱量，稱量引入的不確定度主要來源天平校準及稱量重復性。

（1）重復性測定引入的不確定度（A類）

滴定度共測定3次，其標準偏差S=0.0021875，則其不確定度為，相對不確定度

（2）天平校準引入的不確定度（B類）

10μL微量進樣器及10μL純化水的總質量在5～20g，根據天平有效校準證書，在該范圍內，天平的最大允許誤差為±0.10mg，服從均勻分布，則其不確定度為

（3）稱量重復性引入的不確定度（B類）

根據天平有效校準證書，在50g以內，重復性誤差的最大允許誤差為±0.15mg，服從均勻分布，則其不確定度在稱量時，采用減重法，即稱量需進行兩次，應記兩次不確定度。10μL純化水的質量均值為10.09mg，則天平稱量帶來的不確定度見公式（1），相對不確定度見公式（2）：

3.2.2 樣品重復性測定引入的不確定度（A類）

為獲得樣品重復性測定的不確定分量，對樣品進行了10次獨立測定，測定結果見表3。

表3 樣品水含量測定結果

3.2.3 樣品質量稱量引入的不確定度（B類）

實驗使用分度值d=0.01mg的電子天平稱量，稱取的樣品質量在50～100mg，稱量引入的不確定度來源于兩部分：（1）天平的校準，樣品質量及卡氏樣品瓶的總質量在5～20g，根據天平有效校準證書，在該范圍內，天平的最大允許誤差為±0.10mg，服從均勻分布，則其不確定度0.0577mg；（2）稱量重復性，根據天平有效校準證書，在50g以內，重復性誤差的最大允許誤差為±0.15mg，服從均勻分布，則其不確定度0.0866mg。在稱量時，采用減重法，即稱量需進行兩次，應記兩次不確定度。樣品質量均值為73.12mg，則天平稱量帶來的不確定度見公式（5），相對不確定度見公式（6）：

3.2.4 示值俢約引入的不確定度（B類）

本實驗水分含量結果精確到0.01%，因此，示值修約誤差區間為0.01%，區間半寬為0.005%，按照均勻分布計算，示值修約引入的不確定度為相對不確定度為

3.3 合成相對標準不確定度

分別代入上述不確定度分量，按照數值修約只進不舍的原則，合成相對標準不確定度urel（合成）可按下式計算。

3.4 擴展不確定度

當置信水平為95%時，包含因子k為2，擴展不確定度 u=k×urel（合成）×x（樣品）=2×0.0203×1.6%=0.065%。

3.5 分析結果的表示

費休氏容量滴定法測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，平行測定10次的算術平均值為1.6%，其結果可表示為1.6%±0.065%（k=2）。

4 結論

本文討論了測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量過程中各影響因素引入的不確定度分量，通過重復測定，評定了費休氏法測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量的標準不確定度及擴展不確定度。計算結果顯示，標定滴定度及樣品重復測定引入的不確定度是造成水分含量測定結果不確定度的主要來源。因此，可通過選用靈敏度高的天平降低不確定度。