根結線蟲活體染色條件的優化

高英健，鄭雨杭，張琴林，侯鈺穎，李 萌，李鴻信，方天一，呂偉興，趙文超，王紹輝

(北京農學院 植物科學技術學院/農業應用新技術北京市重點實驗室，北京 102206)

根結線蟲(Root-knot Nematode, RKN)是植物根系內寄生線蟲，包括爪哇根結線蟲(Meloidogynejavanica)，南方根結線蟲(Meloidogyneincongnita)，花生根結線蟲(MeloidogynehaplaChitwood)和北方根結線蟲(Meloidogynehapla)等，第二階段幼蟲(J2s)從土壤中的卵孵化，必須找到合適的宿主，機械穿透植物根部，并遷移到維管束組織以完成其生命周期，給生產帶來很大的損失[1]。

近年來，關于根結線蟲染色方法的報道有很多，如酸性品紅染色觀察根組織[2];甲苯胺藍[3]或番紅-固綠對染染色觀察巨細胞[4];但是這些染色方式均針對于死亡的線蟲。對活體幼蟲標記所用的染料有異硫氰酸熒光素[5]和熒光素二乙酸酯[6]。本文作者選用的是異硫氰酸熒光素，異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)是目前應用最廣泛的熒光素，最大吸收光波長為490～495 nm，最大發射光波長520～530 nm，在藍光或紫外光照射下發出黃綠色熒光。

在之前的研究中，FITC對活體線蟲的標記緩沖液的濃度過高，造成線蟲的死亡率較高，本文作者對FITC染液的濃度進行了優化，提升了線蟲的存活率，可為侵染試驗提供更有活力的熒光標記線蟲。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和主要試劑設備

試驗所采用的材料為南方根結線蟲(Meloidogyneincognita)和番茄CM野生型株系(Solanumlycopersicumcv Castlemart)。

試驗中所需的試劑：FITC、章魚胺鹽酸鹽、間苯二酚、Sucrose、MS Powder、NaOH、植物凝膠、Pluronic凝膠。

試驗中所需的設備：熒光體式顯微鏡(ZEISS，Discovery.V20)、恒溫培養箱、光照培養箱、電子天平、高溫滅菌鍋。

1.2 試驗方法

1.2.1 南方根結線蟲的繁育 根結線蟲自繁方法如下：用于繁殖根結線蟲的株系為易感株系。……